五种杨树叶绿体DNA的提取及RFLP分析 被引量：5

1

作者 卢孟柱 卞祖娴 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 1992年第4期465-468,共4页

近几年,叶绿体DNA的研究越来越受到重视,因为叶绿体不仅是植物光合作用的器官,而且DNA分子结构紧凑,相对于核DNA而言,分子量小,结构简单,更易从分予水平上作精细分析。另外,叶绿体DNA具有稳定性、进化缓慢性及编码序列的保守性,因而是... 近几年,叶绿体DNA的研究越来越受到重视,因为叶绿体不仅是植物光合作用的器官,而且DNA分子结构紧凑,相对于核DNA而言,分子量小,结构简单,更易从分予水平上作精细分析。另外,叶绿体DNA具有稳定性、进化缓慢性及编码序列的保守性,因而是研究植物系统发育的好材料。虽然在许多植物中,叶绿体DNA分子非常保守。 展开更多

关键词 杨树 叶绿体 dna 提取 rflp

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茶树叶绿体DNA的PCR-RFLP反应体系优化 被引量：2

2

作者 陈盛相 齐桂年 李欢 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第6期73-76,共4页

通过正交设计对影响茶树聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)反应体系的主要因素进行优化,快速确立适合茶树叶绿体DNA PCR-RFLP分析的扩增体系和酶切体系。结果表明:最佳PCR扩增体系为100ng模板DNA、200μmol/L dNTPs、1.5mmol... 通过正交设计对影响茶树聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)反应体系的主要因素进行优化,快速确立适合茶树叶绿体DNA PCR-RFLP分析的扩增体系和酶切体系。结果表明:最佳PCR扩增体系为100ng模板DNA、200μmol/L dNTPs、1.5mmol/L MgCl2、50ng叶绿体引物、3U TaqDNA聚合酶、加ddH2O至25μL;最佳酶切体系为6μL扩增产物用量、2U限制性内切酶量、1×限制性内切酶buffer、加ddH2O至15μL,37℃酶切6h。利用优化的反应体系,对30个茶树品种叶绿体DNA进行PCR-RFLP扩增,可获得清晰扩增图谱和多态性酶切图谱。 展开更多

关键词 茶树 叶绿体dna PCR—rflp 优化

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土壤微生物分子生态学研究中总DNA的提取 被引量：72

3

作者 赵勇 周志华 +3 位作者 李武 刘彬彬 潘迎捷 赵立平 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期854-860,共7页

建立了一种土壤DNA提取方法。根据DNA产量和纯度2个评价指标,从3种手提土壤DNA方法中优选出方法B为手提DNA方法(Labmethod),它包括样品预处理,细胞裂解,粗DNA纯化,其中细胞裂解组合了玻璃珠击打,SDS裂解,溶菌酶裂解。进一步应用PCR-限... 建立了一种土壤DNA提取方法。根据DNA产量和纯度2个评价指标,从3种手提土壤DNA方法中优选出方法B为手提DNA方法(Labmethod),它包括样品预处理,细胞裂解,粗DNA纯化,其中细胞裂解组合了玻璃珠击打,SDS裂解,溶菌酶裂解。进一步应用PCR-限制性片段长度多态性(Restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)技术及PCR-温度梯度凝胶电泳(Temperaturegradientgelelectrophoresis,TGGE)技术,结合DNA产量、纯度、片段大小以及所反映的微生物群落结构特性等指标评价了手提方法(Labmethod)得到的总DNA质量,并将这些结果与2种应用较广的商业试剂盒(MoBioUltraCleanSoilDNAKit和Bio101FastDNASPINKit(ForSoil))所得DNA的各种指标进行了比较。结果表明,手提方法(Labmethod)的粗DNA产量低于Bio101Kit的,但高于MoBioKit的。这些方法所得DNA的长度都在21kb左右,Labmethod提取的DNA没有严重被剪切现象,而2种试剂盒提取的DNA都有不同程度的剪切。手提方法得到的DNA经纯化后,应用细菌及真菌特异引物进行PCR扩增,均能获得目的片段,表明该方法能从土壤中同时有效提取细菌和真菌总基因组DNA。并且,手提方法所得DNA的细菌16SrDNA和真菌18SrDNA的PCR-RFLP图谱与两种商业试剂盒的图谱基本相似,但3种方法提取的DNA在细菌16SrDNAV3区和真菌28SrDNA片段的PCR-TGGE图谱上都存在一定差异,主要表现在一些弱势条带的有无或强弱上。这说明手提方法提取的总DNA与2种商业试剂盒一样,在一定程度上能反映微生物群落的多样性和组成。总之,手提DNA方法(Labmethod)所用试剂普通,价格便宜,能在4h以内获得够质够量的土壤DNA用于微生物分子生态学研究,较适合于广大普通实验室进行土壤DNA提取工作。 展开更多

