玉米淀粉分支酶基因的克隆与RNAi表达载体的构建 被引量：6

1

作者 郭新梅 张晓东 +2 位作者 梁荣奇 杨凤萍 陈耀锋 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2175-2180,共6页

利用网络数据库http://jura.wi.mit.edu/bioc/siRNAext/,确定玉米淀粉分支酶SBEⅡb的部分基因序列作为RNAi的目标序列,通过RT-PCR方法从玉米自交系‘综31’中分别成功克隆出了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因的部分序列及其启动子序列,从大肠... 利用网络数据库http://jura.wi.mit.edu/bioc/siRNAext/,确定玉米淀粉分支酶SBEⅡb的部分基因序列作为RNAi的目标序列,通过RT-PCR方法从玉米自交系‘综31’中分别成功克隆出了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因的部分序列及其启动子序列,从大肠杆菌中成功克隆了木糖异构酶基因xylA作为筛选标记,构建了含有35S驱动的木糖异构酶基因和sbeⅡb启动子驱动的含有sbeⅡb目标序列的反向重复序列的表达载体pBAC413,并对玉米自交系实施转化。经PCR检测转基因玉米再生植株,初步判定目的序列已经成功整合到玉米再生植株的基因组中。 展开更多

关键词 玉米 淀粉分支酶 rnai表达载体 直链淀粉

在线阅读 下载PDF 职称材料

‘小白杏’自交不亲和SFB基因RNAi表达载体的构建 被引量：2

2

作者 刘海楠 冯建荣 +3 位作者 罗明 刘小芳 李文慧 白茹 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期148-155,共8页

【目的】应用RNA干扰(RNAi)技术在分子水平调控杏自交不亲和性状,为培育自交亲和杏品种奠定基础。【方法】基于南疆自交不亲和杏品种‘小白杏’(Prunus armeniaca‘Xiaobaixing’)花粉决定子SFB(S-haplotype-specific Fbox protein)基因... 【目的】应用RNA干扰(RNAi)技术在分子水平调控杏自交不亲和性状,为培育自交亲和杏品种奠定基础。【方法】基于南疆自交不亲和杏品种‘小白杏’(Prunus armeniaca‘Xiaobaixing’)花粉决定子SFB(S-haplotype-specific Fbox protein)基因3’端c DNA全长序列,选取SFB基因变异区上游距起始密码子61 bp处、大小为29 bp的片段作为干扰序列,棉花基因组DNA 242 bp的序列作为间隔片段,利用融合PCR(Fusion PCR)构建SFB基因发卡结构(intron-containing hairpin RNA,ihp RNA),再酶切连接到植物表达载体p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII上,构建SFB基因RNAi表达载体;用冻融转化法将重组质粒转化至农杆菌菌株(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中。【结果】测序结果表明臂长29 bp、茎环242 bp的SFB基因ihp RNA结构融合成功,双酶切检验和PCR验证结果表明,该结构正确地插入p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII的启动子和终止子之间,说明SFB基因的RNAi表达载体p CAMBIA-RNAi-SFB构建成功;PCR验证和测序结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌LBA4404中。【结论】研究结果表明,应用融合PCR结合酶切连接的方法构建SFB基因的RNAi表达载体是可行的,为RNAi技术在果树自交不亲和性状改良上的应用创造了条件。 展开更多

