HIV-1 Rev蛋白和人DDX3解旋酶对HCV RNA复制影响 被引量：1

1

作者 罗亚东 洪国枯 +3 位作者 贾鸣 郭艳 刘明 毛青 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期2329-2333,共5页

目的研究人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression,Rev)和DEAD-box蛋白家族ATP依赖的RNA解旋酶3(DDX3)对HCV RNA复制的影响。方法利用HCV表达质粒p CDNA3.1-JFH1转染Huh7细胞以构... 目的研究人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression,Rev)和DEAD-box蛋白家族ATP依赖的RNA解旋酶3(DDX3)对HCV RNA复制的影响。方法利用HCV表达质粒p CDNA3.1-JFH1转染Huh7细胞以构建稳定的HCV细胞复制模型,另构建p CDNA3.1-Rev-Flag-m Cherry和p CDNA3.1-DDX3-YFP-Flag的过表达载体,通过PCR、Western blot和核苷酸测序等方法鉴定载体构建成功后,将实验分为2组对照实验,对照组均只将HCV复制质粒转染Huh7细胞:1组实验组为DDX3和HCV RNA复制质粒共转染入Huh7细胞;2组的实验组为Rev、DDX3和HCV RNA复制质粒共转染入Huh7细胞。最后通过q PCR定量测定各组HCV RNA复制水平并进行比较。结果转染后48 h测各组HCV RNA的复制水平,DDX3+HCV RNA复制质粒组中HCV RNA的水平(1.09×107±0.18×107)明显高于单独转染HCV RNA复制质粒组(4.79×106±1.24×106)(P=0.03);而Rev+DDX3+HCV RNA复制质粒组中HCV RNA的水平(1.74×107±0.40×107)明显低于单独转染HCV RNA复制质粒组(4.17×107±0.46×107)(P<0.001)。结论成功构建Rev蛋白和DDX3的过表达载体,并初步证明人DDX3解旋酶可促进HCV RNA的复制,而Rev蛋白和DDX3共同作用可抑制HCV RNA的复制。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 病毒颗粒蛋白表达调节因子 DEAD-box蛋白家族的ATP依赖的rna解旋酶3 丙型肝炎病毒

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DDX3 RNA解旋酶在基因调控、肿瘤和病毒感染中的功能

2

作者 武炜 孙英杰 丁铲 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第1期95-102,共8页

DEAD-box RNA解旋酶DDX3是一种多功能的蛋白,其参与RNA代谢的多个过程,包括转录、剪接、mRNA核输出、翻译、RNA降解和核糖体生物合成。此外,DDX3还参与了细胞周期调控、细胞凋亡、Wnt-β-catenin信号和肿瘤发生等。最近研究表明,DDX3参... DEAD-box RNA解旋酶DDX3是一种多功能的蛋白,其参与RNA代谢的多个过程,包括转录、剪接、mRNA核输出、翻译、RNA降解和核糖体生物合成。此外,DDX3还参与了细胞周期调控、细胞凋亡、Wnt-β-catenin信号和肿瘤发生等。最近研究表明,DDX3参与天然免疫信号通路并且促进抗病毒分子(如:干扰素调控因子3和Ⅰ型干扰素)的产生,DDX3也是一些病毒的主要靶点,因此,DDX3可作为研发抗病毒药物的新靶点。本文简单介绍了DDX3的结构和功能,总结了其在基因表达调控、细胞周期调控和细胞凋亡过程中发挥的作用,最后阐述了病毒如何通过与DDX3的互作调控宿主先天性免疫,以期为细胞的稳态调控和抗病毒先天性免疫调控提供新的思路。 展开更多

关键词 ddx3 rna解旋酶基因 调控 肿瘤 病毒感染

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RNA解旋酶Ddx5(p68)和Ddx17(p72)的特点和功能 被引量：5

3

作者 朱玉萍 沈涛 +1 位作者 王抒 黎健 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期294-297,共4页