关键词 土壤dna提取 dna质量 PCR扩增 限制性片段长度多态性分析 温度梯度凝胶电泳分析

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青海湖裸鲤mtDNA遗传多样性的初步研究 被引量：27

4

作者 赵凯 李军祥 +4 位作者 张亚平 罗静 李太平 吴华 田海宁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期445-448,共4页

本文用BclⅠ、AvaⅠ、BamHⅠ、PstⅠ、KpnⅠ、PvuⅡ共 6种限制性内切核酸酶 ,分析了 15尾青海湖裸鲤mtDNA的限制性片段长度多态性 ,共检测出 2 0个酶切位点 ,发现BclⅠ、BamHⅠ和PvuⅡ三种酶切类型具有多态性。根据不同个体mtDNA的酶切... 本文用BclⅠ、AvaⅠ、BamHⅠ、PstⅠ、KpnⅠ、PvuⅡ共 6种限制性内切核酸酶 ,分析了 15尾青海湖裸鲤mtDNA的限制性片段长度多态性 ,共检测出 2 0个酶切位点 ,发现BclⅠ、BamHⅠ和PvuⅡ三种酶切类型具有多态性。根据不同个体mtDNA的酶切类型 ,青海湖裸鲤存在 4种mtDNA单倍型 ,计算mtDNA多态度π值为 0 .0 0 43,初步认为青海湖裸鲤在线粒体DNA上存在较丰富的群体内变异。 展开更多

关键词 青海湖裸鲤 MTdna 限制性片段长度多态性 遗传多样性

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家蚕卵线粒体DNA限制性内切酶长度多态性研究 被引量：9

5

作者 廖顺尧 刘运强 +2 位作者 鲁成 周泽扬 向仲怀 《西南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2001年第1期29-32,共4页

利用 2 9种限制性内切酶对 34个不同品种家蚕卵mtDNA进行酶切分析 ,发现一化、二化品种与多化品种的HaeⅢ酶切图谱有差异 ,但不同的地理品种间没有出现酶切多态性现象。另外 ,一些家蚕品种的受精卵和非受精卵mtDNA在BglⅠ和PstⅠ酶切下 ... 利用 2 9种限制性内切酶对 34个不同品种家蚕卵mtDNA进行酶切分析 ,发现一化、二化品种与多化品种的HaeⅢ酶切图谱有差异 ,但不同的地理品种间没有出现酶切多态性现象。另外 ,一些家蚕品种的受精卵和非受精卵mtDNA在BglⅠ和PstⅠ酶切下 ,呈现不同的酶切带型。同时 。 展开更多

关键词 家蚕 线粒体dna 限制性长度多态性 限制性内切酶 蚕卵

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不同宿主肝片吸虫DNA限制性片段长度多态性分析 被引量：6

6

作者 徐恒 沈斌 +1 位作者 吴峰 刘世贵 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期26-28,共3页

本文首次对分离自黄牛、水牛和牦牛的肝片吸虫的基因组DNA，以BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ、HindⅢ和PStⅠ等6种限制性内切酶消化后进行琼脂糖电泳，分析比较它们基因组DNA的限制性片段长度多态性（RestrictionFragmentLengthPolymorphism，R... 本文首次对分离自黄牛、水牛和牦牛的肝片吸虫的基因组DNA，以BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ、HindⅢ和PStⅠ等6种限制性内切酶消化后进行琼脂糖电泳，分析比较它们基因组DNA的限制性片段长度多态性（RestrictionFragmentLengthPolymorphism，RFLP）；同时用地高车标记的牦牛肝片吸虫基因组DNA为探针对不同宿主肝片吸虫DNA进行Southern印迹杂交，限制性内切酸酶切结果显示只有两种限制性内切酶（BamHⅠ和EcoRⅠ）在寄生于牦牛的肝片吸虫中检测到多态性，而水牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫基因组DNA之间没有检测到多态性，根据此结果计算了牦牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫和水牛肝片吸虫基因型间的遗传距离，Southern杂交结果显示牦牛肝片吸虫基因DNA的杂交谱带与黄牛肝片吸虫、水牛肝片吸虫基因组DNA的杂交港带存在一定的差异，本文的实验结果表明牦牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫、水牛肝片吸虫的亲缘关系相对较远，而水牛肝片吸虫与黄牛肝片吸虫的亲缘关系较近。 展开更多

