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RACE技术在钓取白血病相关基因LRP16全长cDNA中的应用 被引量：26
1
作者 韩为东 于力 +4 位作者 楼方定 王全顺 赵瑜 史子江 靳海杰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2001年第1期18-21,共4页
LRP16是我们应用甲基化敏感的限制性界标基因组扫描 (restrictionlandmarkgenomicscanning ,RLGS)技术时发现的一个与白血病复发相关的新基因。为钓取这一新基因的全长cDNA ,本实验采用了cDNA末端快速扩增法 (rapidamplificationofcDNAe... LRP16是我们应用甲基化敏感的限制性界标基因组扫描 (restrictionlandmarkgenomicscanning ,RLGS)技术时发现的一个与白血病复发相关的新基因。为钓取这一新基因的全长cDNA ,本实验采用了cDNA末端快速扩增法 (rapidamplificationofcDNAend ,RACE)。通过对RACE法若干步骤进行优化 ,克隆得到了LRP16基因cDNA的 5′ 与 3′ 非翻译区 ,进而获得其全长及完整的开放阅读框架 ,并作为新基因被GenBank收录。上述结果表明 ,RACE技术是钓取未知基因全长cDNA敏感而快速的方法 ,尤其是对 5′ 及 3′ 展开更多
关键词 白血病相关基因 LRP16基因 CDNA race技术
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青花菜BrERF2基因的RACE克隆与模拟酸雨胁迫下的表达分析 被引量：6
2
作者 高世超 钟凤林 +4 位作者 林义章 赵瑞丽 林俊芳 杨碧云 胡海非 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2093-2102,共10页
为探讨青花菜在模拟酸雨胁迫下ERF基因的表达变化,应用RACE克隆技术,克隆获得青花菜的ERF因的1条c DNA全长序列,命名为Br ERF2。应用生物信息学方法,对该基因编码蛋白的氨基酸组成、理化性质、跨膜结构域、信号肽导肽、疏水性/亲水性、... 为探讨青花菜在模拟酸雨胁迫下ERF基因的表达变化,应用RACE克隆技术,克隆获得青花菜的ERF因的1条c DNA全长序列,命名为Br ERF2。应用生物信息学方法,对该基因编码蛋白的氨基酸组成、理化性质、跨膜结构域、信号肽导肽、疏水性/亲水性、二级结构、亚细胞定位、保守结构域等方面进行了预测和分析。结果表明:获得c DNA全长为958 bp,开放阅读框为804 bp,编码267个氨基酸,Real-time PCR结果分析表明模拟酸雨胁迫下Br ERF2基因的表达量发生变化,模拟酸雨胁迫初期表达量显著增大,随时间延长,又开始下降,表明其可能参与了青花菜抗酸雨胁迫的应答机制。本研究为青花菜的抗酸雨胁迫研究奠定了基础。 展开更多
关键词 青花菜 ERF race克隆 生物信息学 表达
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利用RACE技术扩增大豆抗病基因同源cDNA 5′末端序列 被引量：4
3
作者 王邦俊 王强 +2 位作者 张志刚 张劲松 李学刚 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期425-427,共3页
利用抗病基因保守序列筛选大豆cDNA文库,获得一抗病基因同源cDNA片段,命名为KR3-1。根据KR3-1设计两个基因特异引物(GSP和NGSP),分别与通用引物(UPM)和巢式通用引物(NUP)共同扩增,成功地克隆到了该基因的5’末端序列。该扩增片段长447bp... 利用抗病基因保守序列筛选大豆cDNA文库,获得一抗病基因同源cDNA片段,命名为KR3-1。根据KR3-1设计两个基因特异引物(GSP和NGSP),分别与通用引物(UPM)和巢式通用引物(NUP)共同扩增,成功地克隆到了该基因的5’末端序列。该扩增片段长447bp,与已知序列重叠部分为129bp。 展开更多
关键词 race技术 扩增 大豆 抗病基因 末端序列
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用RACE结合cDNA文库筛选的方法获取新的锌指蛋白基因 被引量：8
