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橡胶树HbMVD1基因启动子克隆及转录调控因子筛选
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作者 文连璇 杨署光 +2 位作者 史敏晶 邓小敏 晁金泉 《热带作物学报》 北大核心 2025年第8期1785-1794,共10页
转录调控是生命活动的重要调控方式之一。天然橡胶是一种重要的工业原材料,主要来源于橡胶树。天然橡胶生物合成的转录调控是近年来橡胶树基础研究领域的热点之一。焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶(MVD)是天然橡胶生物合成途径的关键酶,目前对其... 转录调控是生命活动的重要调控方式之一。天然橡胶是一种重要的工业原材料,主要来源于橡胶树。天然橡胶生物合成的转录调控是近年来橡胶树基础研究领域的热点之一。焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶(MVD)是天然橡胶生物合成途径的关键酶,目前对其转录调控尚不清楚。本研究克隆了长度为1500 bp的橡胶树HbMVD1启动子,序列分析显示其含有茉莉酸响应、乙烯响应、机械伤害响应、光响应、MYC结合等顺式作用元件。自激活抑制梯度试验显示,AbA浓度为100 ng/mL时,pAbAi-pHbMVD1诱饵载体的转录自激活得到有效抑制。利用酵母单杂交技术从橡胶树胶乳酵母cDNA文库共筛选到13个与HbMVD1启动子结合的非冗余蛋白,包括1个WRKY转录因子(HbWRKY1)、1个热激转录因子、1个G-box结合因子。组织特异性分析显示这些蛋白的编码基因在不同组织间存在不同的表达模式。转录调控分析显示HbWRKY1在体内可以激活HbMVD1基因的表达。分子对接发现,HbWRKY1与HbMVD1启动子的机械伤害响应元件结合,并鉴定到11个潜在的氨基酸结合位点。本研究为进一步揭示橡胶树HbMVD1转录调控网络奠定基础。 展开更多
关键词 橡胶树 HbMVD1启动子 酵母单杂交 转录因子 转录调控
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不同杨树SOS1基因启动子的克隆及盐胁迫响应分析
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作者 付博晗 毛华 +3 位作者 赵薪程 陆虹 欧庸彬 姚银安 《生物技术通报》 北大核心 2025年第7期205-213,共9页
【目的】SOS1(salt overly sensitive1)作为定位于质膜上的Na+/H+反向转运蛋白,在植物盐胁迫响应中扮演着关键角色。比较分析杨属(Populus)不同树种的SOS1基因启动子,为理解和应用SOS1基因及其启动子进行抗逆改良奠定基础。【方法】以... 【目的】SOS1(salt overly sensitive1)作为定位于质膜上的Na+/H+反向转运蛋白,在植物盐胁迫响应中扮演着关键角色。比较分析杨属(Populus)不同树种的SOS1基因启动子,为理解和应用SOS1基因及其启动子进行抗逆改良奠定基础。【方法】以杨属不同树种作为试验材料,通过实时定量PCR分析SOS1基因的表达模式,进一步从新疆杨(P.alba)、胡杨(P.euphratica)和俄罗斯杨(P.russkii)中克隆了SOS1基因的启动子片段,与GUS(β-glucuronidase)报告基因连接并转化毛白杨(P.tomentosa)获得转基因植株,利用转基因毛白杨通过GUS组织化学染色和酶活性定量研究了启动子的组织特异性和对盐胁迫的响应。【结果】不同树种中SOS1基因的表达模式差异明显,例如,盐胁迫下在新疆杨茎中SOS1基因上调表达,胡杨变化不显著,俄罗斯杨则下调表达。3个启动子片段均可驱动GUS基因在转基因毛白杨叶、茎、根中表达,具有启动子活性,在茎和根中的活性较高。新疆杨的SOS1启动子在茎的表皮和皮层中有活性,而在韧皮部、形成层、木质部中的活性极低;俄罗斯杨的SOS1启动子则在木质部中活性较高,而在形成层和树皮中活性极低;胡杨的SOS1启动子在各个部位均有活性,尤其是在形成层中活性最高。在盐胁迫条件下,3个启动子的活性均上调。【结论】不同杨树SOS1基因启动子均可响应盐胁迫但具有差异明显的组织特异性。 展开更多
关键词 杨树 SOS1 盐胁迫 启动子
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利用荧光素酶报告基因法研究转录因子USF1结合调控马鹿MicroRNA PC-5p-4811基因启动子机制
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作者 高仰 韩青 +4 位作者 吴玄烨 索婧媛 金庆梅 刘学东 郑冬 《野生动物学报》 北大核心 2025年第1期63-71,共9页
