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植物非细胞自主性RNAi及其应用研究进展
1
作者 李琳 吴风光 +3 位作者 何结旺 王豹祥 张明月 邱立友 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第11期1-4,共4页
非细胞自主性RNAi是发生于那些非应用或非产生dsRNA的细胞或组织中的RNAi,包括系统性RNAi和环境RNAi。系统性RNAi是沉默现象从一个细胞扩散到另一个细胞或从一个组织扩散到另一个组织的过程,环境RNAi是细胞从环境中吸收dsRNA而触发的RNA... 非细胞自主性RNAi是发生于那些非应用或非产生dsRNA的细胞或组织中的RNAi,包括系统性RNAi和环境RNAi。系统性RNAi是沉默现象从一个细胞扩散到另一个细胞或从一个组织扩散到另一个组织的过程,环境RNAi是细胞从环境中吸收dsRNA而触发的RNAi。近年来,植物非细胞自主性RNAi研究取得了较大进展,就其机制及应用进行了评述,首次提出在植物中也有环境RNAi存在。 展开更多
关键词 植物 非细胞自主性rnai 系统性rnai 环境rnai 机制 应用
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棉铃虫原肌球蛋白基因HaTm-1的RNAi效应及功能分析
2
作者 关若冰 韩锐 +3 位作者 楚冬冬 徐赛博 刘晓光 李祥 《昆虫学报》 北大核心 2025年第9期1193-1202,共10页
【目的】本研究旨在对前期转录组测序鉴定到的棉铃虫Helicoverpa armigera原肌球蛋白基因HaTm-1进行组织表达谱和RNAi效应分析,探究HaTm-1作为鳞翅目(Lepidoptera)害虫广谱性RNA生物农药靶点的可行性和理论依据。【方法】PCR克隆棉铃虫H... 【目的】本研究旨在对前期转录组测序鉴定到的棉铃虫Helicoverpa armigera原肌球蛋白基因HaTm-1进行组织表达谱和RNAi效应分析,探究HaTm-1作为鳞翅目(Lepidoptera)害虫广谱性RNA生物农药靶点的可行性和理论依据。【方法】PCR克隆棉铃虫HaTm-1 cDNA序列并进行生物信息学分析;利用RT-qPCR检测HaTm-1在棉铃虫4龄幼虫不同组织(表皮、脂肪体、中肠、脑、精巢和马氏管)以及2-5龄幼虫表皮中的表达量;通过喷洒dsHaTm-1对棉铃虫和草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda 1龄幼虫HaTm-1进行RNAi,分别检测棉铃虫HaTm-1和草地贪夜蛾SfTm-1的表达量以及幼虫体重和幼虫存活率;对棉铃虫4龄幼虫注射dsHaTm-1,检测幼虫体重、蛹重、相对生长速率、相对代谢速率和取食量。【结果】棉铃虫HaTm-1全长cDNA为855 bp (GenBank登录号:XP021201113.1), HaTm-1与多物种中的同源蛋白都有超90%的氨基酸序列一致性。棉铃虫与草地贪夜蛾的Tm-1汇聚在同一分支上,亲缘关系最近。HaTm-1在棉铃虫4龄幼虫表皮中特异性高表达,且在不同龄期幼虫表皮中均有表达,其中在5龄幼虫表皮中表达量最高。与dsEGFP对照组相比,喷洒dsHaTm-1处理棉铃虫1龄幼虫12和24 h时,HaTm-1表达量分别降低了55.73%和50.85%;168 h时幼虫存活率显著降低,仅为43.33%;处理后72, 120和168 h时幼虫体重分别下降17.67%, 14.65%和18.90%。与dsEGFP对照组相比,喷洒dsHaTm-1处理草地贪夜蛾1龄幼虫12和24 h时SfTm-1表达量分别降低了44.72%和39.65%;144 h时幼虫存活率为60%;72和120 h时幼虫体重分别下降了13.00%和28.11%。与dsEGFP对照组相比,注射dsHaTm-1处理棉铃虫4龄幼虫24 h时HaTm-1表达量显著降低了55.66%,处理后72和120 h幼虫体重分别下降了50.34%和54.91%,蛹重也下降了13.14%,相对生长速率下降14.00%,相对代谢速率下降15.66%,取食量下降14.50%。取食消化过程受到影响进而导致了幼虫的死亡。【结论】干扰HaTm-1表达对棉铃虫的取食消化过程至关重要。本研究证明了原肌球蛋白作为潜在RNA生物农药广谱性害虫防治靶标的可行性,为其实际应用提供参考。 展开更多
