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马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因和外壳蛋白基因介导的抗病性研究 被引量:9
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作者 刘晓玲 宋云枝 +3 位作者 刘红梅 温孚江 朱常香 白庆荣 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期827-832,共6页
以马铃薯X病毒(potatovirusX,PVX)的RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)方法分别扩增出长度为681bp的非翻译马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因(PVX p25)和长度为714bp的非翻译马铃薯X病毒外壳蛋白基因(PVX CP)。并分别构建植物表达... 以马铃薯X病毒(potatovirusX,PVX)的RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)方法分别扩增出长度为681bp的非翻译马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因(PVX p25)和长度为714bp的非翻译马铃薯X病毒外壳蛋白基因(PVX CP)。并分别构建植物表达载体pROKⅡp25和pROKⅡCP。利用农杆菌介导方法转化烟草NC89。经卡那霉素筛选、PCR检测,共获得转非翻译PVX p25的转基因植株78株,转非翻译PVX CP的转基因植株83株。抗病性试验表明,转非翻译PVX p25的78株中有31株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为39.7%;转非翻译PVX CP的83株中有11株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为13.3%。分子生物学检测和抗病性分析表明,抗病性均为RNA介导的病毒抗性。研究结果初步证明,转非翻译PVX p25可以更有效地获得抗PVX转基因植株。 展开更多
关键词 马铃薯X病毒 运动蛋白 外壳蛋白 rna介导的病毒
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利用人工ta-siRNA策略培育抗PVY烟草 被引量:1
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作者 吴斌 姜珊珊 +3 位作者 张眉 徐德坤 辛志梅 王升吉 《山东农业科学》 2018年第12期86-90,共5页
人工ta-siRNA基因沉默技术具有同时表达多个ta-siRNA和产生ta-siRNA位置固定等特点,在精确性和高效性等方面有明显优势。本研究以马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)外壳蛋白(coat protein,CP)为靶基因,选取不同位置的3个siRNA为靶序列,烟... 人工ta-siRNA基因沉默技术具有同时表达多个ta-siRNA和产生ta-siRNA位置固定等特点,在精确性和高效性等方面有明显优势。本研究以马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)外壳蛋白(coat protein,CP)为靶基因,选取不同位置的3个siRNA为靶序列,烟草TAS3a作为ta-siRNA表达的骨架,分别构建植物表达载体PVY-CP5'、PVY-CPM和PVY-CP3',并利用叶盘法转化烟草NC89。瞬时表达检测结果显示,3个syn-tasiRNA植物表达载体均能在植物体内成功表达siRNA;抗病性鉴定发现,转PVY-CP5'、PVY-CPM和PVY-CP3'的转基因株系中抗病株系的比率分别为45. 08%、27. 21%、61. 90%;Northern杂交分析显示,目的片段转录产物(总RNA)的积累量与植株的抗病性呈负相关,转基因植株中均有siRNA存在,表明植株的病毒抗性是由RNA介导的。 展开更多
关键词 人工ta-sirna 马铃薯Y病毒(PVY) rna介导的病毒 转基因烟草
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基因沉默番木瓜环斑病毒复制酶基因(PRSV-Nib)获得抗病毒病番木瓜的研究
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作者 吴清铧 贾瑞宗 +5 位作者 郭静远 杨牧之 胡玉娟 郝志刚 赵辉 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期837-846,共10页
番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistanc... 番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistance,PDR)”的抗病育种策略获得成功广泛应用。然而依赖于序列同源性的抗病性与病毒突变导致多样性增加之间的矛盾成为番木瓜育种科学家的新挑战。本研究拟采用RNAi策略针对复制酶(nuclear inclusion b.Nib)获得广谱抗PRSV番木瓜新种质。通过团队已建立的胚性愈伤诱导-农杆菌介导转化-再生苗诱导的番木瓜遗传转化体系,共获得经过抗性筛选的再生苗52株,通过特异性PCR进行筛选共计获得24株转基因阳性植株。通过对T0代田间自然发病试验中,转基因番木瓜株系抗病性明显高于非转基因对照,其中NibB5-2田间抗病性最优。通过hiTAIL-PCR方法确定NibB5-2插入位点位于第2号染色体supercontig_30的1976766的位置。T1代接种试验中,无病毒积累且无发病症状,初步确认具有良好的病毒抗性,为番木瓜抗病育种提供新思路。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 Nib基因 rna介导的病毒
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植物抗病毒基因工程研究进展 被引量:4
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作者 马丽 周玉亮 张春庆 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第3期14-20,共7页
为了得到抗病毒的寄主植物,很多学者进行了大量研究,形成了许多行之有效的抗病毒育种策略。利用来源于病毒自身基因的一些抗病毒策略(Pathogen-derived resistance,PDR),如病毒外壳蛋白基因,复制酶基因,反义RNA、移动蛋白基因等,均可以... 为了得到抗病毒的寄主植物,很多学者进行了大量研究,形成了许多行之有效的抗病毒育种策略。利用来源于病毒自身基因的一些抗病毒策略(Pathogen-derived resistance,PDR),如病毒外壳蛋白基因,复制酶基因,反义RNA、移动蛋白基因等,均可以获得一些抗病毒植物。近年来,对RNA介导的抗病毒策略机制进行了深入研究。基因沉默的发现使得人们对植物和病毒的相互关系有了一个新的认识。转录后基因沉默(Post-transcriptional gene silencing,PT-GS)现象是植物抵御病毒入侵,保持自身基因组完整性的一种防御机制。对于PTGS产生的机理,已经提出不少模型,但是都未能较全面地解释基因沉默中出现的各种实验现象。对转录后基因沉默的特点、发生机理和作为抗病毒防卫机制,在改良植物抗病性方面的应用和进展进行了综述。 展开更多
关键词 病原体起源(PDR) rna介导抗性 转录后基因沉默
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