PEDV、PoRV、PDCoV多重荧光定量RT-PCR方法的建立和应用 被引量：1

1

作者 陈登金 李鹏宇 +5 位作者 董楠 常昊天 胡渤 肖进 张蕾 马良 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期71-78,共8页

为实现对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的同时鉴别检测,本试验根据PEDV核衣壳蛋白(N)基因、PoRV结构蛋白6(VP6)基因和PDCoV基质蛋白(M)基因筛选设计3对特异性引物和荧光标记探针,通过矩阵法优化... 为实现对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的同时鉴别检测,本试验根据PEDV核衣壳蛋白(N)基因、PoRV结构蛋白6(VP6)基因和PDCoV基质蛋白(M)基因筛选设计3对特异性引物和荧光标记探针,通过矩阵法优化反应条件,建立多重荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,绘制标准曲线,验证该方法的特异性、敏感性和重复性,并进行临床样本检测。标准曲线拟合试验结果显示,PEDV、PoRV和PDCoV多重荧光定量RT-PCR方法针对各病毒扩增均具有良好的相关系数和扩增效率;特异性试验结果显示,该方法仅对PEDV、PoRV和PDCoV呈现特异性扩增,不与其他猪源病毒发生交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对PEDV、PoRV和PDCoV的最低检测限均为1×10^(0)copies/μL;组内和组间重复性试验的Ct值变异系数均小于2%,具有良好的重复性。对367份临床样本进行PEDV、PoRV和PDCoV检测,多重荧光定量RT-PCR检测的阳性率为92.37%(339/367),而地方标准多重RT-PCR检测的阳性率为83.38%(306/367),2种方法临床样本检测符合率为91.01%(334/367)。结果表明,本试验建立了一种可快速、准确、灵敏检测PEDV、PoRV和PDCoV的多重荧光定量RT-PCR方法,可用于实验室病原和临床样本检测,为临床猪病毒性腹泻的研究和防控提供了有效技术方法。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪轮状病毒(porv) 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) 逆转录聚合酶链式反应

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PEDV、TGEV、PoRV 3种猪病毒性腹泻病毒的流行现状及控制策略 被引量：26

2

作者 王艳丰 张丁华 +2 位作者 李爱心 程征 刘守铉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期518-527,共10页

引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征... 引起猪病毒性腹泻的病原主要有猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)及猪轮状病毒(porcine rotarvirus,PoRV),临床均以呕吐、严重腹泻和脱水为特征,哺乳仔猪发病率和病死率较高,后备猪、母猪或育肥猪呈一过性腹泻,发病率较低。特别是自2010年以来,PEDV变异毒株的流行已对全球的生猪产业造成严重影响,而已有的防控措施已经不能应对新的流行态势。近年来,针对PEDV、TGEV、PoRV的毒株流行变化及防控措施研究的较多,许多新技术、新方法已应用于3种病原的控制。作者基于当前3种病毒的遗传变异分析和流行现状,从饲养管理、免疫预防、中药疗法、干扰疗法、特异疗法及返饲疗法等方面对防控措施进行综述,以期为猪病毒性腹泻的防控提供科学依据。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪轮状病毒(porv) 流行现状 防控措施

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基于Taqman探针三重Real-Time RT-PCR检测PEDV、TGEV、PoRV方法的建立与应用 被引量：2

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作者 李儒曙 苏惠龙 +4 位作者 蒋郁明 邓湘辉 黄铮 赵福振 罗宝正 《广东畜牧兽医科技》 2019年第5期41-44,52,共4页

为研究能够同时检测PEDV、TGEV、PoRV三种猪病毒性腹泻病原的方法,分别设计三套特异性的引物和探针,建立了基于Taqman探针的三重Real-Time RT-PCR检测方法,实验结果表明,该方法特异性好,灵敏度高,检测最低浓度为10 copies/μL数量级.应... 为研究能够同时检测PEDV、TGEV、PoRV三种猪病毒性腹泻病原的方法,分别设计三套特异性的引物和探针,建立了基于Taqman探针的三重Real-Time RT-PCR检测方法,实验结果表明,该方法特异性好,灵敏度高,检测最低浓度为10 copies/μL数量级.应用该方法对广东11个地市的44份猪腹泻样品进行检测,其中PEDV阳性率为100%,TGEV、PoRV阳性率为0,证明PEDV是引起广东地区猪病毒性腹泻的重要病原. 展开更多