DEAD box蛋白家族是一类在进化中高度保守的ATP依赖的RNA解旋酶,广泛存在于从细菌到哺乳动物的许多物种中,根据其氨基酸序列(Asp-Glu-Ala-Asp)命名的DEAD box RNA解旋酶不仅参与需要RNA结构调节的所有细胞过程,而且DEAD box家族的一些... DEAD box蛋白家族是一类在进化中高度保守的ATP依赖的RNA解旋酶,广泛存在于从细菌到哺乳动物的许多物种中,根据其氨基酸序列(Asp-Glu-Ala-Asp)命名的DEAD box RNA解旋酶不仅参与需要RNA结构调节的所有细胞过程,而且DEAD box家族的一些蛋白成员在转录调节中也发挥重要作用,如DEAD蛋白家族中高度相关的成员Ddx5(p68)和Ddx17(p72)对雌激素受体α、抑癌基因p53、肌原性调节蛋白MyoD和Runx2等的共激活作用。本文着重阐述DEAD box RNA解旋酶家族中Ddx5(p68)和Ddx17(p72)特点和它们在转录中的调节功能。 展开更多

关键词 rna解旋酶 ddx5(p68) ddx17(p72)

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猪瘟病毒NS3蛋白ATPase/RNA解旋酶功能区的表达与纯化 被引量：3

4

作者 郑杰 宁宜宝 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第10期43-46,共4页

采用RT-PCR技术扩增出猪瘟病毒石门株和C株NS3基因的ATPase/RNA解旋酶功能区,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,获得重组质粒pET-NS3SM和pET-NS3C;PCR、酶切鉴定和序列分析结果表明目的基因插入位置、方向和读码框完全正确;0.8 mmol/L I... 采用RT-PCR技术扩增出猪瘟病毒石门株和C株NS3基因的ATPase/RNA解旋酶功能区,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,获得重组质粒pET-NS3SM和pET-NS3C;PCR、酶切鉴定和序列分析结果表明目的基因插入位置、方向和读码框完全正确;0.8 mmol/L IPTG诱导得到分子量为54kD的目的蛋白,Western blotting结果表明,表达的目的蛋白与猪瘟高免血清没有出现肉眼可见的反应;通过ELISA试验结果表明,重组蛋白能被CSFV阳性血清识别。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 NS3基因 ATPase/rna解旋酶 克隆 表达

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DDX3X/NF-κB通路介导蛛网膜下腔出血小鼠早期神经元凋亡

5

作者 郝广志 郇宇 +2 位作者 韩雨薇 董玉书 梁国标 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期85-90,共6页

目的:研究DDX3X/NF-κB通路在蛛网膜下腔出血(SAH)小鼠早期神经元凋亡过程中的作用。方法:利用颈内动脉穿刺的方法构建SAH小鼠模型,对小鼠进行神经功能评分。使用表达DDX3X靶向shRNA的重组慢病毒(Lv-shDDX3X)预先敲低脑内DDX3X的表达,... 目的:研究DDX3X/NF-κB通路在蛛网膜下腔出血(SAH)小鼠早期神经元凋亡过程中的作用。方法:利用颈内动脉穿刺的方法构建SAH小鼠模型,对小鼠进行神经功能评分。使用表达DDX3X靶向shRNA的重组慢病毒(Lv-shDDX3X)预先敲低脑内DDX3X的表达,或者通过NF-κB抑制剂NF-κB-IN-1(简称IN-1)抑制NF-κB信号通路,利用Western Blot检测小鼠皮质DDX3X和NF-κB(p65)的表达,通过TUNEL/NeuN染色检测各组小鼠大脑皮质神经元的凋亡。结果:SAH术后24 d小鼠神经功能显著障碍(P<0.05),皮质中DDX3X表达显著增加而NF-κB(p65)的表达显著降低(P<0.05)。预先敲低DDX3X后,小鼠神经功能显著恢复,NF-κB(p65)蛋白表达显著高于SAH组(P<0.05);当在敲低DDX3X表达的同时使用IN-1抑制NF-κB活性,则小鼠神经功能恢复不明显。TUNEL/NeuN染色显示敲低DDX3X表达后小鼠脑组织中TUNEL阳性的死亡神经元数量少于SAH组(P<0.05),而如果在敲低DDX3X表达的同时使用IN-1抑制NF-κB活性,则TUNEL阳性的神经元数量减少不明显。结论:DDX3X/NF-κB通路介导了SAH后早期脑损伤小鼠的细胞死亡。 展开更多

