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多药耐药基因QRT-PCR检测中内标准DNA和RNA模板的构建 被引量:1
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作者 曹丽萍 王斌 郁知非 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1997年第4期393-398,共6页
利用多药耐药基因(MDR1)全基因质粒和分子克隆技术,经二次克隆将戊型肝炎病毒一段238bP的核苷酸序列插入MDR1 308 bp的目的 cDNA片段,构建了插入突变型MDR1-cDNA重组体作为定量PCR的DNA竞争模板;再经第三次克隆构建了插入突变型MDR1-RN... 利用多药耐药基因(MDR1)全基因质粒和分子克隆技术,经二次克隆将戊型肝炎病毒一段238bP的核苷酸序列插入MDR1 308 bp的目的 cDNA片段,构建了插入突变型MDR1-cDNA重组体作为定量PCR的DNA竞争模板;再经第三次克隆构建了插入突变型MDR1-RNA重组体,最后经体外转录出546 nt的正链RNA作为逆转录的RNA竞争模板。所建立的定量逆转录-多聚酶链反应(QRT-PCR)技术简便、快速、灵敏,可检出1fg水平的MDR1 mRNA,为临床MDR1表达的定量检测提供了确实可行的手段。 展开更多
关键词 多药耐药基因 定量逆转录多聚酶链反应 DNA模板 rna模板 白血病
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端粒酶RNA亚基模板突变抑制HeLa肿瘤细胞的生长 被引量:3
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作者 廖晶 周俊宜 +4 位作者 杨锟 官志平 谢金卫 袁广卿 骆晓枫 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期177-181,共5页
在端粒酶阳性的肿瘤细胞中引入带突变模板的人端粒酶RNA亚基(MT-hTR)是一种新颖的抑制肿瘤细胞生长的方法.本研究通过构建MT-hTR真核表达重组体,初步观察其对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响.通过分子克隆技术及PCR介导的定点突变技术构建... 在端粒酶阳性的肿瘤细胞中引入带突变模板的人端粒酶RNA亚基(MT-hTR)是一种新颖的抑制肿瘤细胞生长的方法.本研究通过构建MT-hTR真核表达重组体,初步观察其对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响.通过分子克隆技术及PCR介导的定点突变技术构建野生型及突变型hTR表达重组体,将空载体及重组体分别与质粒pEGFP-C1通过脂质体共转染HeLa细胞,经药物G418的筛选得到稳定表达外源基因的细胞.RT-PCR检测目的基因的表达,TRAP分析细胞的端粒酶活性,并通过MTT法绘制各组细胞的生长曲线.结果发现,重组体在细胞内能成功表达目的基因,并且在Mutant1转染细胞中检测到相应的突变型端粒酶活性.构建的4个MT-hTR重组体中,有3个能使HeLa细胞生长速度减缓.以上结果提示,在HeLa细胞内表达MT-hTR能抑制细胞的生长速度,并且突变模板的设计可能会影响到抑制效应的发挥. 展开更多
关键词 端粒 端粒酶 突变模板区人端粒酶rna亚基 定点突变
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