关键词 三重Real-TimeRT-PCR PEDV TGEV porv

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PEDV、TGEV、PoRV和PKV多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：8

4

作者 苗艳 陈亮 +4 位作者 朱庆贺 李阳 兰世捷 徐馨 李丹 《动物医学进展》 北大核心 2020年第3期66-70,共5页

为快速鉴别诊断猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪嵴病毒(PKV),根据PEDV的M基因、TGEV的N基因、PoRV的VP6基因和PKV的3D基因序列设计4对特异性引物,通过PCR扩增目的片段并构建重组质粒,建立了一... 为快速鉴别诊断猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪嵴病毒(PKV),根据PEDV的M基因、TGEV的N基因、PoRV的VP6基因和PKV的3D基因序列设计4对特异性引物,通过PCR扩增目的片段并构建重组质粒,建立了一种可同时检测4种病毒的RT-PCR诊断方法,该方法可特异性扩增这4种病毒的相应片段,而对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)均无扩增,最低检出量分别为1.33×10^4、1.33×10^3、1.33×10^4、1.33×10^5copies/μL。应用该方法对临床55份猪腹泻样品进行检测,结果检测出14份PEDV、1份PoRV和27份PKV,未检出TGEV,其中PEDV和PKV混合感染9份。上述结果表明,建立的多重RT-PCR检测方法快速、特异、敏感,可用于以上4种腹泻病毒的临床检测和流行病学调查。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 猪嵴病毒 多重RT-PCR

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猪轮状病毒VP6蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：4

5

作者 潘向英 曾智勇 +7 位作者 梁海英 汤德元 王彬 叶泥 田红利 边孟婷 柳佳佳 黄书 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1231-1240,共10页

【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6... 【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6重组质粒为模板扩增VP 6截短基因。利用pET-32a(+)原核表达载体构建pET32a-PoRV-VP6重组质粒。以大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞为宿主菌,对重组质粒进行诱导表达,并优化表达条件。利用His标签镍柱对pET32a-PoRV-VP6重组蛋白进行纯化,以此作为包被抗原,通过单一变量法优化抗原包被浓度、血清稀释度、二抗稀释度及一抗、二抗孵育时间等工作条件。确定间接ELISA方法的阴阳性临界值,检验其特异性、敏感性、重复性及符合性,并对2021—2024年采自贵州地区不同猪场的384份临床猪血清进行检测。【结果】试验成功构建pET32a-PoRV-VP6重组表达载体,实现VP6蛋白的原核截短表达,蛋白分子质量大小约40 ku,具有良好的反应原性。对间接ELISA方法条件进行优化,确定VP6包被抗原最佳浓度为2μg/mL、阳性血清稀释度为1∶100、血清样品和二抗孵育时间均为60 min、TMB反应时间为10 min、阴阳性临界值(D 450 nm)为0.410。建立的间接ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒标准阳性血清不发生反应,特异性强;批内和批间重复试验变异系数均<10%,重复性好;与PoRV A型ELISA抗体检测试剂盒的总体符合率为96.80%。间接ELISA方法检测临床384份猪血清样品结果显示,样品总阳性率为28.91%。【结论】本研究成功实现了PoRV VP6蛋白的截短表达,并建立了PoRV间接ELISA抗体检测方法,适用于临床PoRV抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多