4
作者 杜占文 刘立仁 张俊武 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期329-331,共3页
大多数有重要功能的蛋白质都含相应的由保守氨基酸顺序组成的功能结构域。本文首先根据蛋白质功能结构域保守氨基酸序列设计简并引物 ,用PCR方法扩增出基因EST序列 ,再利用改进的快速扩增cDNA末端(RACE)方法从cDNA文库中扩增出基因非同... 大多数有重要功能的蛋白质都含相应的由保守氨基酸顺序组成的功能结构域。本文首先根据蛋白质功能结构域保守氨基酸序列设计简并引物 ,用PCR方法扩增出基因EST序列 ,再利用改进的快速扩增cDNA末端(RACE)方法从cDNA文库中扩增出基因非同源部位 ,然后以非同源序列为探针 ,筛选cDNA文库。利用此方法成功地从人骨髓cDNA文库中克隆到几个编码锌指蛋白并代表原有EST的新的全长cDNA。这一策略也应适用于筛选编码具有其他序列保守性功能结构域蛋白的基因。 展开更多
关键词 race CDNA文库 筛选 锌指蛋白基因 非同源DNA序列 新基因
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利用RACE方法克隆小麦β-1，3-葡聚糖酶基因的全长cDNA 被引量：5
5
作者 崔素萍 刘博 +1 位作者 黄丽丽 康振生 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第7期79-84,共6页
【目的】研究小麦抗条锈菌的分子机制,在受条锈菌侵染的非亲和组合小麦叶片中克隆一个新的β-1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA。【方法】采用RT-PCR、cDNA末端快速扩增技术(RACE),在感染小麦条锈菌的小麦(水源11)叶片中进行-β1,3-葡聚糖酶基... 【目的】研究小麦抗条锈菌的分子机制,在受条锈菌侵染的非亲和组合小麦叶片中克隆一个新的β-1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA。【方法】采用RT-PCR、cDNA末端快速扩增技术(RACE),在感染小麦条锈菌的小麦(水源11)叶片中进行-β1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA的扩增。【结果】得到了一个1338 bp-β1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA,Genbank上注册号为DQ090946,测序结果和序列生物信息学分析结果表明,其与-β1,3-葡聚糖酶基因gi3757681和gi6782375的同源性分别为94.3%和92.1%。该全长cDNA具有完整的编码框,编码334个氨基酸,Genbank上注册号为AAY96422,与-β1,3-葡聚糖酶CAA77085和AAA32958的同源性分别为95.8%和86.7%。【结论】初步推断此全长cDNA是小麦中编码-β1,3-葡聚糖酶的一个新基因。 展开更多
关键词 小麦 条锈菌 Β-1 3-葡聚糖酶基因 分子克隆 全长CDNA race
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甜菜夜蛾泛素延伸蛋白基因cDNA的3′RACE-PCR扩增及其克隆和表达 被引量：6
6
作者 牛国栋 张海元 张忠信 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期166-170,共5页
根据已知的草地夜蛾Spodopterafrugiperda的泛素延伸基因 5′端核苷酸序列设计引物 ,应用 3′RACE PCR技术 ,从甜菜夜蛾S .exigua脂肪体组织总RNA中反转录扩增泛素基因的cDNA片段。扩增得到的片段全长 5 13bp ,3′末端有 12 3bp的非翻译... 根据已知的草地夜蛾Spodopterafrugiperda的泛素延伸基因 5′端核苷酸序列设计引物 ,应用 3′RACE PCR技术 ,从甜菜夜蛾S .exigua脂肪体组织总RNA中反转录扩增泛素基因的cDNA片段。扩增得到的片段全长 5 13bp ,3′末端有 12 3bp的非翻译区 ,翻译区编码一个长为 12 9个氨基酸残基的蛋白质 ,预测分子量为 14 8kD。