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多药耐药基因QRT-PCR检测中内标准DNA和RNA模板的构建
被引量:
1
1
作者
曹丽萍
王斌
郁知非
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
1997年第4期393-398,共6页
利用多药耐药基因(MDR1)全基因质粒和分子克隆技术,经二次克隆将戊型肝炎病毒一段238bP的核苷酸序列插入MDR1 308 bp的目的 cDNA片段,构建了插入突变型MDR1-cDNA重组体作为定量PCR的DNA竞争模板;再经第三次克隆构建了插入突变型MDR1-RN...
利用多药耐药基因(MDR1)全基因质粒和分子克隆技术,经二次克隆将戊型肝炎病毒一段238bP的核苷酸序列插入MDR1 308 bp的目的 cDNA片段,构建了插入突变型MDR1-cDNA重组体作为定量PCR的DNA竞争模板;再经第三次克隆构建了插入突变型MDR1-RNA重组体,最后经体外转录出546 nt的正链RNA作为逆转录的RNA竞争模板。所建立的定量逆转录-多聚酶链反应(QRT-PCR)技术简便、快速、灵敏,可检出1fg水平的MDR1 mRNA,为临床MDR1表达的定量检测提供了确实可行的手段。
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关键词
多药耐药基因
定量逆转录多聚酶链反应
DNA
模板
rna模板
白血病
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职称材料
端粒酶RNA亚基模板突变抑制HeLa肿瘤细胞的生长
被引量:
3
2
作者
廖晶
周俊宜
+4 位作者
杨锟
官志平
谢金卫
袁广卿
骆晓枫
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期177-181,共5页
在端粒酶阳性的肿瘤细胞中引入带突变模板的人端粒酶RNA亚基(MT-hTR)是一种新颖的抑制肿瘤细胞生长的方法.本研究通过构建MT-hTR真核表达重组体,初步观察其对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响.通过分子克隆技术及PCR介导的定点突变技术构建...
在端粒酶阳性的肿瘤细胞中引入带突变模板的人端粒酶RNA亚基(MT-hTR)是一种新颖的抑制肿瘤细胞生长的方法.本研究通过构建MT-hTR真核表达重组体,初步观察其对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响.通过分子克隆技术及PCR介导的定点突变技术构建野生型及突变型hTR表达重组体,将空载体及重组体分别与质粒pEGFP-C1通过脂质体共转染HeLa细胞,经药物G418的筛选得到稳定表达外源基因的细胞.RT-PCR检测目的基因的表达,TRAP分析细胞的端粒酶活性,并通过MTT法绘制各组细胞的生长曲线.结果发现,重组体在细胞内能成功表达目的基因,并且在Mutant1转染细胞中检测到相应的突变型端粒酶活性.构建的4个MT-hTR重组体中,有3个能使HeLa细胞生长速度减缓.以上结果提示,在HeLa细胞内表达MT-hTR能抑制细胞的生长速度,并且突变模板的设计可能会影响到抑制效应的发挥.
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关键词
端粒
端粒酶
突变
模板
区人端粒酶
rna
亚基
定点突变
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职称材料
题名
多药耐药基因QRT-PCR检测中内标准DNA和RNA模板的构建
被引量:
1
1
作者
曹丽萍
王斌
郁知非
机构
广州流花桥医院血液科
中山医科大学免疫学教研室
暨南大学医学院血液病研究室
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
1997年第4期393-398,共6页
基金
广东省重点攻关项目(粤科计字1996/58)
自然科学基金(950899)
文摘
利用多药耐药基因(MDR1)全基因质粒和分子克隆技术,经二次克隆将戊型肝炎病毒一段238bP的核苷酸序列插入MDR1 308 bp的目的 cDNA片段,构建了插入突变型MDR1-cDNA重组体作为定量PCR的DNA竞争模板;再经第三次克隆构建了插入突变型MDR1-RNA重组体,最后经体外转录出546 nt的正链RNA作为逆转录的RNA竞争模板。所建立的定量逆转录-多聚酶链反应(QRT-PCR)技术简便、快速、灵敏,可检出1fg水平的MDR1 mRNA,为临床MDR1表达的定量检测提供了确实可行的手段。
关键词
多药耐药基因
定量逆转录多聚酶链反应
DNA
模板
rna模板
白血病
Keywords
multidrug resistance gene QRT-PCR DNA template
rna
template leukemia
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
端粒酶RNA亚基模板突变抑制HeLa肿瘤细胞的生长
被引量:
3
2
作者
廖晶
周俊宜
杨锟
官志平
谢金卫
袁广卿
骆晓枫
机构
中山大学中山医学院生物化学教研室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期177-181,共5页
基金
广东省自然科学基金重点项目(No.04105351)
广东省科技计划项目(No.2006B35502007)~~
文摘
在端粒酶阳性的肿瘤细胞中引入带突变模板的人端粒酶RNA亚基(MT-hTR)是一种新颖的抑制肿瘤细胞生长的方法.本研究通过构建MT-hTR真核表达重组体,初步观察其对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响.通过分子克隆技术及PCR介导的定点突变技术构建野生型及突变型hTR表达重组体,将空载体及重组体分别与质粒pEGFP-C1通过脂质体共转染HeLa细胞,经药物G418的筛选得到稳定表达外源基因的细胞.RT-PCR检测目的基因的表达,TRAP分析细胞的端粒酶活性,并通过MTT法绘制各组细胞的生长曲线.结果发现,重组体在细胞内能成功表达目的基因,并且在Mutant1转染细胞中检测到相应的突变型端粒酶活性.构建的4个MT-hTR重组体中,有3个能使HeLa细胞生长速度减缓.以上结果提示,在HeLa细胞内表达MT-hTR能抑制细胞的生长速度,并且突变模板的设计可能会影响到抑制效应的发挥.
关键词
端粒
端粒酶
突变
模板
区人端粒酶
rna
亚基
定点突变
Keywords
telomere
telomerase
mutant template hTR
site-directed mutagenesis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
多药耐药基因QRT-PCR检测中内标准DNA和RNA模板的构建
曹丽萍
王斌
郁知非
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
1997
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
端粒酶RNA亚基模板突变抑制HeLa肿瘤细胞的生长
廖晶
周俊宜
杨锟
官志平
谢金卫
袁广卿
骆晓枫
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
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已选择
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