目的整合素αvβ6与阴道黏膜感染防御的研究较少。探讨细胞因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、干扰素γ(interferon-γ,INF-γ)对阴道上皮细胞株中整合素αvβ6表达的影响...目的整合素αvβ6与阴道黏膜感染防御的研究较少。探讨细胞因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、干扰素γ(interferon-γ,INF-γ)对阴道上皮细胞株中整合素αvβ6表达的影响。方法体外培养永生化人阴道上皮细胞(VK2/E6E7),分别应用梯度浓度的IL-6(1、10、50、100 ng/m L)、TGF-β(0.1、1、10、100 ng/m L)、IFN-γ(50、500、2500、5000 U/L)干预,分别记为IL-6处理组、TGF-β处理组、INF-γ处理组。另设空白对照组(等量不含细胞因子的培养液)。培养48 h后收集细胞,TRIzol法提取总RNA,逆转录为c DNA。应用实时定量PCR技术检测各组细胞内整合素α和β6亚基的mRNA表达情况。结果 11、10 ng/m L IL-6处理组中α、β6亚基mRNA表达量低于空白对照组(P<0.05),50 ng/m L IL-6处理组β6亚基mRNA表达量高于空白对照组(P<0.05),100 ng/m L IL-6处理组α、β6亚基高于空白对照组(1.14±0.12 vs 1.00±0.06,1.37±0.25 vs 1.00±0.09,P<0.05),并且αvβ6 mRNA表达量随IL-6作用浓度的增高呈上升趋势。20.1、1 ng/m L TGF-β处理组α、β6亚基mRNA表达量显著低于空白对照组(P<0.01),10 ng/m L TGF-β处理组β6亚基mRNA表达量显著高于空白对照组(4.31±0.78 vs 1.00±0.09,P<0.01),100 ng/m L TGF-β处理组α、β6亚基的表达量均高于空白对照组(P<0.05),并且αvβ6 mRNA表达量也随TGF-β作用浓度的增高而呈上升趋势。350、500、2500、5000 U/L IFN-γ处理组整合素αvβ6 mRNA的表达均显著低于空白对照组(P<0.01)。结论阴道上皮细胞中整合素αvβ6的表达受细胞因子IL-6、TGF-β、IFN-γ的调控,可能是其参与Th1、Th2介导的黏膜免疫反应。展开更多
目的构建含人/鼠嵌合粘附分子CD44拼接变异体6(chimeric human and mouse CD44 splice variant 6,h/mCD44v6)基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,并进行表达。方法通过PCR扩增h/mCD44v6的全基因cDNA,将扩增的cDNA克隆至PGM-Teasy,...目的构建含人/鼠嵌合粘附分子CD44拼接变异体6(chimeric human and mouse CD44 splice variant 6,h/mCD44v6)基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,并进行表达。方法通过PCR扩增h/mCD44v6的全基因cDNA,将扩增的cDNA克隆至PGM-Teasy,测序后插入pcD-NA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcD-NA3.1(+)-h/mCD44v6,经限制内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染B16细胞,通过RT-PCR扩增出B16/pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6细胞株中h/mCD44v6全段基因cDNA。结果经4轮PCR,成功扩增出h/mCD44v6的cD-NA全长基因,成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,通过RT-PCR方法证实该质粒能在B16真核细胞中正确表达;建立了稳定的细胞株B16/pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6。结论成功克隆和构建了h/mCD44v6的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,为进一步研究h/mCD44v6的新功能和免疫治疗奠定了基础。展开更多
文摘目的整合素αvβ6与阴道黏膜感染防御的研究较少。探讨细胞因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、干扰素γ(interferon-γ,INF-γ)对阴道上皮细胞株中整合素αvβ6表达的影响。方法体外培养永生化人阴道上皮细胞(VK2/E6E7),分别应用梯度浓度的IL-6(1、10、50、100 ng/m L)、TGF-β(0.1、1、10、100 ng/m L)、IFN-γ(50、500、2500、5000 U/L)干预,分别记为IL-6处理组、TGF-β处理组、INF-γ处理组。另设空白对照组(等量不含细胞因子的培养液)。培养48 h后收集细胞,TRIzol法提取总RNA,逆转录为c DNA。应用实时定量PCR技术检测各组细胞内整合素α和β6亚基的mRNA表达情况。结果 11、10 ng/m L IL-6处理组中α、β6亚基mRNA表达量低于空白对照组(P<0.05),50 ng/m L IL-6处理组β6亚基mRNA表达量高于空白对照组(P<0.05),100 ng/m L IL-6处理组α、β6亚基高于空白对照组(1.14±0.12 vs 1.00±0.06,1.37±0.25 vs 1.00±0.09,P<0.05),并且αvβ6 mRNA表达量随IL-6作用浓度的增高呈上升趋势。20.1、1 ng/m L TGF-β处理组α、β6亚基mRNA表达量显著低于空白对照组(P<0.01),10 ng/m L TGF-β处理组β6亚基mRNA表达量显著高于空白对照组(4.31±0.78 vs 1.00±0.09,P<0.01),100 ng/m L TGF-β处理组α、β6亚基的表达量均高于空白对照组(P<0.05),并且αvβ6 mRNA表达量也随TGF-β作用浓度的增高而呈上升趋势。350、500、2500、5000 U/L IFN-γ处理组整合素αvβ6 mRNA的表达均显著低于空白对照组(P<0.01)。结论阴道上皮细胞中整合素αvβ6的表达受细胞因子IL-6、TGF-β、IFN-γ的调控,可能是其参与Th1、Th2介导的黏膜免疫反应。
文摘目的构建含人/鼠嵌合粘附分子CD44拼接变异体6(chimeric human and mouse CD44 splice variant 6,h/mCD44v6)基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,并进行表达。方法通过PCR扩增h/mCD44v6的全基因cDNA,将扩增的cDNA克隆至PGM-Teasy,测序后插入pcD-NA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcD-NA3.1(+)-h/mCD44v6,经限制内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染B16细胞,通过RT-PCR扩增出B16/pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6细胞株中h/mCD44v6全段基因cDNA。结果经4轮PCR,成功扩增出h/mCD44v6的cD-NA全长基因,成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,通过RT-PCR方法证实该质粒能在B16真核细胞中正确表达;建立了稳定的细胞株B16/pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6。结论成功克隆和构建了h/mCD44v6的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-h/mCD44v6,为进一步研究h/mCD44v6的新功能和免疫治疗奠定了基础。