关键词 棉铃虫 草地贪夜蛾 原肌球蛋白 rnai 存活率 体重 取食量
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基于滚环转录技术的小菜蛾RNAi靶标致死基因筛选及活性评价
3
作者 须志平 王新骞 +2 位作者 刘晓颖 刘彬 张阳 《农药学学报》 北大核心 2025年第5期849-860,812,共13页
为筛选可防控小菜蛾(Plutella xylostella)的关键RNA干扰(RNAi)靶标基因,针对性选取海藻糖酶(trehalase)基因(PxTRE)、V-ATP酶E亚基(vacuolar ATP synthethase subunit E)基因(PxATPE)、RPS13基因(PxRPS13)和几丁质酶(chitinase)基因(Px... 为筛选可防控小菜蛾(Plutella xylostella)的关键RNA干扰(RNAi)靶标基因,针对性选取海藻糖酶(trehalase)基因(PxTRE)、V-ATP酶E亚基(vacuolar ATP synthethase subunit E)基因(PxATPE)、RPS13基因(PxRPS13)和几丁质酶(chitinase)基因(PxCHT),采用滚环转录(RCT)技术设计并合成了多种RNA微球(RMS),采用饲喂法处理后,观察并测定了所得RNA微球对小菜蛾3龄幼虫生长发育的影响和致死效果。结果显示:处理48 h后,靶标基因沉默效果较为显著,RMS-PxTRE、RMS-PxATPE、RMS-PxRPS13和RMS-PxCHT处理组幼虫的mRNA基因表达水平相较于RMS-EGFP对照组分别降低了74.84%、73.36%、62.90%和38.10%(P<0.05)。此外,靶向双基因的多组分RMS-PxTA(RMS-PxTRE/ATPE)和RMS-PxTC(RMS-PxTRE/CHT)能同时显著降低PxTRE、PxATPE和PxCHT基因的表达水平;RMSPxTA处理组中,PxTRE和PxATPE基因表达量较对照组分别降低了86.16%和96.38%(P<0.05);RMS-PxTC处理组中,PxTRE和PxCHT基因表达量分别比对照组降低了45.22%和28.02%(P<0.05)。处理72 h后,RMS-PxTRE、RMS-PxATPE、RMS-PxCHT、RMS-PxRPS13、RMS-PxTA和RMS-PxTC处理组幼虫的死亡率分别为62.22%、86.67%、60.00%、57.78%、35.56%和66.67%;且处理组的存活幼虫表现出取食减少、体长缩短以及蜕皮失败等现象。研究结果表明,RCT技术可用于小菜蛾RNAi靶标基因的快速筛选,PxATPE基因可作为小菜蛾高效致死的RNA生物农药潜在靶标基因,推测其在小菜蛾RNAi绿色防控方面可能具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 小菜蛾 RNA干扰 滚环转录 RNA生物农药 海藻糖酶 V-ATP酶 RPS13
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RNAi技术在植物功能基因组学中的研究进展 被引量：24
4
作者 李丽文 朱延明 +2 位作者 李杰 柏锡 才华 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第1期119-124,共6页
文章主要综述了RNA干涉(RNAi)技术在植物功能基因组学中的研究策略及研究现状,包括RNA干涉的作用机制及技术特征,引发植物RNAi机制的转基因RNAi技术以及病毒介导的基因沉默技术。转基因RNAi技术方面,包括载体结构的优化策略、高通量载... 文章主要综述了RNA干涉(RNAi)技术在植物功能基因组学中的研究策略及研究现状,包括RNA干涉的作用机制及技术特征,引发植物RNAi机制的转基因RNAi技术以及病毒介导的基因沉默技术。转基因RNAi技术方面,包括载体结构的优化策略、高通量载体的构建方法以及该技术的优缺点。病毒介导的基因沉默技术方面包括病毒载体及宿主种类,病毒感染方法,试验对照的建立、环境因素的影响以及该技术的优缺点。 展开更多
关键词 rnai 转基因rnai 病毒介导的基因沉默