关键词 自交不亲和 SFB基因 rnai表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

人工合成靶序列快速构建多靶标RNAi表达载体 被引量：1

3

作者 张秀春 吴坤鑫 +1 位作者 赵平娟 刘志昕 《广东农业科学》 CAS 2016年第7期81-86,共6页

番木瓜环斑病毒(PRSV)正引起番木瓜毁灭性严重病害,番木瓜叶扭曲花叶病毒(PLDMV)也在威胁着目前转基因番木瓜的推广和应用。通过人工合成包含PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和HcPro基因多个保守区域的靶序列作为模板,扩增两条长短不同但大部... 番木瓜环斑病毒(PRSV)正引起番木瓜毁灭性严重病害,番木瓜叶扭曲花叶病毒(PLDMV)也在威胁着目前转基因番木瓜的推广和应用。通过人工合成包含PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和HcPro基因多个保守区域的靶序列作为模板,扩增两条长短不同但大部分重叠的靶序列,并通过引物设计时添加的特定酶切位点两个靶序列反向连接,形成以长靶序列的5’一部分序列作为发夹结构的环,不需要另外插入内含子序列的反向重复发夹结构的RNAi表达载体pPTN-LS。该方法构建的RNAi表达载体,不仅具有快速、稳定性高等优点,还能同时靶标PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和Hc-Pro基因多个保守区域的靶序列,能有效提高沉默效率,为利用RNAi技术培育广谱、高效、稳定且安全性高,同时抗PRSV和PLDMV病毒病的转基因番木瓜新种质的奠定基础。 展开更多

关键词 人工合成靶序列 番木瓜环斑病毒 番木瓜叶扭曲花叶病毒 rnai表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

白草花叶病毒基因RNAi表达载体的构建 被引量：2

4

作者 马丽 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第4期53-55,共3页

对PenMV-B的HC基因与PenMV-C的HC基因进行同源性分析,确定HC基因的保守片段。根据保守序列设计引物,以PenMVHC-Pro基因的cDNA为模板,PCR扩增能形成"发夹结构"的正反向片段,连接后插入到质粒载体pCAMB IA3301。通过冻融法将载... 对PenMV-B的HC基因与PenMV-C的HC基因进行同源性分析,确定HC基因的保守片段。根据保守序列设计引物,以PenMVHC-Pro基因的cDNA为模板,PCR扩增能形成"发夹结构"的正反向片段,连接后插入到质粒载体pCAMB IA3301。通过冻融法将载体直接导入农杆菌中,用于农杆菌介导的玉米转化。 展开更多

关键词 玉米矮花叶病毒 白草花叶病毒 rnai表达载体 HC基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

小白杏自交不亲和S-RNase基因RNAi表达载体的构建及遗传转化

5

作者 刘小芳 冯建荣 +3 位作者 刘海楠 罗明 郭明星 谢晓婷 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第4期409-414,共6页

为了应用RNAi技术调控杏自交不亲和性状,根据自交不亲和S66-RNase基因序列(Gen Bank登录中)设计特异引物,通过RT-PCR扩增S66-RNase基因(Gen Bank登录中)高变区及下游(63 bp)作为靶基因,构建RNAi表达载体的ihp RNA。以植物表达载体p CAM... 为了应用RNAi技术调控杏自交不亲和性状,根据自交不亲和S66-RNase基因序列(Gen Bank登录中)设计特异引物,通过RT-PCR扩增S66-RNase基因(Gen Bank登录中)高变区及下游(63 bp)作为靶基因,构建RNAi表达载体的ihp RNA。以植物表达载体p CAMBIA为骨架载体,利用农杆菌介导的方法转化本氏烟,利用子房转化法转化小白杏。结果显示:获得了长度为439 bp的ihp RNA。表达载体酶切检验表明S66-RNase基因的RNAi表达载体构建和转入农杆菌LBA4404成功。通过抗性筛选和GUS染色检测,获得了16株阳性植株。结论:获得转基因烟草植株证明了本研究构建的RNAi植物表达载体有效,为诱导杏S-RNase基因转录后基因沉默、获得自交亲和的杏提供参考。 展开更多

关键词 杏 S-RNASE基因 ihpRNA rnai表达载体 烟草

在线阅读 下载PDF 职称材料

不结球白菜L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因(GLDH)cDNA片段克隆与RNAi表达载体构建

6

作者 高红亮 李英 +2 位作者 宋玉萍 马成英 侯喜林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期20-24,共5页