同源分析表明 ,此cDNA序列为ubiquitin 5 3aaextensionprotein(ubi 5 3)基因 ,在泛素蛋白后融合了一个核糖体L4 0蛋白 (ribosomalL4 0protein)。用MagAlign和Genedoc软件对cDNA编码的氨基酸序列进行了同源性分析 ,结果表明 :甜菜夜蛾的ubi 5 3基因与真核生物家蚕Bombyxmori、草地夜蛾、果蝇Drosophilamelanogaster和人Homosapienes泛素的同源性分别为 96 9%、98 5 %、95 3%和 93 0 % ,与甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)泛素的同源性为 78 8% ,说明真核生物的泛素基因与核型多角体病毒的泛素基因可能存在不同的分子进化途径。将甜菜夜蛾的ubi 5 3基因克隆到原核表达载体pET 2 8a上 ,转化至BL2 1(DE3)中 ,用IPTG进行诱导表达 ,用异源泛素单克隆抗体进行Westernblot检测 。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾 3′race—PCR 泛素延伸基因 分子进化 原核表达
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RACE法克隆亚麻COMT基因及生物信息学分析 被引量：3
7
作者 龙松华 乔瑞清 +5 位作者 陈信波 邱财生 邓欣 郭媛 郝冬梅 王玉富 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期78-83,共6页
利用RACE技术克隆得到亚麻木质素合成关键酶基因COMT基因的cDNA全长序列,该基因cDNA全长1 726 bp(GenBank登录号为KC832865)。含有1 104 bp完整的开放阅读框,5'非编码区长423 bp,3'非编码区长199 bp。对序列进行生物信息学分析... 利用RACE技术克隆得到亚麻木质素合成关键酶基因COMT基因的cDNA全长序列,该基因cDNA全长1 726 bp(GenBank登录号为KC832865)。含有1 104 bp完整的开放阅读框,5'非编码区长423 bp,3'非编码区长199 bp。对序列进行生物信息学分析的结果 :编码的蛋白由367个氨基酸组成(其中亮氨酸38个,丙氨酸32个和丝氨酸28个),相对分子量为40 kD,等电点pI为5.7;蛋白质二级结构以无规则卷曲和α-螺旋为主;构建系统进化树表明与赤桉(Eucalyptus camaldulensis)亲缘关系最近。 展开更多
关键词 亚麻 木质素 COMT基因 race 生物信息学分析
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大豆灰斑病菌Race15的全基因组测序分析 被引量：3
8
作者 顾鑫 杨晓贺 +5 位作者 姚亮亮 高雪冬 张茂明 刘伟 赵海红 丁俊杰 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期466-475,共10页
大豆灰斑病菌新小种Race 15具有强致病力和明显的生理分化现象,可导致传统抗病大豆品种的抗性丧失。为在基因组水平解析其致病机理,本研究对Race 15菌株进行全基因组测序和基因功能注释,并分析其毒力相关基因的代谢途径。结果表明:大豆... 大豆灰斑病菌新小种Race 15具有强致病力和明显的生理分化现象,可导致传统抗病大豆品种的抗性丧失。为在基因组水平解析其致病机理,本研究对Race 15菌株进行全基因组测序和基因功能注释,并分析其毒力相关基因的代谢途径。结果表明:大豆灰斑病菌Race 15的全基因组de novo测序共产生601 794个PacBio读数,得到6 038 283 778 bp数据,经过组装得到12个contigs, N50长度为4.9 Mb,组装后得到的总序列长度为40.12 Mb。共预测到12 607个编码基因,基因密度约314个·Mb^(-1),预测得到了200个tRNA,2个sRNA和13个snRNA。共有680个基因在病原与宿主互作数据库中注释,340个基因在碳水化合物酶数据库中注释,777个基因预测为次生代谢物相关基因,此外还有766个基因预测为分泌蛋白。这些与毒力相关的致病基因主要涉及细胞壁分解酶、真菌的形态构成、毒素和色素生物合成等。 展开更多
关键词 大豆灰斑病 race 15 全基因组测序 基因功能注释 毒力相关基因