关键词 肝片吸虫 dna rflp 宿主

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稻属叶绿体DNA限制性片段长度多态性 被引量：4

7

作者 朱世华 王明全 汪向明 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期139-142,共4页

对稻属（oryza）的14个种和李氏禾属（Leersia）的2个种共138份材料进行了叶绿体DNA限制性片段长度多态性的分析。用内切酶EcoRI酶切、4个叶绿体DNA探针杂交，共发现1o种叶绿体DNA变异类型。在稻属各个种内没有观察到叶绿体DNA的变异，... 对稻属（oryza）的14个种和李氏禾属（Leersia）的2个种共138份材料进行了叶绿体DNA限制性片段长度多态性的分析。用内切酶EcoRI酶切、4个叶绿体DNA探针杂交，共发现1o种叶绿体DNA变异类型。在稻属各个种内没有观察到叶绿体DNA的变异，叶绿体DNA变异类型基本上以稻属的染色体组型水平划分，因此认为精属的叶绿体DNA在进化过程中变异程度很低。推测CCDD组的o．alta、o．grandiglumis和o．latifolia及CC组的o．officinals和o.eichingeri各有共同的原始祖先。遗传距离分析显示CC、CCDD、BBCC组之间亲缘关系很近，这3个组与EE组亲缘关系也较近。李氏禾属的2个种L．perrieri和L．tisseranti与稻属的遗传距离很远。 展开更多

关键词 稻属 李氏禾属 叶绿体dna 限制性片段长度

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DNA标记的种类、特点及其研究进展 被引量：5

8

作者 刘学军 童继平 +1 位作者 李素敏 韩傲男 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期35-40,共6页

生命的遗传信息存储于DNA序列之中,基因组DNA序列的变异是物种遗传多样性的基础。目前已发展出的DNA标记技术不下十几种,它们各具特色,并被广泛地应用于作物遗传育种、基因定位、亲缘关系鉴别、基因克隆研究等方面。对DNA标记技术进行分... 生命的遗传信息存储于DNA序列之中,基因组DNA序列的变异是物种遗传多样性的基础。目前已发展出的DNA标记技术不下十几种,它们各具特色,并被广泛地应用于作物遗传育种、基因定位、亲缘关系鉴别、基因克隆研究等方面。对DNA标记技术进行分类,并作了初步概述。 展开更多

关键词 dna标记 rflp SSR SNPS

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DNA检测技术及其在微生物采油中的应用 被引量：6

9

作者 段景杰 赵亚杰 吕振山 《油田化学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期192-196,共5页

专题论文。第一节简述了聚合酶链式反应(PCR)技术的特点、原理及在微生物采油中的作用。第二节介绍了菌种16SrRNA基因碱基序列分析的操作程序,包括基因扩增及精制、16SrRNA基因克隆、荧光标识基因序列PCR扩增、基因碱基序列及微生物属... 专题论文。第一节简述了聚合酶链式反应(PCR)技术的特点、原理及在微生物采油中的作用。第二节介绍了菌种16SrRNA基因碱基序列分析的操作程序,包括基因扩增及精制、16SrRNA基因克隆、荧光标识基因序列PCR扩增、基因碱基序列及微生物属种确定,给出了2个MEOR菌的基因碱基序列及属种。第三节介绍了多酶切和混合酶切两种PCR RFLP基因检测技术(RFLP:限制性片段长度多态性),后一种方法使操作减少1/4。第四节介绍了直接DNA扩增基因检测技术,包括平板菌落法(检测时间2d)和最大可能数法(当天得检测结果),DNA模板制备及其反应体系,电泳法检测及菌种检出。第五节介绍了DNA基因检测技术在吉林油田多项微生物采油矿场试验中的应用,包括常在菌对微生物采油影响分析,微生物单井吞吐、微生物清防蜡、微生物调驱效果分析,多功能采油菌构建的实验探索。图2参9。 展开更多

关键词 dna检测技术 微生物采油 矿场试验 吉林油田

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RFLP在作物育种中的应用 被引量：3

10

作者 沈革志 《上海农业学报》 CSCD 1992年第2期91-96,共6页

RFLP分析是一门新兴的分子生物学技术。在构建RFLP遗传图和确立RFLP标记与性状连锁关系的基础上,RFLP分析可作为一种有效的工具,应用于遗传研究和育种实践。