根据植物中hpRNA(hairpin RNA)原理,选择GLDH基因cDNA序列同源性较低区域设计1对携带双酶切位点的特异引物,以不结球白菜‘苏州青’叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了GLDH基因片段。构建中间克隆载体,经过3次亚克隆将测序正确的... 根据植物中hpRNA(hairpin RNA)原理,选择GLDH基因cDNA序列同源性较低区域设计1对携带双酶切位点的特异引物,以不结球白菜‘苏州青’叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了GLDH基因片段。构建中间克隆载体,经过3次亚克隆将测序正确的GLDH基因片段分别以正向和反向两种形式插入到间隔基因YYT的两端,经鉴定已插入到植物表达载体中,成功地构建了干扰GLDH基因表达的RNAi植物双元表达载体pRNAi-GLDH,并将表达载体转化到农杆菌菌株LBA4404中,为深入研究GLDH基因功能提供有效的工具。 展开更多

关键词 不结球白菜 GLDH基因 rnai植物双元表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

葡萄抗病毒双价RNAi植物表达载体构建及其对烟草的遗传转化 被引量：5

7

作者 田莉莉 牛良 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期997-1003,I0001,共8页

【目的】为获得兼抗2种葡萄病毒的抗病植物新材料,【方法】利用Gateway技术成功构建了葡萄抗病毒双价RNAi表达载体。先采用RT-PCR分别克隆获得了葡萄卷叶病毒(GLRaV-3)和扇叶病毒(GFLV)外壳蛋白基因保守区段,用重叠延伸PCR方法串联获得... 【目的】为获得兼抗2种葡萄病毒的抗病植物新材料,【方法】利用Gateway技术成功构建了葡萄抗病毒双价RNAi表达载体。先采用RT-PCR分别克隆获得了葡萄卷叶病毒(GLRaV-3)和扇叶病毒(GFLV)外壳蛋白基因保守区段,用重叠延伸PCR方法串联获得了干扰片段GLRaV-GFLV(508 bp);通过TOPO克隆将该片段克隆入载体pENTR/SD/D构建了入门克隆载体pENTR/SD/D-GLRaV-GFLV;再经过LR反应使入门克隆载体pENTR/SD/D-GLRaV-GFLV上的干扰片段GLRaV-GFLV替换目标载体pH7GWIWG2(Ⅰ)上的ccdB基因,形成了含2种葡萄病毒基因片段的RNAi表达载体pH7GWIWG2(Ⅰ)-GLRaV-GFLV,用冻融法将其转入农杆菌菌株EHA105,以此作为工程菌进行转化烟草,【结果】经PCR鉴定证明目的片段已成功转入烟草中。【结论】研究基于Gateway技术的RNAi植物表达载体的构建和对烟草的遗传转化,为诱导转基因植物转录后基因沉默、获得抗2种病毒病的植物新材料提供了可能。 展开更多

关键词 葡萄 抗病毒 rnai植物表达载体 烟草 遗传转化

在线阅读 下载PDF 职称材料

香蕉Maasr1基因RNAi植物表达载体的构建及鉴定 被引量：2

8

作者 董凤英 杨超 +3 位作者 陈焕雄 张建斌 徐碧玉 金志强 《热带作物学报》 CSCD 2009年第3期332-337,共6页

以香蕉Maasr1基因为目的基因,载体pBS为中间载体,pBBB、pBI121为表达载体,分别构建含有Maasr1基因的RNAi植物表达载体pBBB-S-I-A和含有Maasr1基因正义片段的植物表达载体pBI121-S,并通过农杆菌介导的方式对构建的该RNAi载体沉默效果进... 以香蕉Maasr1基因为目的基因,载体pBS为中间载体,pBBB、pBI121为表达载体,分别构建含有Maasr1基因的RNAi植物表达载体pBBB-S-I-A和含有Maasr1基因正义片段的植物表达载体pBI121-S,并通过农杆菌介导的方式对构建的该RNAi载体沉默效果进行鉴定。结果表明:(1)利用中间载体pBS和植物表达载体pBBB成功构建了香蕉Maasr1基因的RNAi植物表达载体pBBB-S-I-A;(2)利用载体pBI121成功构建了1个含有Maasr1基因正义片段的植物表达载体pBI121-S;(3)构建的RNAi载体pBBB-S-I-A可以抑制Maasr1基因的表达,具有较好的沉默效果。 展开更多