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蓖麻毒蛋白A链基因RNAi转化研究 被引量：3
5
作者 陈永胜 王永佳 +3 位作者 王莹 黄凤兰 李国瑞 王文跃 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期39-42,共4页
通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡... 通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡那抗性筛选转化再生植株,PCR进一步鉴定转基因植株。结果表明:克隆得到目的基因长762bp,与预期结果一致;卡那抗性筛选和PCR鉴定结果显示,获得了3株转基因阳性植株。 展开更多
关键词 蓖麻毒蛋白 rnai rnai表达载体 遗传转化
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RNAi技术研究进展 被引量：4
6
作者 陈克平 唐旭东 《江苏大学学报（自然科学版）》 EI CAS 2004年第4期336-340,共5页
RNAi是由双链RNA引起的基因沉默现象,它通过降解具有同源序列的mRNA起作用,特殊设计的siRNA能使目的基因发生特异性沉默.目前,获得siRNA已经非常方便,导入方式最常用的是微注射.RNAi技术有编码区RNAi和启动子区RNAi两大类,均可以产生类... RNAi是由双链RNA引起的基因沉默现象,它通过降解具有同源序列的mRNA起作用,特殊设计的siRNA能使目的基因发生特异性沉默.目前,获得siRNA已经非常方便,导入方式最常用的是微注射.RNAi技术有编码区RNAi和启动子区RNAi两大类,均可以产生类似基因敲除的功能,在家蚕功能基因的研究中已经使用了这种方法.随着RNAi技术的不断进步,RNAi可广泛地应用到功能基因组学,药物靶点筛选,疾病治疗等方面. 展开更多
关键词 rnai 基因功能 rnai技术
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简析OECD《喷洒或外源施用双链RNAi农药的环境风险评估要点》
7
作者 简秋 宗伏霖 《农药科学与管理》 2025年第9期1-3,17,共4页
本文重点介绍了经济合作与发展组织(OECD)《喷洒或外源施用双链RNAi农药的环境风险评估要点》(农药系列报告第104号)中有关环境风险识别,以及风险评估中需特别考虑的关注点和风险评估建议。提出了进一步加强研究,多方合作,建立相应的标... 本文重点介绍了经济合作与发展组织(OECD)《喷洒或外源施用双链RNAi农药的环境风险评估要点》(农药系列报告第104号)中有关环境风险识别,以及风险评估中需特别考虑的关注点和风险评估建议。提出了进一步加强研究,多方合作,建立相应的标准化测试和评价方法,以支持这一新兴农药类别的科学监管的建议。 展开更多
关键词 rnai农药 环境风险评估
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纳米粒子载体对灰飞虱RNAi效率的影响 被引量：4
8
作者 周晨 朱先敏 +4 位作者 朱凤 张海波 韩召军 杨荣明 王康旭 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1153-1160,共8页
【目的】筛选针对灰飞虱Laodelphax striatellus RNAi的dsRNA高效纳米递送载体。【方法】使用壳聚糖、碳量子点(carbon quantum dot,CQD)和lipofectamine 2000作为代表性纳米粒子,分别与dsRNA进行混合,形成稳定的3种不同复合颗粒,利用... 【目的】筛选针对灰飞虱Laodelphax striatellus RNAi的dsRNA高效纳米递送载体。【方法】使用壳聚糖、碳量子点(carbon quantum dot,CQD)和lipofectamine 2000作为代表性纳米粒子,分别与dsRNA进行混合,形成稳定的3种不同复合颗粒,利用光谱法检测其dsRNA装载率。以灰飞虱膜结合型海藻糖酶基因LsStre为靶标基因来测试3种纳米粒子的RNAi效率。