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胰岛β细胞中PP2ACα基因失活小鼠模型的建立及初步表型分析 被引量:1
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作者 孙进 李凤飞 +2 位作者 朱红红 李建民 马建华 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期416-419,共4页
目的 :建立胰岛β细胞特异性失活PPACα基因小鼠模型,对其表型进行初步观察。方法 :通过Ins2-Cre小鼠与PP2ACα^(^(flox/flox))小鼠交配,获得胰岛β细胞特异性失活PP2ACα基因小鼠(PP2ACα^(flox/fIox):Ins2-Cre)。PCR和Western blot鉴... 目的 :建立胰岛β细胞特异性失活PPACα基因小鼠模型,对其表型进行初步观察。方法 :通过Ins2-Cre小鼠与PP2ACα^(^(flox/flox))小鼠交配,获得胰岛β细胞特异性失活PP2ACα基因小鼠(PP2ACα^(flox/fIox):Ins2-Cre)。PCR和Western blot鉴定PP2ACα基因第二外显子敲除小鼠(KO)。4月龄时行腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT),以PP2ACα^(flox/flox)小鼠为对照。结果 :1PP2ACα转录本在KO小鼠短于对照小鼠;2KO小鼠胰岛中PP2AC蛋白水平较对照小鼠显著下降(P<0.05);3IPGTT结果显示:4月龄KO小鼠30、60、120 min时血糖明显高于对照小鼠(P<0.05)。结论:成功建立胰岛β细胞特异性失活PPACα基因小鼠模型,4月龄PP2ACα^(flox/fIox):Ins2-Cre小鼠糖耐量受损。 展开更多
关键词 pp2acα 小鼠模型 糖耐量
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降低蛋白磷酸酶2A催化亚基(PP2Ac)去甲基化促进巨噬细胞M1型分化 被引量:2
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作者 莫来铭 孟玲 +4 位作者 蓝利 常升搏小吉 陆彩玲 李习艺 唐深 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期595-599,共5页
目的研究蛋白磷酸酶2A催化亚基C(PP2Ac)去甲基化在巨噬细胞M1型分化中的作用。方法 THP-1细胞经佛波酯(PMA)诱导分化为M0型巨噬细胞,再用脂多糖(LPS)、γ干扰素(IFN-γ)刺激48 h分化为M1型巨噬细胞;处理组和溶剂对照组在M1型巨噬细胞模... 目的研究蛋白磷酸酶2A催化亚基C(PP2Ac)去甲基化在巨噬细胞M1型分化中的作用。方法 THP-1细胞经佛波酯(PMA)诱导分化为M0型巨噬细胞,再用脂多糖(LPS)、γ干扰素(IFN-γ)刺激48 h分化为M1型巨噬细胞;处理组和溶剂对照组在M1型巨噬细胞模型上,分别加入0. 5μmol/L ABL127和二甲基亚砜(DMSO)培养48 h。倒置显微镜观察细胞形态学变化,实时荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞分化标志物环加氧酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和C-X-C趋化因子配体10(CXCL10)的mRNA水平,中性红法检测巨噬细胞吞噬功能,Western blot法检测PP2Ac去甲基化水平。结果 M0型巨噬细胞分化为M1型巨噬细胞,细胞伸出伪足逐渐呈梭形,分化标志物COX-2、TNF-α、IL-6和CXCL10的mRNA水平明显升高,吞噬功能增强,PP2Ac去甲基化表达下降;处理组加入0. 5μmol/L ABL127,与溶剂对照组相比,PP2Ac去甲基化水平明显降低,梭形细胞增多,分化标志物COX-2、TNF-α、IL-6和CXCL10明显增高,吞噬功能增强。结论降低PP2Ac去甲基化能促进M1型巨噬细胞分化,并增强巨噬细胞促炎性细胞因子表达和吞噬功能。 展开更多
关键词 蛋白磷酸酶2A催化亚基(pp2ac) 去甲基化 M1型巨噬细胞 促炎性细胞因子 极化
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抑制PP2Acα促进胃癌进展中WTAP高表达 被引量:2
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作者 程照翔 方超 吕纯业 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1128-1134,共7页