关键词 猪轮状病毒(porv) VP6蛋白 截短表达 间接ELISA

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G1P[7]型猪轮状病毒的分离鉴定及其全基因组分析

6

作者 王建新 马润超 +5 位作者 周金柱 卞贤宇 朱雪蛟 李昱辰 张雪寒 李彬 《南方农业学报》 北大核心 2025年第3期932-943,共12页

[目的]分离鉴定G1P[7]型猪轮状病毒(PoRV)并进行全基因组分析,为仔猪腹泻病防控及疫苗研发提供理论依据。[方法]腹泻仔猪粪便样本由南京农业大学动物医学院提供,对样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔... [目的]分离鉴定G1P[7]型猪轮状病毒(PoRV)并进行全基因组分析,为仔猪腹泻病防控及疫苗研发提供理论依据。[方法]腹泻仔猪粪便样本由南京农业大学动物医学院提供,对样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)及PoRV PCR检测。向PCR检测结果为阳性的样本上清液中加入胰蛋白酶,随后接种到MA104细胞进行病毒分离和纯化。通过PCR检测、电镜观察、间接免疫荧光检测和RAN-PAGE检测鉴定毒株。通过绘制病毒增殖曲线和检测病毒对MA104、Vero、IPEC-J2、HT-29、HRT-18和Caco-2细胞的易感性探究毒株生物学特性。利用生物信息学软件分析分离毒株的11个基因与国内外各基因型轮状病毒的同源性并构建病毒全基因组系统发育树。[结果]粪便样本PCR检测结果显示,粪便样本中仅PoRV呈阳性。成功分离出1株PoRV,将该毒株命名为JSNJ2023,病毒在MA104细胞上能稳定增殖和传代,经3次克隆,筛选出适合的克隆株,在第3次克隆中,选择病毒滴度最高的克隆株进行扩大培养,最终成功获得高滴度的单克隆毒株。病毒颗粒呈明显的球形结构,具有清晰的双层衣壳特征,直径约70 nm。间接免疫荧光检测结果显示,JSNJ2023毒株能感染MA104细胞。RNA-PAGE检测结果显示,JSNJ2023毒株具有A群轮状病毒特征性的11条电泳图谱,排列方式为4∶2∶3∶2。病毒增殖曲线显示,接种病毒18 h后JSNJ2023毒株在MA104细胞中的病毒滴度达峰值,随着感染时间的延长,病毒滴度逐渐降低。JSNJ2023毒株对细胞的易感性依次为MA104、IPEC-J2、HRT-18、HT-29、Caco2和Vero细胞。基因同源性分析与系统发育树构建结果显示,JSNJ2023毒株属于猪A群G1P[7]型轮状病毒,其基因型为G1-P[7]-I5。[结论]成功分离获得PoRV JSNJ2023毒株,其属于A群G1P[7]型轮状病毒,基因型为G1-P[7]-I5。JSNJ2023毒株与人、猪及牛轮状病毒存在高度同源性,其进化过程中可能受到人轮状病毒、PoRV与牛轮状病毒的影响,发生了基因重组或交换,形成了独特的基因型(R1-C1-M1-A8-N1-T7-E1-H1)。 展开更多

关键词 猪轮状病毒(porv) 全基因组测序 遗传进化分析 基因重组

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猪轮状病毒VP6蛋白的真核表达及单克隆抗体制备和应用

7

作者 魏黄思梧 张兴艺 +5 位作者 黄校花 刘昌锦 武文杰 沈政乔 罗锋 邓舜洲 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2750-2761,共12页

【目的】制备抗猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6蛋白单克隆抗体,为PoRV检测方法的开发提供参考。【方法】以痘苗病毒启动子P28为VP6的启动子,以G3型PoRV核酸为模板扩增VP6基因,通过无缝克隆方法将VP6基因片段克隆至pSWE178质粒,... 【目的】制备抗猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6蛋白单克隆抗体,为PoRV检测方法的开发提供参考。【方法】以痘苗病毒启动子P28为VP6的启动子,以G3型PoRV核酸为模板扩增VP6基因,通过无缝克隆方法将VP6基因片段克隆至pSWE178质粒,构建重组质粒pSWE178-P28-VP6;利用同源重组和蚀斑纯化技术获得表达VP6蛋白的重组猪痘病毒rSWE178-P28-VP6,用SDS-PAGE鉴定VP6蛋白表达形式。以G9型PoRV为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,以重组病毒表达的VP6蛋白为检测抗原,通过间接ELISA筛选分泌抗VP6单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过间接免疫荧光试验(IFA)检测单克隆抗体与G3、G4、G5、G9型PoRV的反应原性,选择其中1株单克隆抗体对人工感染PoRV的猪肠道组织进行免疫组化(IHC)检测。【结果】在构建了表达PoRV VP6蛋白的重组质粒pSWE178-P28-VP6基础上,成功构建了表达PoRV VP6蛋白的重组猪痘病毒,表达的蛋白分子质量大小45 ku,为可溶性表达。采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,筛选获得29株分泌抗VP6单克隆抗体的杂交瘤细胞株。IFA结果显示,26株单克隆抗体均能与G3、G4、G5、G9型PoRV反应,但荧光亮度存在差异。IHC检测结果显示,单克隆抗体能与感染PoRV的临床样品发生特异性免疫反应。【结论】本研究利用真核表达系统成功表达了PoRV VP6蛋白,采用杂交瘤技术筛选获得29株抗VP6单抗隆抗体,其中26株均能与G3、G4、G5、G9型PoRV反应。试验结果为PoRV免疫学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多