用不同纳米粒子包裹的dsLsStre喂食后,通过荧光实时定量PCR(qPCR)检测喂食后2 d灰飞虱2龄若虫中LsStre mRNA表达水平,并检测和计算灰飞虱2龄若虫在6 d内的校正死亡率,以裸dsLsStre引起的2龄若虫死亡率为对照,评价3种纳米载体对LsStre的RNAi增效作用。【结果】3种纳米载体均能负载dsEgfp,且这3种纳米载体复合dsEgfp的效率均在95%以上。3种纳米材料对灰飞虱2龄若虫的毒性均较弱。同未用纳米粒子包裹的裸dsLsStre喂食组(对LsStre表达量的抑制率为46%)相比,壳聚糖和CQD能够显著提高LsStre的RNAi效率(对LsStre表达量的抑制率分别为78%和84%),而lipofectamine 2000不能显著提高LsStre的RNAi效率(抑制率为52%)。壳聚糖和CQD可以有效提高喂食dsLsStre对灰飞虱2龄若虫的致死效应,在连续喂食6 d后,灰飞虱2龄若虫的校正死亡率分别达到76%和82%,与直接用裸dsLsStre处理的对照组校正死亡率(35%)相比,增效系数分别达到2.17和2.34,lipofectamine 2000的增效能力最弱,其与dsLsStre的复合颗粒处理引起灰飞虱2龄若虫死亡率为38%,增效系数为1.09。【结论】壳聚糖和CQD纳米载体能够显著提高灰飞虱对于喂食dsRNA的敏感性,而lipofectamine 2000的RNAi增效作用较弱。研究结果有助于评价纳米载体在灰飞虱RNAi中的增效作用,为进一步开发和筛选有效的RNAi纳米载体,实现害虫绿色防控,提供了理论依据和应用策略。 展开更多
关键词 灰飞虱 海藻糖酶 rnai 纳米粒子 DSRNA rnai效率 增效系数
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RNAi技术在昆虫功能基因研究中的应用进展 被引量：18
9
作者 杨中侠 文礼章 +3 位作者 吴青君 王少丽 徐宝云 张友军 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1077-1082,共6页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指外源或内源的双链RNA(dsRNA)特异性地引起基因表达沉默的现象,它作为一种有效的工具用来产生转录后沉默,从而抑制特定基因的表达,成为基因功能研究的一种新方法,除了在模式昆虫如果蝇Drosophila中广... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指外源或内源的双链RNA(dsRNA)特异性地引起基因表达沉默的现象,它作为一种有效的工具用来产生转录后沉默,从而抑制特定基因的表达,成为基因功能研究的一种新方法,除了在模式昆虫如果蝇Drosophila中广泛应用之外,也在非模式昆虫中得到成功应用。近年来,RNAi技术在导入方法和基因功能分析方面都取得了飞速发展,且与转基因技术相结合成功应用于害虫防治领域。本文综述了RNAi技术在导入方法、昆虫功能基因组功能分析及害虫防治等领域新近的研究成果,并展望了该技术的应用前景。 展开更多
关键词 RNA干扰(rnai) 双链RNA(dsRNA) 昆虫 基因功能 应用
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梨ACC氧化酶基因(ACO)的片段克隆及其RNAi载体构建 被引量：10
10
作者 胡钟东 乔玉山 +2 位作者 王三红 姚泉洪 章镇 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期877-879,共3页
以若光梨成熟果实为材料,提取总RNA,在ACC氧化酶基因(ACO)cDNA序列同源性较高区域设计一对特异引物,利用RT-PCR克隆了ACC氧化酶(ACO)基因片段。将ACO反义基因、与副球菌中类胡罗卜素合成有关的间隔基因YYT和ACO正义基因3个片段串联在一... 以若光梨成熟果实为材料,提取总RNA,在ACC氧化酶基因(ACO)cDNA序列同源性较高区域设计一对特异引物,利用RT-PCR克隆了ACC氧化酶(ACO)基因片段。将ACO反义基因、与副球菌中类胡罗卜素合成有关的间隔基因YYT和ACO正义基因3个片段串联在一起,经鉴定后,插入到植物表达载体中,构建成能够表达ACC氧化酶基因的双链RNA的植物载体pYF028,为耐贮砂梨的遗传转化创造条件。 展开更多