关键词 香蕉 Maasr1基因 rnai植物表达载体 鉴定

在线阅读 下载PDF 职称材料

甘蔗黄叶病毒与花叶病毒CP基因RNAi载体构建与转化甘蔗研究 被引量：9

9

作者 陈利平 陈平华 +6 位作者 陈忠伟 王恒波 许莉萍 刘迪 高三基 郭晋隆 陈如凯 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期99-106,共8页

甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分... 甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分离物CP基因序列,经过比对选取保守序列作为干扰序列。通过在序列两端添加酶切位点,合成并连接成双价甘蔗黄叶病和花叶病毒干扰序列,然后构建到中间载体p HANNIBAL上,形成双价RNAi干扰结构,最后插入到p ART27上形成干扰表达载体。利用基因枪轰击甘蔗品种福农15号愈伤组织进行转化,经G418筛选获得抗性再生植株。通过提取DNA和RNA分析,证实双价RNAi干扰结构不仅以不同拷贝整合到甘蔗基因组中,而且得到了转录表达。 展开更多

关键词 甘蔗黄叶病毒 甘蔗花叶病毒 CP基因 双价rnai表达载体构建 遗传转化

在线阅读 下载PDF 职称材料

农杆菌介导的ACO基因RNAi载体转化百合抗衰老研究 被引量：1

10

作者 李小玲 刘雅莉 华智锐 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2012年第2期88-92,共5页

本研究旨在通过根癌农杆菌介导法将ACO基因转入亚洲百合植株中,为植物抗衰老提供理论依据和技术基础。以亚洲百合‘精粹’无菌苗离体小鳞片为外植体,利用农杆菌介导法将携带有抗衰老基因ACO的RNAi载体转化到百合中,观测分析影响百合遗... 本研究旨在通过根癌农杆菌介导法将ACO基因转入亚洲百合植株中,为植物抗衰老提供理论依据和技术基础。以亚洲百合‘精粹’无菌苗离体小鳞片为外植体,利用农杆菌介导法将携带有抗衰老基因ACO的RNAi载体转化到百合中,观测分析影响百合遗传转化的因素。结果表明:在遗传转化过程中,预培养3 d后,在菌液和共培养基中均添加25 mg/L乙酰丁香酮,将OD600=0.8的根癌农杆菌侵染小鳞片8 min,再共培养3 d,有利于获得最高遗传转化效率,抗性植株经PCR检测部分呈现阳性,初步证明ACO基因已经导入到百合基因组中。 展开更多

关键词 农杆菌介导 ACO基因 rnai表达载体 抗衰老 百合

在线阅读 下载PDF 职称材料

苹果果实L-半乳糖脱氢酶cDNA的克隆及其RNAi载体的构建 被引量：2

11

作者 高静 尚增振 +2 位作者 王小华 马锋旺 梁东 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第1期181-187,共7页

【目的】从"皇家嘎拉"苹果幼果外果皮中克隆L-半乳糖脱氢酶(L-galactose dehydrogenase,GalDH)cDNA,进行生物信息学分析并构建其RNAi植物表达载体,为该基因功能鉴定奠定基础。【方法】应用同源序列克隆法克隆"皇家嘎拉&q... 【目的】从"皇家嘎拉"苹果幼果外果皮中克隆L-半乳糖脱氢酶(L-galactose dehydrogenase,GalDH)cDNA,进行生物信息学分析并构建其RNAi植物表达载体,为该基因功能鉴定奠定基础。【方法】应用同源序列克隆法克隆"皇家嘎拉"苹果GalDH基因,并进行生物信息学分析;利用噬菌体同源重组原理构建其RNAi植物表达载体pMDR-GalDH,并导入农杆菌EHA105。【结果】通过RT-PCR扩增得到1条约1.1 kb的条带,序列分析表明,该片段长为1 111 bp,包含一个975 bp的开放阅读框,可编码324个氨基酸残基,包含有醛酮还原酶的保守结构域和3个跨膜螺旋结构,其理论上的等电点pI为5.44,蛋白分子质量为34.99 ku;聚类分析显示,苹果GalDH核苷酸与已知其他植物GalDH核苷酸的相似性均在95%以上,判断其为苹果GalDH基因cDNA全长,命名为MdGal DH(GenBank登录号为:GQ131419)。另外,通过RT-PCR获得GalDH基因保守区段,成功构建了其RNAi植物表达载体pMDR-GalDH。【结论】从"皇家嘎拉"苹果中克隆了GalDHcDNA的编码区全长,并构建了该基因的RNAi植物表达载体。 展开更多