关键词 猪轮状病毒(porv) VP6蛋白 真核表达 单克隆抗体

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一例猪轮状病毒性腹泻的诊断与防控

8

作者 陈锦成 孙守湖 贺东生 《猪业科学》 2025年第5期71-72,共2页

0前言轮状病毒(Rotavirus,RV)是经口传播的致病微生物,可感染人类和多种动物,导致肠道疾病。猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)对猪群中的危害尤其严重,特别是对幼龄个体,主要侵犯小肠上皮组织,引发腹泻症状。在生猪养殖业中,PoRV对... 0前言轮状病毒(Rotavirus,RV)是经口传播的致病微生物,可感染人类和多种动物,导致肠道疾病。猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)对猪群中的危害尤其严重,特别是对幼龄个体,主要侵犯小肠上皮组织,引发腹泻症状。在生猪养殖业中,PoRV对环境抵抗力强,在粪污中不易失活,传播能力强,加之基因不断重组并可能引起跨物种传播。 展开更多

关键词 腹泻 小肠上皮组织 轮状病毒 生猪养殖业 porv

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福州市闽侯县某规模化猪场轮状病毒病的诊治

9

作者 张金城 《猪业科学》 2025年第3期100-102,共3页

A群轮状病毒(Group A porcinerotavirus,RVA)是对世界各地的养殖业构成的严重威胁,与仔猪严重腹泻有关。病毒通过粪口途径传播,主要感染和破坏小肠成熟的肠细胞和肠内分泌细胞,导致急性胃肠炎。猪轮状病毒(Porcine Rotavirus,PoRV)于197... A群轮状病毒(Group A porcinerotavirus,RVA)是对世界各地的养殖业构成的严重威胁,与仔猪严重腹泻有关。病毒通过粪口途径传播,主要感染和破坏小肠成熟的肠细胞和肠内分泌细胞,导致急性胃肠炎。猪轮状病毒(Porcine Rotavirus,PoRV)于1976年首次从受感染的猪中分离出来。随后,许多研究记录了PoRV感染在世界各地的广泛流行。PoRV自被发现以来,已经给全球养猪业造成了巨大的经济损失。PoRV是一种双股正链RNA(dsRNA)病毒,属于呼肠孤病毒科的成员。 展开更多

关键词 腹泻 肠细胞 轮状病毒 粪口途径 仔猪 porv

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猪轮状病毒江西株AY01的分离鉴定 被引量：18

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作者 刘小兰 刘昌锦 +5 位作者 余文洋 李潇翔 边彦超 黄校花 罗锋 邓舜洲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第8期3151-3162,共12页

【目的】确定江西省某猪场哺乳仔猪发生腹泻的病因。【方法】对送检的仔猪小肠样品进行猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)和猪轮状病毒(Porcine ... 【目的】确定江西省某猪场哺乳仔猪发生腹泻的病因。【方法】对送检的仔猪小肠样品进行猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)和猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)的RT-PCR检测,将阳性样品接种MA104细胞传代进行PoRV的分离;对分离毒株进行电镜观察、间接免疫荧光试验、PoRV VP4和VP7基因序列测序和动物回归等试验。【结果】猪小肠病料样品经终浓度15μg/mL的胰酶处理37℃孵育2 h,接种MA104细胞,能在细胞上增殖传代,第6代开始表现稳定的细胞病变;电镜观察可见病毒粒子直径大小为61~70 nm,平均大小为65 nm,呈带有短纤突且外缘光滑的形似车轮状的粒子,具有轮状病毒粒子典型的形态特征;间接免疫荧光试验和RT-PCR检测均为PoRV阳性,确定该分离株为PoRV。分离株VP4和VP7基因序列分析显示,VP4基因型与P[23]基因型相似性最高,VP7基因型与G5基因型相似性最高,根据A群轮状病毒最新分类方法,分离株属于G5P[23]型。动物回归试验结果显示,经口感染该分离株的1日龄初生仔猪于感染后24 h左右陆续出现水样腹泻、呕吐等临床症状,并能在粪便中检测到PoRV。【结论】通过MA104细胞连续传代,从江西某猪场的腹泻仔猪小肠样品成功分离到1株PoRV,该分离株属于G5P[23]型PoRV,为哺乳仔猪发生腹泻的病原。 展开更多