关键词 梨 ACC氧化酶(ACO) RT-PCR 克隆 rnai载体构建
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棉花肉桂醇脱氢酶基因GhCAD6的克隆及正义、反义与RNAi干扰载体的构建 被引量：13
11
作者 倪志勇 马文静 +3 位作者 吕萌 王娟 李波 范玲 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期20-26,共7页
肉桂醇脱氢酶(CAD)催化木质素单体合成的最后一步反应,将肉桂醛还原生成相应的肉桂醇。采用PCR方法从棉花中克隆了GhCAD6基因1569 bp的基因组序列,序列分析表明GhCAD6基因由5个外显子和4个内含子组成。为了研究GhCAD6基因的功能,构建由... 肉桂醇脱氢酶(CAD)催化木质素单体合成的最后一步反应,将肉桂醛还原生成相应的肉桂醇。采用PCR方法从棉花中克隆了GhCAD6基因1569 bp的基因组序列,序列分析表明GhCAD6基因由5个外显子和4个内含子组成。为了研究GhCAD6基因的功能,构建由棉纤维组织特异性启动子E6驱动的GhCAD6基因正义、反义表达载体;同时克隆了GhCAD6基因的一段417 bp高度保守的NBD区序列,构建了GhCAD6基因的RNAi干扰载体,并将上述载体转入农杆菌菌株LBA4404中。为通过转基因技术深入研究GhCAD6基因在棉纤维发育和木质素代谢途径中的作用创造条件。 展开更多
关键词 棉花 肉桂醇脱氢酶 表达载体 rnai
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砂梨脂氧合酶cDNA片段克隆与RNAi载体构建 被引量：8
12
作者 胡钟东 乔玉山 +2 位作者 王三红 姚泉洪 章镇 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期1285-1290,共6页
以砂梨‘若光’的成熟果实为材料,根据脂氧合酶氨基酸保守区设计1对简并引物,采用RT-PCR克隆到1段长827 bp的序列,经Blast比对和DNAstar软件聚类分析,结果表明由该序列推导出的氨基酸序列含有脂氧合酶氨基酸保守结构域,与马铃薯脂氧合... 以砂梨‘若光’的成熟果实为材料,根据脂氧合酶氨基酸保守区设计1对简并引物,采用RT-PCR克隆到1段长827 bp的序列,经Blast比对和DNAstar软件聚类分析,结果表明由该序列推导出的氨基酸序列含有脂氧合酶氨基酸保守结构域,与马铃薯脂氧合酶基因的氨基酸序列相似性达到77.5%,判断其为砂梨脂氧合酶基因片段,命名为LOX1,并将序列登录到GenBank,登录号为EF215448。根据RNAi载体的构建原则,选择LOX1一开放阅读框设计携带酶切位点的特异引物,通过PCR扩增正、反向基因片段,再与YYT间隔区串连,插入植物表达载体pYF7713中的相应位置,成功地构建了干扰LOX基因表达的RNAi的植物双元表达载体pYL028,为深入研究该基因在砂梨果实成熟过程中的功能及耐贮藏基因工程育种奠定了基础。 展开更多
关键词 砂梨 脂氧合酶 RT-PCR 克隆 rnai
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RNAi技术在植物寄生线虫防控中的应用研究进展
13
作者 于敬文 黄凌 +5 位作者 赵俊丽 仝允正 刘雅琴 陈燕雪 陈新娟 黄文坤 《湖南农业科学》 2025年第5期79-84,共6页
植物寄生线虫寄主范围广,严重危害作物根系,防治十分困难。RNAi技术能够使植物寄生线虫关键靶标基因的表达下调,具有特异性强、安全性高等优点。在植物与线虫互作过程中,RNAi技术已广泛应用于线虫的特定基因功能及防控技术研究。本文从R... 植物寄生线虫寄主范围广,严重危害作物根系,防治十分困难。RNAi技术能够使植物寄生线虫关键靶标基因的表达下调,具有特异性强、安全性高等优点。在植物与线虫互作过程中,RNAi技术已广泛应用于线虫的特定基因功能及防控技术研究。本文从RNAi技术的起源及作用机制、植物寄生线虫RNAi靶基因的选择以及dsRNA防控植物寄生线虫的递送策略几个方面进行综述,并对RNAi在植物寄生线虫防控中的应用前景进行探讨,以期为植物寄生线虫病害的防控提供新思路。 展开更多
关键词 RNA干扰 植物寄生线虫 dsRNA递送策略 线虫与植物互作 综述
