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鸭RIG-Ⅰ蛋白C端helicase结构域和RD结构域的原核表达及其单克隆抗体的制备
1
作者
臧凤霞
张雅春
+5 位作者
王伟
赵颖慧
李越
周长良
陈洪岩
孟庆文
《中国家禽》
北大核心
2014年第20期17-21,共5页
利用PCR技术将鸭维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到p ET30a原核表达载体,构建了重组原核表达质粒p ET30a-c和p ET30a-d,通过转化BL21(DE3)感受态菌、IPTG诱导、镍柱纯化表...
利用PCR技术将鸭维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到p ET30a原核表达载体,构建了重组原核表达质粒p ET30a-c和p ET30a-d,通过转化BL21(DE3)感受态菌、IPTG诱导、镍柱纯化表达蛋白,将纯化的c、d蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体(m Ab),采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验对单克隆抗体进行鉴定分析。获得鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体有14株与原核分段表达的c、d蛋白有良好的反应性,其中3株与真核表达的RIG-Ⅰ蛋白有良好的反应性。制备的鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体为RIG-Ⅰ在抗病毒天然免疫信号转导途径的研究奠定了基础。
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关键词
鸭RIG-Ⅰ
helicase
结构域
rd结构域
原核表达
单克隆抗体
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职称材料
题名
鸭RIG-Ⅰ蛋白C端helicase结构域和RD结构域的原核表达及其单克隆抗体的制备
1
作者
臧凤霞
张雅春
王伟
赵颖慧
李越
周长良
陈洪岩
孟庆文
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
出处
《中国家禽》
北大核心
2014年第20期17-21,共5页
基金
地方科技攻关计划课题(PC13S16)
"十二五"农村领域国家科技计划课题(2011AA100305-2)
中央级公益性科研院所基本科研业务费(1610302014022)
文摘
利用PCR技术将鸭维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到p ET30a原核表达载体,构建了重组原核表达质粒p ET30a-c和p ET30a-d,通过转化BL21(DE3)感受态菌、IPTG诱导、镍柱纯化表达蛋白,将纯化的c、d蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体(m Ab),采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验对单克隆抗体进行鉴定分析。获得鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体有14株与原核分段表达的c、d蛋白有良好的反应性,其中3株与真核表达的RIG-Ⅰ蛋白有良好的反应性。制备的鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体为RIG-Ⅰ在抗病毒天然免疫信号转导途径的研究奠定了基础。
关键词
鸭RIG-Ⅰ
helicase
结构域
rd结构域
原核表达
单克隆抗体
Keywords
duck RIG- blot and indirect immunofluorescence. The results showed that there were 14 hybridoma cell lines secreting mAb against c and d segment by prokaryotic expression,and 3 of 14 hybridoma cell lines secreting mAb against eukaryotic expressed RIG- Ⅰ were produced. As a conclusion,the preparation of monoclonal antibody against duck RIG- Ⅰ laid a foundation for studying antiviral innate immune signal transduetion pathways.
helicase domain
rd
domain
prokaryotic expression
monoclonal antibody
分类号
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸭RIG-Ⅰ蛋白C端helicase结构域和RD结构域的原核表达及其单克隆抗体的制备
臧凤霞
张雅春
王伟
赵颖慧
李越
周长良
陈洪岩
孟庆文
《中国家禽》
北大核心
2014
0
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