关键词 猪轮状病毒(porv) 分离鉴定 动物回归试验

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新疆伊犁河谷地区规模化猪场病毒性腹泻疾病检测与分析 被引量：4

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作者 王传锋 米青婕 皮志媛 《中国猪业》 2022年第2期70-73,共4页

为了解2021年伊犁河谷地区规模化猪场猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)等5种病毒性腹泻的感染情况,试验采用RT-PCR对2021年从伊犁河谷地区规模... 为了解2021年伊犁河谷地区规模化猪场猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)等5种病毒性腹泻的感染情况,试验采用RT-PCR对2021年从伊犁河谷地区规模化猪场采集患腹泻病猪的血液、粪便及肠内容物等1200份病料组织检测5种病毒性疾病的感染情况。结果表明,PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV、BVDV总阳性率分别为34.5%、7.4%、22.7%、2.9%、8.2%,以PEDV和PoRV阳性率较高,且以二重感染为主,其中PEDV/TGEV、PEDV/PoRV二重感染率分别为7.2%、9.4%,试验为该地区猪场中5种病毒性腹泻疾病的防控提供参考依据。 展开更多

关键词 猪 腹泻 PEDV TGEV porv PDCoV BVDV

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猪轮状病毒VP4基因重组腺病毒的构建及抗体水平评价 被引量：2

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作者 肖莉 牛小杰 +3 位作者 刘庆庆 王月丽 陈创夫 易继海 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期260-269,共10页

【目的】构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因重组腺病毒,为开发PoRV候选基因工程疫苗奠定基础。【方法】参考GenBank中流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因序列(登录号:MH898990.1)合成PoRV VP4基因,将得... 【目的】构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因重组腺病毒,为开发PoRV候选基因工程疫苗奠定基础。【方法】参考GenBank中流行株PoRV G9P[23]型的VP4基因序列(登录号:MH898990.1)合成PoRV VP4基因,将得到的目的基因与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV进行重组,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,构建腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-VP4;腺病毒穿梭载体经过PmeⅠ内切酶线性化处理后与含有腺病毒骨架pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞进行同源重组获得重组质粒pAd-VP4,对重组质粒进行PacⅠ酶切鉴定,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。将重组质粒转染HEK293A细胞获得重组腺病毒rAd-VP4,对该重组腺病毒进行扩大培养并测定重组腺病毒的半数组织培养感染剂量(TCID50);通过RT-PCR检测其体外表达情况,Western blotting检测其反应原性;将制备的重组腺病毒用不同病毒滴度和不同免疫次数对小鼠进行腹腔免疫,收集血清通过ELISA法测定IgG抗体水平。【结果】RT-PCR扩增出1条大小为2343 bp的rAd-VP4重组腺病毒条带,测序结果正确,表明重组腺病毒rAd-VP4构建成功,测得rAd-VP4病毒滴度为106.5TCID50,Western blotting结果表明,重组腺病毒rAd-VP4在蛋白水平上得到了正确表达,蛋白的分子质量约为87 ku。小鼠IgG抗体检测结果表明,在用106.5TCID50rAd-VP4免疫后的第35和42天,小鼠血清中的IgG抗体水平显著高于105.3TCID50TGE-PED-PRV三联活疫苗IgG抗体水平(P<0.05);106.5TCID50rAd-VP4在免疫后第35和42天产生的抗体水平显著高于105.5和104.5TCID50rAd-VP4(P<0.05),而105.5TCID50rAd-VP4在免疫后第28天产生的抗体水平显著高于106.5和104.5TCID50rAd-VP4(P<0.05)。106.5TCID50rAd-VP4的2次免疫和3次免疫产生的IgG抗体在不同免疫时间均差异不显著(P>0.05)。【结论】本研究成功构建了重组腺病毒rAd-VP4,其病毒滴度为106.5TCID50。106.5和105.5TCID50rAd-VP4分别在第42和28天产生较高的IgG抗体水平,2次免疫和3次免疫对产生IgG抗体水平均无显著影响。试验结果可为开发PoRV重组腺病毒候选疫苗提供参考。 展开更多