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农杆菌介导的RNAiCP基因在大豆中的转化 被引量：8
14
作者 章洁琼 李红艳 +2 位作者 胡小南 单志慧 唐桂香 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1594-1601,共8页
花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)病是大豆主要病害之一,生产上常采用种植抗性品种方法来防治。本研究以RNA干扰花叶病毒衣壳蛋白(coat protein,CP)基因为表达载体,Bar基因作为筛选标记基因,成熟子叶节为外植体,采用农杆菌介导法获得... 花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)病是大豆主要病害之一,生产上常采用种植抗性品种方法来防治。本研究以RNA干扰花叶病毒衣壳蛋白(coat protein,CP)基因为表达载体,Bar基因作为筛选标记基因,成熟子叶节为外植体,采用农杆菌介导法获得了22株T_0代转基因大豆生根苗,经草丁膦涂抹、Bar试纸条和PCR法鉴定,获得RNAi CP转基因植株18株;对转基因植株T_1代的遗传分析表明,外源基因能够稳定遗传到下一代且符合孟德尔遗传规律;T_1代Southern杂交表明,导入的干扰片段为单拷贝;花叶病毒摩擦接种表明,RNAi CP转基因大豆植株具有抗花叶病毒特性;摩擦接种后3周,DAS-ELISA检测进一步表明,RNAi CP转基因植株花叶病毒检出率仅为7.69%,而非转基因植株为100%。这表明RNAi花叶病毒CP基因可用于抗大豆花叶病毒的研究。 展开更多
关键词 大豆 rnai CP 遗传转化 大豆花叶病毒 病毒鉴定
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利用正义RNAi技术提高玉米直链淀粉含量效果的研究 被引量：11
15
作者 张桂堂 卢东长城 +3 位作者 孙重霞 梁荣奇 杨凤萍 张晓东 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期92-96,共5页
为了研究利用正义RNAi技术提高玉米直链淀粉含量效果,用基因枪法将构建的sbeⅡb正义RNAi表达载体pBAC506和pBAC508(筛选标记基因分别为35S启动子及Adh1-intron1增强驱动的epsps和bar)导入玉米(Zeamays)自交系幼胚愈伤组织,经过筛选、分... 为了研究利用正义RNAi技术提高玉米直链淀粉含量效果,用基因枪法将构建的sbeⅡb正义RNAi表达载体pBAC506和pBAC508(筛选标记基因分别为35S启动子及Adh1-intron1增强驱动的epsps和bar)导入玉米(Zeamays)自交系幼胚愈伤组织,经过筛选、分化和再生获得了44株转基因当代植株,经PCR扩增、PCR-Southern检测有30株为阳性。选择9株健壮的阳性植株进行基因组Southern-blotting分析,结果表明7株T0植株整合了目的基因,其中4株整合了1个转基因拷贝,2株整合了2个转基因拷贝,1株整合了3个转基因拷贝。这7株中有2株结实,直链淀粉含量分别为23.22%和24.60%,有一定的小幅提高。下一步要进行较大规模的基因枪转化,得到比较大的转基因群体,以对更多转基因后代进行鉴定,期望筛选出外源基因多拷贝插入和直链淀粉含量大幅提高的株系。 展开更多
关键词 玉米 淀粉分支酶 正义rnai 直链淀粉
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RNA干扰作用(RNAi)研究进展 被引量：36
16
作者 陈忠斌 于乐成 王升启 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期525-528,共4页
RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 .RNAi主要通过dsRNA被核酸酶切割成 2 1～ 2 5nt的干扰性小RNA即siRNA ,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现 .... RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 .RNAi主要通过dsRNA被核酸酶切割成 2 1～ 2 5nt的干扰性小RNA即siRNA ,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现 .RNAi要有多种蛋白因子以及ATP参与 ,而且具有生物催化反应特征 .RNAi是新发现的一种通过dsRNA介导的特异性高效抑制基因表达途径 。 展开更多
关键词 RNA干扰作用 rnai 研究进展 基因转录后沉默 干扰性小RNA 沉默复合体 反义药物
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DHAR与草莓AsA积累关系及DHAR RNAi遗传转化研究 被引量：6
17
作者 张丙秀 李柱刚 +2 位作者 高媛 刘丹 高庆玉 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1626-1632,共7页
【目的】确定草莓脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)酶活性与抗坏血酸(ASA)的关系,研究DHAR对AsA积累的调控作用,为筛选高AsA草莓品种育种提供理论基础。【方法】于不同时期测定草莓果实AsA含量和DHAR酶活性并进行相关性分析,构建DHAR基因RNAi... 【目的】确定草莓脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)酶活性与抗坏血酸(ASA)的关系,研究DHAR对AsA积累的调控作用,为筛选高AsA草莓品种育种提供理论基础。【方法】于不同时期测定草莓果实AsA含量和DHAR酶活性并进行相关性分析,构建DHAR基因RNAi植物表达载体,通过农杆菌介导法,将RNAi植物表达载体导入草莓中。【结果】草莓果实成熟过程中AsA含量呈现上升趋势,生长后期含量增幅最大。随着草莓果实的成熟,DHAR酶活性逐渐增大,在生长后期酶活性最高。构建了脱氢抗坏血酸酶基因(DHAR)的RNAi植物表达载体(Part27-IDHAR),并采用农杆菌介导法转入草莓,共获7株PCR阳性植株,初步说明目的基因已整合到草莓组织中。【结论】DHAR酶活性与AsA积累呈显著正相关,获得的转基因植株可为下一步研究提供植物材料。 展开更多
关键词 草莓 DHAR ASA rnai 遗传转化
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应用载体介导的RNAi技术抑制Bcl-2的表达 被引量：7
18
作者 蹇锐 程小星 +5 位作者 安静 陈炜 王嘉丽 张俊磊 万颖杰 陈宗涛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期294-297,共4页
目的　应用载体介导的RNAi技术特异地干扰抗凋亡基因bcl 2在HeLa细胞中的表达。方法　构建利用H1启动子转录功能性siRNA的载体 ;在H1启动子下游分别插入含不同bcl 2基因特异性序列的 64nt寡核苷酸片段 ;将构建的质粒转染HeLa细胞 ,以间... 目的　应用载体介导的RNAi技术特异地干扰抗凋亡基因bcl 2在HeLa细胞中的表达。方法　构建利用H1启动子转录功能性siRNA的载体 ;在H1启动子下游分别插入含不同bcl 2基因特异性序列的 64nt寡核苷酸片段 ;将构建的质粒转染HeLa细胞 ,以间接免疫荧光和免疫印迹检测转染后细胞中Bcl 2的表达水平。结果　 3种含不同bcl 2特异性序列的质粒转染后均能干扰该基因在细胞中的表达 ,但干扰的效果存在差异 ,从 45 %～ 83 5 %。结论　本研究建立的载体介导的RNAi技术可成功地用于干扰Bcl 展开更多
关键词 载体介导 rnai BCL-2 表达
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OsGA20ox2不同长度RNAi片段对水稻株高等农艺性状的遗传效应 被引量：8
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作者 王坚 赵开军 +1 位作者 乔枫 杨生龙 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期632-638,共7页