关键词 苹果 L-半乳糖脱氢酶 基因克隆 rnai植物表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

蓖麻毒蛋白A链基因RNAi转化研究 被引量：3

12

作者 陈永胜 王永佳 +3 位作者 王莹 黄凤兰 李国瑞 王文跃 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期39-42,共4页

通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡... 通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡那抗性筛选转化再生植株,PCR进一步鉴定转基因植株。结果表明:克隆得到目的基因长762bp,与预期结果一致;卡那抗性筛选和PCR鉴定结果显示,获得了3株转基因阳性植株。 展开更多

关键词 蓖麻毒蛋白 rnai rnai表达载体 遗传转化

在线阅读 下载PDF 职称材料

水稻XIOsPR10基因表达调控的初步研究 被引量：3

13

作者 郭迟鸣 毛倩 +3 位作者 杨晓坡 郭立佳 王丽娟 陈亮 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1721-1727,共7页

为探索水稻PR10蛋白在水稻抗细菌性条斑病中的作用,构建了XIOsPR10基因的植物过量表达载体p1301-XIOsPR10及RNAi表达载体pDS1301-XIOsPR10,通过农杆菌介导分别转化水稻愈伤组织,获得了相应的再生植株。经GUS检测和PCR分析,证实XIOsPR10... 为探索水稻PR10蛋白在水稻抗细菌性条斑病中的作用,构建了XIOsPR10基因的植物过量表达载体p1301-XIOsPR10及RNAi表达载体pDS1301-XIOsPR10,通过农杆菌介导分别转化水稻愈伤组织,获得了相应的再生植株。经GUS检测和PCR分析,证实XIOsPR10基因以及RNAi片段分别整合到水稻再生植株基因组中;半定量RT-PCR分析显示,过量表达植株中XIOsPR10基因的表达量高于对照,而RNAi转基因植株中XIO-sPR10基因的表达被抑制。 展开更多

关键词 XIOsPR10 过量表达载体 rnai表达载体 水稻

在线阅读 下载PDF 职称材料

肌动蛋白基因在棉花纤维中的作用研究 被引量：8

14

作者 范小平 范博红 +2 位作者 李学宝 杨维才 徐子勤 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第5期73-75,共3页

运用农杆菌介导法将肌动蛋白RNAi表达载体PBI121-GhACT1转化棉花,经胚胎发生获得再生植株。非转化组培再生苗作为对照。以NPTII制备探针,Southern杂交结果表明,获得8个独立遗传转化系,其中3个系有2个拷贝插入;其余6个系为多拷贝。显微... 运用农杆菌介导法将肌动蛋白RNAi表达载体PBI121-GhACT1转化棉花,经胚胎发生获得再生植株。非转化组培再生苗作为对照。以NPTII制备探针,Southern杂交结果表明,获得8个独立遗传转化系,其中3个系有2个拷贝插入;其余6个系为多拷贝。显微镜下观察开花后第5天的幼胚珠孔端,对照纤维长度约是RNAi载体转基因的3-5倍。成熟后绒长F测验结果表明,RNAi载体转化株与对照差异显著,RNAi转基因植株的绒长显著短于对照。说明GhACT1基因对纤维有延缓和抑制作用,并且主要作用于纤维发育早期。 展开更多