关键词 猪轮状病毒(porv) 重组腺病毒载体 IGG抗体水平

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猪轮状病毒的分离鉴定和全基因组序列分析 被引量：13

13

作者 樊高 申翰钦 +7 位作者 王连想 马保华 周庆丰 李群辉 李薇 林丽苗 蔡新斌 张辉华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第6期47-54,共8页

为了解广东省规模化猪场中猪轮状病毒(PoRV)流行毒株的基因特征,本试验在广东省某猪场采集腹泻仔猪肠道组织样品,经实时荧光定量PCR(qPCR)进行病毒初步鉴定;分离获得病毒后,通过间接免疫荧光、电镜观察进一步鉴定,并对分离毒株进行全基... 为了解广东省规模化猪场中猪轮状病毒(PoRV)流行毒株的基因特征,本试验在广东省某猪场采集腹泻仔猪肠道组织样品,经实时荧光定量PCR(qPCR)进行病毒初步鉴定;分离获得病毒后,通过间接免疫荧光、电镜观察进一步鉴定,并对分离毒株进行全基因组高通量测序和遗传进化分析。结果显示,qPCR初步鉴定该腹泻仔猪病料为PoRV感染,从阳性病料中分离获得1株能引起典型细胞病变的毒株,在电镜下可观察到似车轮状的病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察有绿色荧光,将该PoRV分离毒株命名为GD2022,其完整基因型为G9-P[23]-I5-R1-C1-M1-A8-N1-T1-E1-H1;基因遗传进化分析结果显示,GD2022为人轮状病毒、猪轮状病毒和狗轮状病毒基因组重组后的毒株。本试验结果丰富了PoRV基因组学和分子流行病学相关的研究资料,为轮状病毒防控提供了数据支持。 展开更多

关键词 猪轮状病毒(porv) 全基因组测序 腹泻 电镜观察

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广西仔猪腹泻病毒病原流行病学调查 被引量：32

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作者 郭旋 陈静 +7 位作者 刘欢 侯韶毅 龙凤 李莹莹 曾娟 兰家暖 刘芳 黄伟坚 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期155-160,共6页

【目的】了解引起广西仔猪腹泻的主要病毒病原及其分子流行病学特点，为其防控提供理论依据。【方法】采用RT-PCR对2011年至2012年7月从广西11个城市的养猪场采集的232份病料进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）... 【目的】了解引起广西仔猪腹泻的主要病毒病原及其分子流行病学特点，为其防控提供理论依据。【方法】采用RT-PCR对2011年至2012年7月从广西11个城市的养猪场采集的232份病料进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（PoRV）检测和流行病学调查；对部分PEDV阳性病料的M基因进行克隆，并与国内部分省（市）及国外的一些M基因序列进行比对和遗传进化分析。【结果】广西11个城市采集的232份病料中PEDV、PoRV的阳性率分别为37.50%和0.03%，而TGEV均为阴性。对部分PEDV阳性病料进行M基因扩增，获得14条M基因，其核苷酸同源性及推导氨基酸序列同源性分别为97.4%~100.0%和96.0%~100.0%。将扩增获得的14条PEDV M基因与GenBank上发表的40条国内外PEDV M基因进行比对分析，发现有13条同位于一大支上（G1），其中9条与我国2011年分离获得的广东、四川、江苏参考株及泰国2008年分离获得的5条参考株、韩国2007年分离获得的两条参考株同位于G1-1上，4条与我国2011年分离获得的江西、江苏、广东、福建毒株及江苏2004年分离株JS-2004-2 同位于G1-2上。另外一条PEDV M基因（NNA-11）却与其余13条相距较远，位于G2上。【结论】从2011年至今致使广西仔猪腹泻的病毒主要是PEDV，各市均有不同程度感染，且感染全年存在；大部分广西流行毒株与2011年以来我国广东、福建、江苏、江西四省流行毒株的亲缘性较高，与2007年以来泰国、韩国的流行毒株亲缘关系也非常密切，但与我国2006年前分离获得的北方毒株、经典疫苗株、韩国疫苗株相距较远。 展开更多

关键词 仔猪腹泻病 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 流行病学 M基因 广西

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2017—2021年广西腹泻猪群主要病毒性腹泻病原检测 被引量：20