关键词 rflp 作物 育种

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应用pAW101 DNA探针作人流胚胎组织的亲权鉴定

11

作者 伍新尧 杨英浩 +1 位作者 罗超权 刘煦文 《中山医科大学学报》 CSCD 1992年第3期40-43,共4页

用pAW1015kb的DNA片段为探针检测人流胚胎与其亲代的DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)的遗传关系。同时测定他们的某些同工酶(葡萄糖磷酸变位酶、酯酶D、乙二醛酶Ⅰ)型。在不违反孟德尔遗传规律的前提下,按M(?)ller-Essen公式计算,其父... 用pAW1015kb的DNA片段为探针检测人流胚胎与其亲代的DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)的遗传关系。同时测定他们的某些同工酶(葡萄糖磷酸变位酶、酯酶D、乙二醛酶Ⅰ)型。在不违反孟德尔遗传规律的前提下,按M(?)ller-Essen公式计算,其父权概率都已达到或超过可以确认亲生关系的标准。这一方法的建立,使过去棘手的早期妊娠的亲权鉴定之难题获得圆满解决。此外,本文还对这一方法的优越性进行了讨论。 展开更多

关键词 胚胎 亲权鉴定 dna探针 人工流产

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浙江地方猪种遗传多样性研究 被引量：3

12

作者 章胜乔 吴小秋 +2 位作者 傅衍 徐宁迎 张亚平 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期547-551,共5页

采用蛋白电泳和线粒体 ＤＮＡ ＲＦＬＰ分析方法，研究了浙江七个地方品种猪及浙江野猪的遗传多样性状况⒚从分析的３０ 个遗传座位、９９ 个地方品种个体中发现 ＭＤＨ，ＰＥＰＢ，６ＰＧＤ，ＡＫ，ＡＤＡ，ＰＨＩ六个座位具有多态性... 采用蛋白电泳和线粒体 ＤＮＡ ＲＦＬＰ分析方法，研究了浙江七个地方品种猪及浙江野猪的遗传多样性状况⒚从分析的３０ 个遗传座位、９９ 个地方品种个体中发现 ＭＤＨ，ＰＥＰＢ，６ＰＧＤ，ＡＫ，ＡＤＡ，ＰＨＩ六个座位具有多态性，其中ＡＫ，ＭＤＨ 多态座位在家猪中为首次发现⒚多态座位百分比和平均杂合度分别为Ｐ＝ ０２００， Ｈ＝ ００４３⒚用ＵＰＧＭＡ 法对由基因频率所计算的标准遗传距离进行聚类分析，结果显示：浙江地方猪种的亲缘关系很近⒚在ｍ ｔＤＮＡ ＲＦＬＰ水平，２５ 种限制性内切酶在２７ 个地方品种个体及３ 个野猪个体中共检出３０ 种限制性态型，可归结成三种单倍型⒚各单倍型间平均遗传距离（Ｐ）为０００５，群体平均多态度（π）为００００ ８，处于遗传多样性贫乏范围⒚另外对金华Ⅲ系猪的研究表明金华Ⅲ系猪可能有两个母系起源⒚浙江省地方猪种遗传多样性贫乏。 展开更多

关键词 遗传多样性 蛋白电泳 线粒体dna 限制性 猪

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pAW101-EcoRⅠ限制性片段在广东人群中的分布及其在法医学上的应用 被引量：2

13

作者 罗超权 伍新尧 +3 位作者 杨英浩 杜华威 贺奇才 刘熙文 《中山医科大学学报》 CSCD 1992年第1期65-68,共4页

用pAW1015kb的片段为探什,检测广东地区106例无血缘关系居民的EcoRI酶切限制性片段(RF)的分布情况。共发现长度各异的65条RF,每人只具有其中的1～2条。统计学分析证明,这些RF的分布符合哈一温氏平衡。无血缘关系的两个个体间具有完全相... 用pAW1015kb的片段为探什,检测广东地区106例无血缘关系居民的EcoRI酶切限制性片段(RF)的分布情况。共发现长度各异的65条RF,每人只具有其中的1～2条。统计学分析证明,这些RF的分布符合哈一温氏平衡。无血缘关系的两个个体间具有完全相同的RF图谱的机会为0.00048(相当于l/2080)。家系调查结果表明,这些RF符合孟德尔遗传规律。本文是应用作者推导出来的计算RF大小的数学模式。此法在作亲权鉴定时,父权排除率可达0.914,相当于目前国内所用的血型测定法(包括HLA-A,-B抗原测定)所达到的总和,说明此方法在法医学个人识别和亲权鉴定中具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 限制在性片段 dna探针 亲权鉴定

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