关键词 DEAD-box rna解旋酶3(ddx3X) NF-ΚB 蛛网膜下腔出血 早期脑损伤 凋亡 小鼠

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DDX21 RNA解旋酶不同结构域的功能特点解析

6

作者 谢艳 张倩 +1 位作者 刘娜女 奚绪光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期446-456,共11页

DEAD-box家族是在生物体内普遍存在的一类高度保守的RNA解旋酶,在RNA的合成和加工、细胞发育和细胞代谢等过程中都发挥着重要作用。DDX21 RNA解旋酶是DEAD-box家族成员之一,而目前为止DDX21的酶学功能及结构特征尚未被完全了解。本研究... DEAD-box家族是在生物体内普遍存在的一类高度保守的RNA解旋酶,在RNA的合成和加工、细胞发育和细胞代谢等过程中都发挥着重要作用。DDX21 RNA解旋酶是DEAD-box家族成员之一,而目前为止DDX21的酶学功能及结构特征尚未被完全了解。本研究运用生物化学与生物物理学前沿技术,系统地研究了DDX21各结构域在不同功能中发挥的作用。首先重组构建并纯化了人的DDX21 RNA解旋酶及不同的截短蛋白质,利用动态激光散射和凝胶层析技术分析各蛋白质的寡聚形态,发现N-端的非功能区(N-端181aa)与C-端的4个FRGQR重复结构域对其结构有较大的影响;利用荧光偏振技术比较分析了各蛋白质与单链RNA的结合反应,结果显示,仅保留DEADc和HELICc结构域的截短蛋白质与单链RNA完全没有亲和性,缺失N-端181aa的截短蛋白质对ssRNA的结合能力与全长蛋白质基本一致,而仅缺失C-端的4个重复FRGQR结构域的截短蛋白质与单链RNA的亲和能力将显著下降;利用快速停流检测技术分析各截短蛋白质的解旋及退火活性,发现DEADc、HELICc及GUCT_RHII三个结构域共同参与DDX21的解旋功能,另一方面,缺失C-端4个FRGQR重复结构域的截短蛋白质导致退火能力的丧失。本研究揭示了DDX21的GUCT_RHII结构域及C-端4个FRGQR重复结构域在其结构及功能中发挥的重要作用,为今后研究DDX21的结构及其细胞功能提供了重要的理论依据。 展开更多

关键词 ddx21 rna解旋酶 荧光偏振技术 快速停流检测技术 解旋活性 退火活性

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DDX3和CK1ε在ALS转基因小鼠大脑皮层中的表达变化 被引量：2

7

作者 王箐 原萌 +5 位作者 刘焕彩 梁婵婵 林宝勇 张雅雯 周风华 陈燕春 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期15-20,共6页

目的:观察RNA解旋酶DDX3和酪蛋白激酶1ε(CK1ε)在ALS转基因小鼠大脑皮层组织中的表达变化,探讨DDX3与CK1ε表达改变在ALS发病中的作用和意义。方法:选择SOD1-G93A转基因小鼠进行试验,分别于发病早期(95 d)、中期(108 d)、晚期(122 d)... 目的:观察RNA解旋酶DDX3和酪蛋白激酶1ε(CK1ε)在ALS转基因小鼠大脑皮层组织中的表达变化,探讨DDX3与CK1ε表达改变在ALS发病中的作用和意义。方法:选择SOD1-G93A转基因小鼠进行试验,分别于发病早期(95 d)、中期(108 d)、晚期(122 d)取材。应用免疫荧光双标染色方法检测DDX3和CK1ε在ALS转基因小鼠大脑皮层中的表达变化规律及其与神经元的共定位关系。应用RT-PCR和Western Blot技术检测ALS转基因小鼠大脑皮层组织中DDX3和CK1ε在mRNA、蛋白水平的表达变化,每组均选择同年龄的野生型小鼠作为对照组。结果:与野生型鼠相比,ALS转基因小鼠大脑皮层组织中的DDX3蛋白和mRNA早期表达均无明显变化,中、晚期表达均升高;CK1ε蛋白在ALS小鼠发病早期没有明显改变,中、晚期表达升高,mRNA表达无明显变化。免疫荧光双标结果显示,ALS转基因小鼠和野生型小鼠大脑皮层组织中均可检测到DDX3和CK1ε阳性细胞,且与神经元共表达。ALS转基因小鼠大脑皮层组织内DDX3与CK1ε免疫反应性较同龄野生型鼠明显增强。结论:DDX3与CK1ε表达异常与ALS大脑皮层病变密切相关,参与了ALS发病。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化症 转基因小鼠 大脑皮层 rna解旋酶ddx3 酪蛋白激酶1ε 小鼠