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作者 段群棚 秦毅斌 +14 位作者 何文娜 赵武 卢冰霞 周英宁 全琛宇 赵硕 冯建远 梁家幸 蒋冬福 李斌 陈婷婷 许心婷 卢敬专 陈忠伟 何颖 《中国动物检疫》 CAS 2021年第10期1-8,共8页

为掌握广西地区导致猪群腹泻的主要病毒性病原的流行态势,为养殖场猪病毒性腹泻的综合防控提供依据,用实时荧光RT-PCR检测方法,对2017年1月—2021年6月广西14个地市489个猪场1206份临床腹泻样品进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(... 为掌握广西地区导致猪群腹泻的主要病毒性病原的流行态势,为养殖场猪病毒性腹泻的综合防控提供依据,用实时荧光RT-PCR检测方法,对2017年1月—2021年6月广西14个地市489个猪场1206份临床腹泻样品进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)等病原检测,并分析其阳性检出率在不同年份、季节、地区、年龄段猪群之间的差异以及病原混合感染情况。结果显示,2017—2021年,PEDV、PDCoV、PoRV、TGEV样品阳性检出率分别为49.67%、7.63%、4.56%和0.33%,场阳性检出率分别为53.37%、8.18%、8.18%和0.61%;病毒性腹泻病原有一定的季节性流行特征,多表现为冬、春季流行加重;PEDV、PDCoV普遍流行,PoRV局部流行,TGEV散发流行;4种病原对不同年龄段腹泻猪群的感染率存在差异,其中对哺乳仔猪危害最为严重;猪群以单一感染为主,主要为PEDV单一感染,阳性检出率为47.93%,混合感染均为二重感染且感染率较低。结果表明,导致广西地区猪群腹泻的主要病毒性病原主要为PEDV、PDCoV和PoRV,其中PEDV为最主要病原,其他病原也呈流行加重趋势,需进一步加强病原监测和疫病综合防控。 展开更多

关键词 猪病毒性腹泻 病原检测 猪流行性腹泻病毒 猪轮状病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪丁型冠状病毒

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2021年春季湘西州部分地区4种猪腹泻相关病毒流行病学调查与分析 被引量：7

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作者 王成 王锐 +5 位作者 孙孟佳 黄秀菊 雷志坚 王鹏 秦世新 向成志 《养猪》 2022年第2期119-121,共3页

为初步调查春季湘西州地区4种猪腹泻相关病毒[猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)]流行情况。于2021年春季从湘西州7个县市共20个规模化猪场采集腹泻猪粪便样品共303份,应... 为初步调查春季湘西州地区4种猪腹泻相关病毒[猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)]流行情况。于2021年春季从湘西州7个县市共20个规模化猪场采集腹泻猪粪便样品共303份,应用荧光定量PCR技术(qPCR)检测4种腹泻病毒感染情况。结果发现:303份腹泻粪便样品中均未检出PEDV、TGEV和PDCoV核酸,但样品中PoRV核酸平均检出率为25.08%(76/303),场阳性率为55.0%(11/20);7个县市来源样品PoRV感染率为18.52%~40.0%。不同发育阶段腹泻猪群PoRV感染率存在差异,为9.43%~49.09%,且哺乳仔猪和保育猪病毒载量较其它阶段猪群更高。以上结果表明,PoRV是导致湘西州地区猪群腹泻主要病原之一,该研究为当地猪病毒性腹泻防控提供了科学依据。 展开更多

关键词 湘西州 猪腹泻样品 PEDV TGEV porv PDCoV 流行情况调查

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猪轮状病毒胶体金检测试纸条的研制及应用 被引量：3

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作者 李妍花 周兵强 +11 位作者 康笃利 郝丽影 汪志艳 赵少若 黄甜 庞杏豪 刘俊阳 楚园园 张云静 高晓静 邓均华 田克恭 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1223-1231,共9页

