我国是家猪养殖和消费大国,提高母猪的繁殖力对于促进我国生猪产业的发展具有重要的作用。排卵率和产仔数是影响家畜繁殖力的关键因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鉴定是控制绵羊排卵数和多胎性状的一个主效基因...我国是家猪养殖和消费大国,提高母猪的繁殖力对于促进我国生猪产业的发展具有重要的作用。排卵率和产仔数是影响家畜繁殖力的关键因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鉴定是控制绵羊排卵数和多胎性状的一个主效基因,然而目前在家猪BMP15基因中尚未发现类似绵羊多胎品系的天然突变。基于高等哺乳动物基因功能的保守性和CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)等基因组编辑技术对动物基因组定点修饰的高效性,应用CRISPR/Cas9技术对家猪BMP15基因进行精确的遗传修饰,使家猪获得类似多胎绵羊的天然突变,对于研究该基因对家猪繁殖力的影响以及培育高繁殖力家猪新品系具有重要的意义。本研究通过CRISPR/Cas9对长白猪胎儿成纤维(porcine embryonic fibroblasts,PEF)细胞中BMP15基因进行打靶,T7E1分析显示打靶效率仅有5%。随后通过共转染RGS双荧光替代性报告载体(RFP-GFP surrogate reporter),并应用流式细胞术分选出双荧光细胞,富集到基因组被CRISPR/Cas9修饰的细胞,使基因打靶效率提高至18%。本研究结果表明,应用RGS双荧光替代性报告载体可以有效提高CRISPR/Cas9在PEF细胞中对BMP15基因的打靶效率,为今后通过体细胞核移植技术培育BMP15基因编辑猪进行了有效的探索。展开更多
目的肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)是一群具有自我更新和多向分化能力的细胞,在肝癌的发生发展中起着决定性作用。研究显示,力学载荷(基质刚度和压应力等)有利于维持肝癌干细胞的干性,然而其机制仍不完全清楚。Ybox结合蛋...目的肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)是一群具有自我更新和多向分化能力的细胞,在肝癌的发生发展中起着决定性作用。研究显示,力学载荷(基质刚度和压应力等)有利于维持肝癌干细胞的干性,然而其机制仍不完全清楚。Ybox结合蛋白1(YBX1)作为一种DNA/RNA结合蛋白,参与乳腺癌和黑色素瘤等多种类型癌症干细胞干性的调节,但有关其是否介导力学因素调控肝癌干细胞的干性尚不清楚。因此,本文旨在探讨癌细胞快速增殖导致的拥挤应力对肝癌干细胞干性的影响,明确YBX1在此过程中的作用及其调控机制。方法对肝癌细胞进行拥挤应力加载培养,并检测其干性特征的变化。同时,采用生物信息学分析、双荧光素酶报告基因、干细胞成球和小鼠移植瘤实验等检测拥挤应力对肝癌干细胞干性和致瘤性的影响及分子机制。结果拥挤应力通过诱导YBX1基因和蛋白的表达,显著促进了肝癌干细胞干性基因的表达水平,并增强了其克隆球形成能力和致瘤性。同时,拥挤应力可通过激活YAP1途径调控YBX1的基因转录,促进肝癌的干性。结论本研究揭示了拥挤应力调控肝癌干性的力学生物学机制,并为临床治疗提供了潜在靶点。展开更多
文摘我国是家猪养殖和消费大国,提高母猪的繁殖力对于促进我国生猪产业的发展具有重要的作用。排卵率和产仔数是影响家畜繁殖力的关键因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鉴定是控制绵羊排卵数和多胎性状的一个主效基因,然而目前在家猪BMP15基因中尚未发现类似绵羊多胎品系的天然突变。基于高等哺乳动物基因功能的保守性和CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)等基因组编辑技术对动物基因组定点修饰的高效性,应用CRISPR/Cas9技术对家猪BMP15基因进行精确的遗传修饰,使家猪获得类似多胎绵羊的天然突变,对于研究该基因对家猪繁殖力的影响以及培育高繁殖力家猪新品系具有重要的意义。本研究通过CRISPR/Cas9对长白猪胎儿成纤维(porcine embryonic fibroblasts,PEF)细胞中BMP15基因进行打靶,T7E1分析显示打靶效率仅有5%。随后通过共转染RGS双荧光替代性报告载体(RFP-GFP surrogate reporter),并应用流式细胞术分选出双荧光细胞,富集到基因组被CRISPR/Cas9修饰的细胞,使基因打靶效率提高至18%。本研究结果表明,应用RGS双荧光替代性报告载体可以有效提高CRISPR/Cas9在PEF细胞中对BMP15基因的打靶效率,为今后通过体细胞核移植技术培育BMP15基因编辑猪进行了有效的探索。
文摘目的肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)是一群具有自我更新和多向分化能力的细胞,在肝癌的发生发展中起着决定性作用。研究显示,力学载荷(基质刚度和压应力等)有利于维持肝癌干细胞的干性,然而其机制仍不完全清楚。Ybox结合蛋白1(YBX1)作为一种DNA/RNA结合蛋白,参与乳腺癌和黑色素瘤等多种类型癌症干细胞干性的调节,但有关其是否介导力学因素调控肝癌干细胞的干性尚不清楚。因此,本文旨在探讨癌细胞快速增殖导致的拥挤应力对肝癌干细胞干性的影响,明确YBX1在此过程中的作用及其调控机制。方法对肝癌细胞进行拥挤应力加载培养,并检测其干性特征的变化。同时,采用生物信息学分析、双荧光素酶报告基因、干细胞成球和小鼠移植瘤实验等检测拥挤应力对肝癌干细胞干性和致瘤性的影响及分子机制。结果拥挤应力通过诱导YBX1基因和蛋白的表达,显著促进了肝癌干细胞干性基因的表达水平,并增强了其克隆球形成能力和致瘤性。同时,拥挤应力可通过激活YAP1途径调控YBX1的基因转录,促进肝癌的干性。结论本研究揭示了拥挤应力调控肝癌干性的力学生物学机制,并为临床治疗提供了潜在靶点。