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RACE技术及其在植物基因研究中的应用 被引量：5
9
作者 郑阳霞 李焕秀 严泽生 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第7期2674-2676,共3页
综述了RACE的技术原理、局限性、方法改良和新型的RACE技术,并且讨论了RACE技术在植物基因研究中的技术优势、应用现状和发展前景。
关键词 race 植物 基因研究 应用
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Race法扩增4株鸭肝炎病毒3′末端序列及其克隆分析 被引量：2
10
作者 邵泽香 韦强 +3 位作者 崔言顺 鲍国连 刘燕 季权安 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期225-229,共5页
利用3’RACE方法扩增并克隆了4株鸭肝炎病毒（DHV）（ZYM株、Z05株、Z07株和Z10株）的基因组的3’末端真实序列，包括部分非结构蛋白（3D）基因以及紧接着3D基因下游的3’端非编码区（untranslated region，UTR）和poly（A）尾巴。测序... 利用3’RACE方法扩增并克隆了4株鸭肝炎病毒（DHV）（ZYM株、Z05株、Z07株和Z10株）的基因组的3’末端真实序列，包括部分非结构蛋白（3D）基因以及紧接着3D基因下游的3’端非编码区（untranslated region，UTR）和poly（A）尾巴。测序结果表明，扩增的特异性片段长度为597nt（不包括polyA尾巴）。各毒株3’UTR均为315nt，位于终止密码子TGA之后，比对分析结果表明各毒株间的同源性较高；4株DHV 3’末端核苷酸序列（不包括polyA尾巴）之间的同源性为96．3％～100％，而与参考毒株之间的同源性为93．5％～99．7％。在系统发生进化树上，各毒株亲缘关系较近。 展开更多
关键词 3’race 鸭病毒性肝炎病毒 序列比对分析 3’端非编码区 POLY(A)
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RACE策略克隆抗人CD16单克隆抗体轻链可变区基因 被引量：4
11
作者 解志刚 郭宁 +4 位作者 冯健男 施明 孙瑛勋 于鸣 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期82-83,共2页
鼠源性单克隆抗体(mAb)应用于人体治疗首先需对其进行基因工程化改造.目前, 常用的克隆mAb可变区基因的方法, 是利用抗体可变区内骨架区(FR)序列的保守性, 设计一组通用引物, 采用RT-PCR法扩增可变区基因[1,2].但由于引物的简并性, 克... 鼠源性单克隆抗体(mAb)应用于人体治疗首先需对其进行基因工程化改造.目前, 常用的克隆mAb可变区基因的方法, 是利用抗体可变区内骨架区(FR)序列的保守性, 设计一组通用引物, 采用RT-PCR法扩增可变区基因[1,2].但由于引物的简并性, 克隆过程中将不可避免地改变抗体可变区两侧(FR1、FR4)的氨基酸序列, 这些改变可能导致基因工程抗体亲和力降低[3].我们对传统方法进行了改进, 采用5′-RACE(rapid amplification of cDNA end, RACE)克隆的策略, 获得了抗人CD16 mAb轻链可变区(VL)基因的真实序列. 展开更多
关键词 race策略 抗人CD16单克隆抗体 基因克隆 基因序列
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用RLM-RACE法克隆抗CD20单克隆抗体可变区基因及其信号肽基因 被引量：3
12
作者 王玉刚 冯健男 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期466-469,共4页