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口蹄疫病毒3′UTR负链互作的宿主蛋白筛选

8

作者 潘红 周赛赛 +1 位作者 袁红根 宋云峰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2279-2291,共13页

本研究旨在筛选口蹄疫病毒(foot and mouth disease,FMDV)负链RNA复制过程中与3′UTR结合的宿主蛋白。首先,通过RNA pull down结合质谱,鉴定出与3′UTR负链结合的宿主蛋白。对质谱鉴定到的蛋白结果进行GO功能注释分析、KEGG通路富集分... 本研究旨在筛选口蹄疫病毒(foot and mouth disease,FMDV)负链RNA复制过程中与3′UTR结合的宿主蛋白。首先,通过RNA pull down结合质谱,鉴定出与3′UTR负链结合的宿主蛋白。对质谱鉴定到的蛋白结果进行GO功能注释分析、KEGG通路富集分析和互作网络筛选分析,并构建真核表达质粒以及原核表达质粒,表达该互作蛋白来验证RNA与蛋白的互作特异性。其次,截短3′UTR探究RNA与蛋白的互作区域,最后利用Co-IP探究宿主互作蛋白与病毒蛋白的互作关系。结果发现与3′UTR互作结合的蛋白多为核仁蛋白,其中以DEAD-box RNA解旋酶蛋白家族的Ddx18蛋白作为重点研究对象。通过构建该蛋白的真核表达载体,利用RNA pull down、RIP,以及EMSA证实Ddx18确实与3′UTR负链互作。转录出截短的3′UTR负链RNA,利用RNA pull down试验得出Ddx18与3′UTR负链的互作不依赖poly(U),且不与截短后的SL1和SL2互作。利用Co-IP试验证明2C病毒蛋白能与Ddx18蛋白互作。综上,3′UTR与Ddx18蛋白的互作可能基于RNA的空间结构,而2C病毒蛋白与Ddx18蛋白结合,提示2C可能间接结合3′UTR而共同形成复制复合物参与到FMDV的复制中。通过筛选与3′UTR负链互作的宿主蛋白,为进一步探究FMDV复制相关机制从而研究相关药物靶点奠定实验基础。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 3′非编码rna负链 互作宿主蛋白 ddx18 2C

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急性髓细胞白血病在死盒RNA解旋酶DDX5上的获得性依赖

9

作者 郑媛媛 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1552-1552,共1页

急性髓细胞白血病（AML）的治疗需要应用对正常细胞和肿瘤细胞都有毒性的药物,而复发性急性髓样白血病对随后的化疗也有抵抗性。因此,需要用对细胞毒性最小的剂量选择性杀死白血病细胞。

关键词 rna解旋酶ddx5 急性髓样白血病 白血病细胞 解旋酶 抵抗性 体内抑制 造血功能 凋亡反应 活性氧簇 清除剂

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DDX解旋酶家族分子功能的研究进展 被引量：4

10

作者 王沐(综述) 侯晋(审阅) 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1162-1169,共8页