利用OsGA20ox2基因序列构建不同长度的RNAi片段并导入水稻,获得不同高度的矮化植株。将这些矮化植株与野生型植株回交获得B1F2群体,卡方检测表明B1F2群体矮秆植株数和高秆植株数符合3∶1比例,表现为矮秆显性的遗传规律。对矮化植株的F5... 利用OsGA20ox2基因序列构建不同长度的RNAi片段并导入水稻,获得不同高度的矮化植株。将这些矮化植株与野生型植株回交获得B1F2群体,卡方检测表明B1F2群体矮秆植株数和高秆植株数符合3∶1比例,表现为矮秆显性的遗传规律。对矮化植株的F5和B1F2群体株高、各茎节间长度和一些主要农艺性状方差分析显示,OsGA20ox2基因的RNAi能显著缩短株高和各节间长度(P<0.05),RNAi干扰片段越长,使植株株高和节间长度缩短程度越大,可使株高降低24～42cm,矮化22%～39%。在同一长度的RNAi干扰片段下,倒一节节间长度平均缩短与倒二节节间长度平均缩短非常相近,倒三节和倒四节节间长度平均缩短非常相近,总的缩短程度是倒四节>倒三节>倒二节>倒一节。这种近基部节间长度缩短幅度和比例较大的特点,利于提高水稻的抗倒伏能力,同时上部节间缩短幅度和比例较小,有效地保持合理株高,不使生物产量明显降低,有利于水稻的稳产和高产。OsGA20ox2基因的RNAi不影响千粒重、结实率、穗长等主要农艺性状或影响很小。 展开更多
关键词 rnai 株高 节间长度 遗传效应
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Survivin基因RNAi对子宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响 被引量：5
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作者 宋晖 辛晓燕 +3 位作者 肖锋 赵海波 张建芳 王德堂 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期374-378,共5页
目的:观察survivin基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响。方法:随机将BALB/c裸鼠分4组,分别注射转染携survivin RNAi重组质粒的HeLa-s2细胞、转染阴性对照质粒细胞HeLa-NC、转染空质粒细胞HeLa-U6 neo及宫颈癌He-La细胞,建立人... 目的:观察survivin基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响。方法:随机将BALB/c裸鼠分4组,分别注射转染携survivin RNAi重组质粒的HeLa-s2细胞、转染阴性对照质粒细胞HeLa-NC、转染空质粒细胞HeLa-U6 neo及宫颈癌He-La细胞,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型。观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组化法检测移植瘤组织中survivin蛋白的表达和微血管密度(MVD),H-E染色及TUNEL染色观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响。结果:成功建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,HeLa-s2组裸鼠瘤重明显小于其他3组(P<0.05);肿瘤生长抑制率为67.9%。免疫组化结果显示,HeLa-s2组裸鼠移植瘤组织中survivin蛋白表达显著下降;MVD值也显著降低(P<0.05);H-E染色、TUNEL染色结果显示,HeLa-s2组裸鼠移植瘤组织细胞凋亡明显增多(P<0.05),AI值达(22.73±1.37)%。结论:Sur-vivin基因RNAi可通过下调移植瘤组织survivin蛋白表达和降低其MVD抑制移植瘤生长并促进其凋亡。 展开更多
关键词 SURVIVIN rnai 子宫颈肿瘤 裸鼠 移植瘤 凋亡
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