目的:寻找一种可同时钓取抗CD20mAbVL、VH基因及其信号肽基因的方法。方法:使用Trizol提取杂交瘤细胞1-28的总RNA,分别采用传统的快速扩增5′cDNA末端(traditionalrapidamplificationof5′cDNAend,T5′RACE)和RNA连接酶介导的快速扩增5... 目的:寻找一种可同时钓取抗CD20mAbVL、VH基因及其信号肽基因的方法。方法:使用Trizol提取杂交瘤细胞1-28的总RNA,分别采用传统的快速扩增5′cDNA末端(traditionalrapidamplificationof5′cDNAend,T5′RACE)和RNA连接酶介导的快速扩增5′cDNA末端(RNAligasemediatedrapidamplificationof5′cDNAend,RLMRACE)的方法钓取目的基因。将其克隆到pGEMTEasy载体上,测序后,与Kabat数据库和GenBank中相应的序列进行比对。结果:采用RLMRACE法可同时钓取到抗CD20mAbVL、VH基因及其信号肽基因,而用T5′RACE法仅能获得VL基因及其信号肽基因。结论:RLMRACE法是钓取抗体V区基因和信号肽基因的好方法。 展开更多
关键词 race Ⅴ区基因 信号肽基因 单克隆抗体
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尼罗罗非鱼性别相关基因Dmrt1的RACE扩增和序列分析 被引量：3
13
作者 杨东 刘红艳 +1 位作者 张繁荣 余来宁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第15期6194-6195,6222,共3页
[目的]为研究Dmrt基因的进化、尼罗罗非鱼性别决定机制和功能提供资料。[方法]以尼罗罗非鱼精巢cDNA为模板,采用简并PCR扩增和克隆其Dmrt保守区域,并采用3′RACE反应获得Dmrt1基因全序列。[结果]尼罗罗非鱼中Dmrt保守区域长度为158 bp... [目的]为研究Dmrt基因的进化、尼罗罗非鱼性别决定机制和功能提供资料。[方法]以尼罗罗非鱼精巢cDNA为模板,采用简并PCR扩增和克隆其Dmrt保守区域,并采用3′RACE反应获得Dmrt1基因全序列。[结果]尼罗罗非鱼中Dmrt保守区域长度为158 bp。尼罗罗非鱼Dmrt1基因的DM-domain与奥利亚罗非鱼、虹鳟、青鱼将、新月鱼、人、小鼠中Dmrt1基因的DM-domain和尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼中DMO基因的DM-domain的核苷酸同源性分别为98.6%、87.9%、81.4%、82.1%、77.9%、77.1%、72.1%、72.1%,氨基酸同源性为100.0%9、7.8%、87.0%、87.0%、89.1%、89.1%、84.8%和84.8%。通过3′RACE反应,获得1 108 bpDmrt1的3′端序列。尼罗罗非鱼Dmrt1与奥利亚罗非鱼、虹鳟、青鱼将、新月鱼的氨基酸序列同源性分别为99.0%、62.0%、41.0%和73.0%。[结论]Dmrt1基因具有高度保守性。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 DMRT1 race
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利用Y-RACE法进行棉花胚珠cDNA末端快速扩增 被引量：4
14
作者 肖月华 罗明 +4 位作者 方卫国 罗克明 侯磊 罗小英 裴炎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期688-692,共5页
在YADE(Y shapedadaptordependentextension)方法的基础上 ,设计了一种新的cDNA末端快速扩增方法 ,称为Y RACE法 .利用该方法只需一次cDNA合成就能进行多个基因的 3′和 5′末端的扩增 .分别利用Y RACE方法和RACE试剂盒 (TaKaRa)扩增了... 在YADE(Y shapedadaptordependentextension)方法的基础上 ,设计了一种新的cDNA末端快速扩增方法 ,称为Y RACE法 .利用该方法只需一次cDNA合成就能进行多个基因的 3′和 5′末端的扩增 .分别利用Y RACE方法和RACE试剂盒 (TaKaRa)扩增了一个棉花胚珠cDNA片段F0 2 7的末端序列 .序列比较表明 ,用Y RACE方法扩增的末端序列较试剂盒所得序列在最末端稍短 ,但同样能进行正确拼接并获得全长编码序列 .对Y RACE法的优缺点和可能的改进作了进一步讨论 . 展开更多
关键词 Y-race法 棉花 胚珠 CDNA末端 快速扩增
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一步3′RACE快速构建鸡MnSOD全长cDNA克隆 被引量：1
15