目的:探讨蛋白磷酸酶2A催化亚基Cα(PP2Acα)的抑制是否会影响胃癌细胞的恶性表型,以及维尔姆肿瘤1相关蛋白(Wilms’tumour 1-associating protein,WTAP)在这一进展中的表达。方法:使用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数... 目的:探讨蛋白磷酸酶2A催化亚基Cα(PP2Acα)的抑制是否会影响胃癌细胞的恶性表型,以及维尔姆肿瘤1相关蛋白(Wilms’tumour 1-associating protein,WTAP)在这一进展中的表达。方法:使用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分别比较PP2Acα编码基因(PPP2CA)、WTAP基因在胃癌组织与正常胃黏膜组织中的表达量;使用KM-plot网站(http://kmplot.com/analysis/)分析PPP2CA、WTAP与胃癌预后的关系;使用慢病毒介导的短发卡RNA(short hairpin RNA,sh RNA)在胃癌细胞中敲减PPP2CA,从而抑制PP2Acα的表达;随后提取RNA、蛋白分别进行定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot),检测PPP2CA、WTAP的mRNA水平及蛋白的表达;最后在离体与活体层面观察抑制PP2Acα对于胃癌细胞恶性表型的影响。结果:抑制PP2Acα后,胃癌细胞发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)形态改变,且增殖、迁移与侵袭能力均得到了增强,并伴随着WTAP蛋白及mRNA水平的显著升高。结论:抑制PP2Acɑ促进胃癌细胞的恶性表型,可能是通过上调WTAP的表达水平实现的。 展开更多
关键词 胃癌 pp2acα ppP2CA WTAP
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茶碱类药物对哮喘小鼠肺组织AGR2和Muc5ac蛋白表达的影响 被引量:5
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作者 周敏 陈辉龙 +4 位作者 程胜 张惠兰 谢敏 熊维宁 徐永健 《医药导报》 CAS 北大核心 2013年第10期1263-1266,共4页
目的观察氨茶碱、多索茶碱对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织中AGR2蛋白和Muc5ac蛋白表达的影响,探讨茶碱类药物在哮喘气道黏液过度分泌中的作用。方法 32只雌性小鼠随机分为哮喘组、正常对照组、氨茶碱组和多索茶碱组,每组8只。免疫组... 目的观察氨茶碱、多索茶碱对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织中AGR2蛋白和Muc5ac蛋白表达的影响,探讨茶碱类药物在哮喘气道黏液过度分泌中的作用。方法 32只雌性小鼠随机分为哮喘组、正常对照组、氨茶碱组和多索茶碱组,每组8只。免疫组织化学法分别检测4组小鼠肺组织AGR2和Muc5ac蛋白的表达。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测其中白细胞介素(IL)-13的水平。结果哮喘小鼠肺组织中AGR2蛋白(0.544±0.039)和Muc5ac蛋白(0.556±0.045)的表达,较正常对照组(0.388±0.053,0.188±0.086)均明显升高(P<0.01)。多索茶碱组AGR2蛋白(0.491±0.029,P<0.05)和Muc5ac蛋白(0.446±0.044,P<0.01)的表达水平与哮喘组比较明显下降。结论多索茶碱可能通过下调哮喘小鼠AGR2、Muc5ac蛋白的表达,缓解哮喘气道黏液过度分泌。 展开更多
关键词 茶碱 哮喘 支气管 AGR2蛋白 Muc5ac蛋白
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Alcalase 2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究 被引量:4
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作者 朱振宝 周慧江 易建华 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期40-44,共5页
以核桃分离蛋白(WPI)为原料,利用Alcalase 2.4L酶解制备高活性的ACE抑制肽。以水解度和ACE抑制率为指标,通过单因素和二次回归正交旋转组合试验,优化了Alcalase 2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺。得到的最佳酶解工艺条件为pH 7... 以核桃分离蛋白(WPI)为原料,利用Alcalase 2.4L酶解制备高活性的ACE抑制肽。以水解度和ACE抑制率为指标,通过单因素和二次回归正交旋转组合试验,优化了Alcalase 2.4L酶解核桃分离蛋白制备ACE抑制肽的工艺。得到的最佳酶解工艺条件为pH 7.94,酶解温度60℃,底物质量浓度20 g/L,酶与底物质量比3.69∶100,酶解3 h后,酶解产物的水解度达到24.78%,ACE抑制率达到76.58%,且在此条件下获得的ACE抑制肽具有一定的抗体内消化酶特性。 展开更多
关键词 核桃分离蛋白 ALCALASE 2 4L acE抑制肽 响应面法
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菜蛾斑蝥素受体PP2A催化亚基基因的原核表达与纯化 被引量:1