DDX解旋酶(DEAD-box RNA helicases)是经典的ATP依赖性解旋酶家族,目前已知共有50多个家族成员,主要发挥RNA加工代谢相关调控作用,尤其是经典的RNA解旋功能被学界公认为DDX解旋酶最基本的功能。近年来,DDX解旋酶家族成员已被发现与亚细... DDX解旋酶(DEAD-box RNA helicases)是经典的ATP依赖性解旋酶家族,目前已知共有50多个家族成员,主要发挥RNA加工代谢相关调控作用,尤其是经典的RNA解旋功能被学界公认为DDX解旋酶最基本的功能。近年来,DDX解旋酶家族成员已被发现与亚细胞结构动态转换、细胞周期转换、抗病毒免疫应答、胚胎形成、机体精子发生、能量物质代谢等生理过程密切相关,而目前更为关注的是其在肿瘤发生发展病理过程中所发挥的重要作用,且部分DDX家族分子已经成为肿瘤诊断、预后评估以及药物治疗的潜在靶点,为未来的临床治疗决策注入强大的活力。本文主要针对DDX家族分子的结构、生物学功能、营养物质代谢、天然免疫及肿瘤发生与治疗等方面的研究展开综述。 展开更多

关键词 ddx解旋酶家族 rna调控 蛋白-蛋白相互作用 天然免疫 物质代谢 肿瘤发生 联合治疗

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DDX3的病理生理学作用

11

作者 徐伍 徐瑞 +2 位作者 张信琴 林加龙 裴海峰 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期104-112,共9页

DEAD-box RNA解旋酶3(DEAD-box RNA helicase 3,DDX3),亦称DEAD-box RNA解旋酶3 X连锁(DEAD-box RNA helicase 3 X-linked,DDX3X),是一种高度保守并依赖ATP的RNA解旋酶,广泛分布于真核生物中,主要定位在细胞核和细胞质发挥生理作用,与RN... DEAD-box RNA解旋酶3(DEAD-box RNA helicase 3,DDX3),亦称DEAD-box RNA解旋酶3 X连锁(DEAD-box RNA helicase 3 X-linked,DDX3X),是一种高度保守并依赖ATP的RNA解旋酶,广泛分布于真核生物中,主要定位在细胞核和细胞质发挥生理作用,与RNA剪接和衰变、mRNA输出、转录、翻译相关,进一步参与细胞周期的进展、先天免疫反应、细胞凋亡、癌症发生与抑制、病毒的复制周期等多种重要的细胞生理过程.长期以来,DDX3的基因表达,调控及其功能以及它与疾病的关系一直被关注,尤其是与病毒和癌症的关系更为热点研究.因此,本文主要探讨、总结DDX3的病理生理学作用. 展开更多

关键词 DEAD-box rna解旋酶3 DEAD-box rna解旋酶3 X连锁 rna 肿瘤 病毒

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柞蚕传染性软腐病病毒(Iflavirus)功能蛋白的基因克隆和结构分析 被引量：2

12

作者 耿鹏 周倩 +2 位作者 安利佳 OLLE Terenius 李文利 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期843-850,共8页

从患柞蚕吐白水软化病的病蚕体内分离到一株传染性软腐病病毒属(Iflavirus)病毒。研究柞蚕传染性软腐病病毒基因组结构及主要功能蛋白的结构域,为确定该病毒株的分类学地位和阐释其侵染机制提供基础信息。克隆了编码柞蚕传染性软腐病病... 从患柞蚕吐白水软化病的病蚕体内分离到一株传染性软腐病病毒属(Iflavirus)病毒。研究柞蚕传染性软腐病病毒基因组结构及主要功能蛋白的结构域,为确定该病毒株的分类学地位和阐释其侵染机制提供基础信息。克隆了编码柞蚕传染性软腐病病毒功能蛋白的RNA解旋酶基因(423 bp)、3C半胱氨酸蛋白酶基因(405 bp)以及RNA依赖性的RNA聚合酶基因(882 bp)。通过同源模建方法,构建了柞蚕传染性软腐病病毒3个功能蛋白的三维结构模型,并采用拉氏图和Profile 3D等方法验证了模型的可靠性。将柞蚕传染性软腐病病毒中RNA依赖性的RNA聚合酶序列与另外16个小RNA病毒同源序列进行比对并构建系统发育树,显示柞蚕传染性软腐病病毒与蜜蜂残翅病病毒和蜜蜂瓦螨虫病毒的亲缘关系十分相近。 展开更多

关键词 柞蚕吐白水软化病 传染性软腐病病毒属 rna解旋酶 3C半胱氨酸蛋白酶 rna依赖性的rna聚合酶

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