作者 卜友泉 罗绪刚 +1 位作者 刘彬 李素芬 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期519-521,共3页
将触减PCR与3′cDNA末端快速扩增(rapidamplificationofcDNAends,RACE)技术进行结合,仅用一条特异性引物和一条通用引物,成功地实现了从3′末端cDNA库对鸡含锰超氧化物歧化酶(manganese-containingsu peroxidedismutase,MnSOD)全长cDNA... 将触减PCR与3′cDNA末端快速扩增(rapidamplificationofcDNAends,RACE)技术进行结合,仅用一条特异性引物和一条通用引物,成功地实现了从3′末端cDNA库对鸡含锰超氧化物歧化酶(manganese-containingsu peroxidedismutase,MnSOD)全长cDNA的一步3′RACE快速构建。与常规使用的末端PCR或亚克隆方法相比,该法具有快速、省时、经济和特异性好的优点。 展开更多
关键词 race 触减PCR MNSOD CDNA
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新疆盐生植物猪毛菜逆向运输蛋白基因SaNHX1 3’-RACE的克隆及序列分析 被引量：3
16
作者 张雨良 罗淑萍 +3 位作者 杨峰山 魏岩 袁辉 郭长奎 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2008年第3期511-516,共6页
以新疆盐生植物猪毛菜(Salsola collina Pall.)为材料提取总RNA,根据NHX1家族同源序列保守区设计1对简并引物,进行RT-PCR扩增,得到猪毛菜逆向运输蛋白基因cDNA中间一段619 bp序列。再用快速扩增cDNA 3’末端(3’RACE)方法,得到约1 000 b... 以新疆盐生植物猪毛菜(Salsola collina Pall.)为材料提取总RNA,根据NHX1家族同源序列保守区设计1对简并引物,进行RT-PCR扩增,得到猪毛菜逆向运输蛋白基因cDNA中间一段619 bp序列。再用快速扩增cDNA 3’末端(3’RACE)方法,得到约1 000 bp 3’末端序列。将两段序列进行拼接,得到猪毛菜长为1 585bp(Gen Bank登陆号为EU072932)的逆向运输蛋白基因(SaNHX1)cDNA序列,编码370个氨基酸,其编码序列、氨基酸序列与同科耐盐植物盐角草相应序列同源性为85%和87%,研究为进一步克隆猪毛菜NHX1全基因序列和研究其功能打下基础。 展开更多
关键词 猪毛菜 逆向运输蛋白 SaNHX1基因 3’-race 克隆
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运用3′RACE验证LongSAGE文库构建后白念珠菌不同菌相的差异表达基因 被引量：1
17
作者 张宝军 叶庆佾 +3 位作者 何凤田 王鲁 周村建 郝飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1009-1011,共3页
目的　鉴定从LongSAGE文库筛选到的白念珠菌不同菌相表达基因差异表达标签JMD8和JSW10所代表基因。方法　诱导白念珠菌菌丝相的表达后,运用3′RACE技术扩增白念珠菌差异表达基因标签基因片段,纯化回收后,T/A连接,经氯化钙法转化大肠杆菌... 目的　鉴定从LongSAGE文库筛选到的白念珠菌不同菌相表达基因差异表达标签JMD8和JSW10所代表基因。方法　诱导白念珠菌菌丝相的表达后,运用3′RACE技术扩增白念珠菌差异表达基因标签基因片段,纯化回收后,T/A连接,经氯化钙法转化大肠杆菌,X gal/IPTG诱导表达,在阳性菌株中抽提质粒后酶切、测序。结果　两个片段均能在GenBank中找到同源序列,Score值小于40 ,Evalue小于0 5。结论　鉴定了白念珠菌LongSAGE标签JMD8和JSW 10代表的基因分别为EFT2和SHMII。 展开更多
关键词 白念珠菌 LongSAGE 3’race 菌相转换
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褐飞虱Nilaparvata lugens(S"非汉字符号"l)肌动蛋白基因3′-RACE及基因表达的RT-PCR检测 被引量：3
18