关键词 rnai表达载体 肌动蛋白 转化 绒长

在线阅读 下载PDF 职称材料

盐胁迫条件下转录因子RAP2L14调控杨树生长研究 被引量：2

15

作者 王星斗 黄娟娟 +3 位作者 樊艳 刘强 韩有志 王升级 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2021年第6期14-23,共10页

[目的]ERF(ethylene response factor)转录因子家族基因能够调控植物应答高盐等逆境胁迫,参与植物生长发育等生物学过程。RAP2L14是ERF转录因子家族重要成员,本研究旨在探究其在杨树生长及应答盐胁迫过程中的功能。[方法]利用RT-qPCR及... [目的]ERF(ethylene response factor)转录因子家族基因能够调控植物应答高盐等逆境胁迫,参与植物生长发育等生物学过程。RAP2L14是ERF转录因子家族重要成员,本研究旨在探究其在杨树生长及应答盐胁迫过程中的功能。[方法]利用RT-qPCR及转录组测序技术分析‘84K杨’(Populus alba×P.glandulosa)转录因子RAP2L14基因应答盐胁迫表达模式。从‘84K杨’中克隆RAP2L14基因,对RAP2L14基因编码氨基酸序列及上游2000 bp区域启动子结构进行生物信息学分析,构建RAP2L14-RNAi植物表达载体,使用农杆菌叶盘介导法获得转基因84K杨,鉴定表明获得5个RAP2L14-RNAi抑制表达杨树转基因株系。并对盐胁迫条件下转基因株系基础生长指标进行分析。[结果]RAP2L14基因cDNA全长465 bp,共编码154个氨基酸,其表达受盐胁迫诱导。RAP2L14基因上游2000 bp启动子序列含有ABRE、ARE、CGTCA-motif等11个逆境胁迫相关作用元件。盐胁迫后,RAP2L14-RNAi转基因株系的生根率及株高明显低于对照,且生根起始时间推迟了2 d。[结论]杨树ERF转录因子基因RAP2L14为盐胁迫相关基因,其抑制表达提高了转基因株系对于盐胁迫的敏感性,限制了根的发生。本研究为揭示ERF转录因子在杨树分子育种及应答逆境胁迫方面提供候选基因及基础材料。 展开更多

关键词 ERF转录因子 84K杨 RAP2L14 rnai表达载体构建 遗传转化 盐胁迫

在线阅读 下载PDF 职称材料

XCRK基因在水稻与细菌性条斑病菌互作中的功能解析

16

作者 张玉霞 崔玉超 +2 位作者 李燕 周丹 陈亮 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期201-207,共7页

XCRK(Xoc-associated receptor-like kinase)基因是对水稻细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS)致病菌侵染应答的差异蛋白质组学研究中发现的一个拟抗病基因.生物信息学分析显示该基因位于水稻的1号染色体上,编码一个含有322个氨基... XCRK(Xoc-associated receptor-like kinase)基因是对水稻细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS)致病菌侵染应答的差异蛋白质组学研究中发现的一个拟抗病基因.生物信息学分析显示该基因位于水稻的1号染色体上,编码一个含有322个氨基酸的蛋白激酶.组织表达分析显示XCRK基因在根、茎、叶、花序等组织中均有表达,且其表达受高盐、H2O2和脱落酸(ABA)的诱导.为了探究XCRK基因在水稻BLS中的作用,通过PCR扩增XCRK基因编码区,构建超量表达载体,并转化水稻愈伤组织获得了超量表达XCRK基因的转基因水稻植株;同时构建了RNA干扰(RNAi)表达载体,并获得了抑制表达XCRK基因的转基因水稻植株.对T1代转基因植株进行了BLS抗性分析,结果显示:超量表达XCRK基因明显增强了转基因水稻对BLS致病菌的抗性;相反地,抑制表达XCRK基因的转基因水稻对BLS致病菌的敏感性则略有增强.综上结果表明XCRK基因正调控水稻对BLS的抗性,这为进一步研究该基因的作用机制提供了理论依据. 展开更多

关键词 细菌性条斑病 超量表达载体 rnai表达载体 转基因水稻

在线阅读 下载PDF 职称材料