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作者 郑林青 郝少东 +3 位作者 张志勇 王进忠 杨宝东 张民照 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期711-717,共7页
为获得菜蛾斑蝥素受体PP2Ac蛋白,支持斑蝥素受体结合机理等相关研究,本试验以菜蛾cDNA为模板,利用PCR方法扩增得到菜蛾PP2Ac基因,将PP2Ac基因连接至经HindⅢ与BamH I双酶切处理的pET-30a原核表达栽体中,获得重组质粒并将其命名为pET30a-... 为获得菜蛾斑蝥素受体PP2Ac蛋白,支持斑蝥素受体结合机理等相关研究,本试验以菜蛾cDNA为模板,利用PCR方法扩增得到菜蛾PP2Ac基因,将PP2Ac基因连接至经HindⅢ与BamH I双酶切处理的pET-30a原核表达栽体中,获得重组质粒并将其命名为pET30a-PX-PP2Ac。将pET30a-PX-PP2Ac转化至大肠杆茵BL21中进行诱导表达获得目的蛋白后,使用Ni-琼脂糖柱对重组蛋白进行纯化。结果表明,菜蛾PP2Ac基因可以在大肠杆菌中表达,目的蛋白在不同的温度下均以包涵体形式存在。优化后的诱导表达条件是IPTG浓度0.2 mM和温度30℃,目的蛋白大小约38 KD。 展开更多
关键词 小菜蛾 pp2ac 原核表达 蛋白纯化
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PP2A Cα敲除小鼠心肌细胞模型的构建
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作者 陈文 温明达 +2 位作者 董大川 高艳红 张朝 《南京师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期74-77,共4页
体外构建PP2A Cα敲除的原代小鼠心室肌细胞模型.选择性地将雄性PP2A Cαfl/fl,Cre/-小鼠与雌性PP2ACαfl/fl,Cre/-小鼠交配.新生小鼠心脏经胰酶消化后差速贴壁获得原代小鼠心室肌细胞,用带有Cre的腺病毒侵染心肌细胞,经荧光显微镜观察... 体外构建PP2A Cα敲除的原代小鼠心室肌细胞模型.选择性地将雄性PP2A Cαfl/fl,Cre/-小鼠与雌性PP2ACαfl/fl,Cre/-小鼠交配.新生小鼠心脏经胰酶消化后差速贴壁获得原代小鼠心室肌细胞,用带有Cre的腺病毒侵染心肌细胞,经荧光显微镜观察和Western-blot检测,分析PP2A Cα的敲除效果.将基因型为PP2A Cαfl/fl,Cre/-的雌雄小鼠进行交配,得到其同样基因型的后代,进而可获得足量基因型为PP2A Cαfl/fl,Cre/-的原代小鼠心肌细胞.用带有重组酶Cre的腺病毒侵染细胞48 h后,可见带有绿色荧光的心肌细胞;Western-blot检测显示,PP2A Cα在Cre腺病毒侵染的心肌细胞可下调60%~80%.本研究成功建立了PP2A Cα敲除的原代小鼠心肌细胞模型. 展开更多
关键词 pp2acα 新生小鼠心肌细胞 带重组酶Cre的腺病毒
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PCSK9及IDOL在姜黄素促进HepG2细胞摄取LDL-C中的作用 被引量:7
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作者 欧露 张彩平 +6 位作者 刘英 乔新惠 麻燕妮 欧淳 胡小波 田英 龙石银 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1286-1291,共6页
目的从分子水平探讨姜黄素的降脂机制,为姜黄素作为降脂药物的临床开发提供科学依据。方法本研究运用油红O染色、酶法测定细胞内胆固醇含量,荧光染色检测细胞胆固醇摄取,RT-Q-PCR及Western blot检测姜黄素对HepG2细胞内胆固醇代谢相关... 目的从分子水平探讨姜黄素的降脂机制,为姜黄素作为降脂药物的临床开发提供科学依据。方法本研究运用油红O染色、酶法测定细胞内胆固醇含量,荧光染色检测细胞胆固醇摄取,RT-Q-PCR及Western blot检测姜黄素对HepG2细胞内胆固醇代谢相关因子在RNA和蛋白水平的表达。结果姜黄素组的HepG2细胞内红色脂滴明显增多,且TC及FC含量增高。Di I标记LDL,姜黄素组HepG2细胞橙红色荧光高于对照组。姜黄素能升高SREBP2和LDLR的mRNA和蛋白水平的表达;降低PCSK9蛋白成熟体及IDOL蛋白表达。结论姜黄素可能通过下调PCSK9及IDOL的表达,进而减少LDLR降解,促进HepG2细胞摄取LDL-C。 展开更多
关键词 姜黄素 低密度脂蛋白受体 前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9型 诱导低密度脂蛋白受体降解蛋白 固醇调节元件结合蛋白2 3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A还原酶
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