作者 刘美德 洪晓月 +1 位作者 杜建光 程遐年 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期49-51,共3页
通过锚定的 3′ RACE筛选实验 ,确定锚定效率最好的下游引物 ,用于褐飞虱各发育期肌动蛋白基因表达的RT PCR检测。结果表明 :3个锚定引物中 ,0 4 2 2 7( 5′ >TCACACAGGAAACAGCTATGACTTTTTTTTTTTTTTA <3′)的锚定效率最好 ,可以... 通过锚定的 3′ RACE筛选实验 ,确定锚定效率最好的下游引物 ,用于褐飞虱各发育期肌动蛋白基因表达的RT PCR检测。结果表明 :3个锚定引物中 ,0 4 2 2 7( 5′ >TCACACAGGAAACAGCTATGACTTTTTTTTTTTTTTA <3′)的锚定效率最好 ,可以扩增出 5条褐飞虱的肌动蛋白基因 3′末端片段 ,依其大小命名为BPH A、BPH B、BPH C、BPH D、BPH E。RT PCR检测表明 :BPH A从 3龄开始到成虫期都有常量表达 ;BPH B、BPH C、BPH E从 2龄开始到成虫期都有表达 ;BPH D在整个幼虫期都有表达 。 展开更多
关键词 褐飞虱 肌动蛋白基因 3′-race基因 基因表达 RT-PCR检测 翅型分化
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RACE法克隆甜菜NR基因及生物信息学分析 被引量：1
19
作者 王琦 冯二艳 +1 位作者 王荣 任嘉红 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期89-95,101,共8页
硝酸还原酶是氮素代谢的关键酶和限速酶,研究硝酸还原酶的功能对提高甜菜的产量具有重要作用。运用RACE法克隆出甜菜的硝酸还原酶基因,并利用生物信息学对甜菜NR进行主要结构分析和功能预测,并使其在拟南芥中表达,观察根对向重性应答过... 硝酸还原酶是氮素代谢的关键酶和限速酶,研究硝酸还原酶的功能对提高甜菜的产量具有重要作用。运用RACE法克隆出甜菜的硝酸还原酶基因,并利用生物信息学对甜菜NR进行主要结构分析和功能预测,并使其在拟南芥中表达,观察根对向重性应答过程中的弯曲情况。结果表明,利用RACE法克隆得到甜菜NRcDNA全长为2760bp;甜菜NR为易溶、亲水性强的蛋白;二级结构预测结果显示,甜菜NR为混合型蛋白;甜菜NR含有钼辅因子、细胞色素b5、FAD及NADH结合域,具有跨膜区域,但不含有信号肽;利用拟南芥突变体观察到野生型比突变体的弯曲较快,暗示甜菜的NR基因可能通过调节NO积累参与植物向重性应答。 展开更多
关键词 甜菜 生物信息学 硝酸还原酶 race 重力
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应用RACE法分离和克隆猪GPX2基因研究 被引量：1
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作者 赵华 周继昌 +2 位作者 李俊刚 赵莹 王康宁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第18期7586-7588,共3页
[目的]运用分子生物学技术克隆猪GPX2基因。[方法]以猪十二指肠总RNA为模板，根据人、大鼠、小鼠、牛、狗GPX2基因同源序列分析，设计兼并引物对，采用RT—PCR技术扩增获得了l段330bp的猪GPX2基因序列。根据获得的已知序列分别设计引物... [目的]运用分子生物学技术克隆猪GPX2基因。[方法]以猪十二指肠总RNA为模板，根据人、大鼠、小鼠、牛、狗GPX2基因同源序列分析，设计兼并引物对，采用RT—PCR技术扩增获得了l段330bp的猪GPX2基因序列。根据获得的已知序列分别设计引物，采用3＇-RACE和5＇-RACE技术手段分离、克隆猪GPX2基因。并对所得基因进行基因序列分析。[结果]该试验成功克隆分离了1段长924bp的mRNA序列，该序列包含完整3’-末端，与人、鼠、牛、狗GPX2基因具有较高的序列同源性，并在基因第114～116位置具有编码硒代半胱氨酸残基（Sec）的密码子TGA。[结论]序列分析比对的结果表明克隆的基因就是猪GPX2基因（NCBI GeneBank数据库序列号为DQ98982）。 展开更多
关键词 基因克隆 猪 GPX2 race RT-PCR
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