【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测... 【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线。通过优化胶体金溶液最适pH、标记抗体和检测抗体的最佳使用量,制备PoRV胶体金检测试纸条;对试纸条的灵敏度、敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评价。通过检测50份猪粪便样品,计算试纸条与RT-PCR方法的符合率,最后采用试纸条进行1249份临床样品的测定。【结果】经优化后试纸条的最佳参数如下:胶体金溶液最佳pH为8.0,标记抗体4G5和检测抗体5G4最佳使用量分别为14.4μg/mL和1 mg/mL。试纸条能检测出1∶2000稀释的PoRV OSU株(G5型)病毒液,灵敏度为104.5TCID50/mL,且检测PoRV G9、G3和G4型毒株均为阳性。检测猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)均为阴性。批内和批间重复性、稳定性良好。检测50份猪粪便样品,与RT-PCR方法的阳性符合率为97.5%(39/40),阴性符合率为100%(10/10),总体符合率为98%(49/50)。检测2022年在河南、山西省猪场收集的临床样品1249份,阳性检出率为5.2%。【结论】本研究制备的PoRV胶体金检测试纸条具有良好的敏感性、特异性和重复性等优点,与RT-PCR方法的符合率较高,可用于规模化猪场PoRV的快速检测。 展开更多

关键词 猪轮状病毒(porv) 胶体金检测试纸条 快速检测

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贵州省仔猪病毒性腹泻病原学调查 被引量：4

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作者 张双翔 胡兴义 +3 位作者 唐宇 冉隆仲 李涛 王慧 《贵州畜牧兽医》 2016年第6期8-10,共3页

为了解贵州省仔猪病毒性腹泻病原流行情况,对2013—2015年贵州省7个市(州)采集的35个规模养猪场316份仔猪腹泻粪便样品进行病原核酸检测。结果显示,各地均存在猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)感染,... 为了解贵州省仔猪病毒性腹泻病原流行情况,对2013—2015年贵州省7个市(州)采集的35个规模养猪场316份仔猪腹泻粪便样品进行病原核酸检测。结果显示,各地均存在猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)感染,PEDV阳性率为62.43%,TGEV阳性率为7.91%,PoRV阳性率为11.76%。不同病原在不同地区呈显著流行趋势,且存在不同程度的混合感染,PEDV与PoRV混合感染率为18.04%,PEDV与TGEV混合感染率为5.06%,TGEV与PoRV混合感染率为3.80%,PEDV、TGEV与PoRV混合感染率为1.90%,近3年主要流行病原为PEDV。为临床防控仔猪病毒性腹泻发生提供了理论依据。 展开更多

关键词 仔猪腹泻 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 病原学调查

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猪轮状病毒疫苗研究进展 被引量：4

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作者 陈少聪 吴允昆 《现代畜牧兽医》 2024年第7期75-79,共5页

猪轮状病毒(PoRV)是导致仔猪患病毒性腹泻的主要病原体之一,可对养猪业造成巨大的经济损失。目前,疫苗接种被认为是防治PoRV感染最有效的手段。为了更好地预防和控制PoRV感染,文章总结了目前用于防控PoRV感染的不同类型疫苗,包括灭活疫... 猪轮状病毒(PoRV)是导致仔猪患病毒性腹泻的主要病原体之一,可对养猪业造成巨大的经济损失。目前,疫苗接种被认为是防治PoRV感染最有效的手段。为了更好地预防和控制PoRV感染,文章总结了目前用于防控PoRV感染的不同类型疫苗,包括灭活疫苗、弱毒疫苗、亚单位疫苗和核酸疫苗,并对其应用研究进展进行了综合评述,通过分析各类疫苗的优缺点以及治疗效果,以期为未来PoRV疫苗的研发提供参考。 展开更多

关键词 猪轮状病毒(porv) 病毒性腹泻 病毒感染 新疫苗研发

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猪病毒性腹泻疫苗研究进展 被引量：3

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作者 岳筠 胡兴义 +3 位作者 唐宇 冉隆仲 李涛 王慧 《贵州畜牧兽医》 2016年第6期23-27,共5页

猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒是当前猪病毒性腹泻的主要病原,临床表现主要为呕吐、水样腹泻、脱水、逐渐消瘦等症状。不同年龄和品种的猪均可感染,严重危害养猪业的健康发展。疫苗接种是防控猪病毒性腹泻的关键措... 猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒是当前猪病毒性腹泻的主要病原,临床表现主要为呕吐、水样腹泻、脱水、逐渐消瘦等症状。不同年龄和品种的猪均可感染,严重危害养猪业的健康发展。疫苗接种是防控猪病毒性腹泻的关键措施之一,但大量临床试验显示抗体阳性率低,免疫效果不佳。文章针对猪病毒性腹泻疫苗的研究进展进行综述,旨在为临床上预防猪病毒性腹泻提供参考。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪轮状病毒 猪传染性胃肠炎病毒 疫苗 研究进展

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