为了探究转录因子上游刺激因子1(USF1)调控马鹿(Cervus elaphus)microRNA PC-5p-4811(miR-4811)基因转录的机理,综合运用核心启动子和转录因子结合位点生物信息学预测分析、基因克隆、点突变和双荧光素酶报告基因法等技术研究USF1结合mi... 为了探究转录因子上游刺激因子1(USF1)调控马鹿(Cervus elaphus)microRNA PC-5p-4811(miR-4811)基因转录的机理,综合运用核心启动子和转录因子结合位点生物信息学预测分析、基因克隆、点突变和双荧光素酶报告基因法等技术研究USF1结合miR-4811启动子分子机制和功能。结果显示:(1)截切突变证实马鹿miR-4811基因的核心启动子位于上游-3174~-2966 bp;(2)转录因子USF1在-3378~+73 bp区域共有2个DNA结合位点(-3046~-3031 bp、-3045~-3018 bp),均位于miR-4811核心启动子内;(3)USF1作为激活因子可直接结合上述位点激活miR-4811核心启动子上调双荧光素酶报告基因转录表达。研究结果揭示了USF1参与调节microRNA基因转录表达的机理,并为后续USF1/miR-4811调节轴参与调控鹿茸再生发育机制提供了重要基础数据。 展开更多
关键词 USF1 马鹿 MicroRNA PC-5p-4811 启动子 转录调控
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白菜型冬油菜BraCTL1基因表达模式及其启动子活性分析
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作者 李宝晶 王小霞 +15 位作者 魏家萍 崔俊美 武泽峰 王晋雄 方彦 董小云 郑国强 撒二梅 朱淑俊 魏鸿燕 杨加悦 李娟 赵国栋 李世昌 曹小东 刘自刚 《中国油料作物学报》 北大核心 2025年第3期592-600,共9页
为探究白菜型冬油菜(Brassica rapa L.)几丁质酶(chitinase-like,CTL)基因与抗寒性的关系,本研究以强抗寒品种陇油7号和弱抗寒品种天油4号的白菜型冬油菜为材料,分离克隆了BraCTL1基因启动子序列,构建BraCTL1基因启动子融合GUS基因载体... 为探究白菜型冬油菜(Brassica rapa L.)几丁质酶(chitinase-like,CTL)基因与抗寒性的关系,本研究以强抗寒品种陇油7号和弱抗寒品种天油4号的白菜型冬油菜为材料,分离克隆了BraCTL1基因启动子序列,构建BraCTL1基因启动子融合GUS基因载体,进行烟草遗传转化,结合PLACA在线软件,分析了BraCTL1启动子顺式调控元件及BraCTL1基因的表达模式。结果表明,低温处理后陇油7号叶片变为墨绿色、叶柄有明显弯曲,而天油4号叶片完全皱缩、边缘有明显的黄化、叶柄完全失去支撑、出现明显冻害形态。低温胁迫后陇油7号幼苗叶片中BraCTL1基因表达显著上升,在-8℃达到峰值,天油4号在-4℃达到最高值;-4℃处理2 h后陇油7号与天油4号叶片中BraCTL1基因表达量显著升高,陇油7号在18 h达最高值,天油4号在24 h达最高值;BraCTL1基因在叶柄中的表达量最高,叶片次之,根中显著低于叶柄和叶片。启动子结构分析表明,BraCTL1启动子区域含有7种不同类型的顺式作用元件,主要包含启动子核心序列,冷胁迫响应元件、光响应元件,激素响应元件、干旱响应元件、厌氧有关元件以及参与MeJA反应相关元件。BraCTL1启动子片段GUS染色结果表明,全长(2000 bp)、W1(1684 bp)、W2(1000 bp)和W3(575 bp)缺失片段均可以正常表达,而-1684 bp~-575 bp位点的5'端片段具有较高的转录活性。 展开更多
关键词 白菜型冬油菜 几丁质酶 启动子 BraCTL1 基因表达
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谷子m^(6)A甲基转移酶基因SiMTA1的启动子序列特征和基因表达模式分析
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作者 沈傲 刘敏 +1 位作者 倪迪安 刘炜 《作物学报》 北大核心 2025年第7期1969-1978,共10页
MTA作为植物m^(6)A甲基转移酶之一,主要参与RNA的甲基化修饰,同时还可与其他酶相互作用,影响胚胎发育,在植物的生长发育中扮演着关键角色。本研究通过拟南芥甲基转移酶序列同源比对,得到谷子SiMTA1基因(accession no. PQ801843),该基因... MTA作为植物m^(6)A甲基转移酶之一,主要参与RNA的甲基化修饰,同时还可与其他酶相互作用,影响胚胎发育,在植物的生长发育中扮演着关键角色。本研究通过拟南芥甲基转移酶序列同源比对,得到谷子SiMTA1基因(accession no. PQ801843),该基因DNA序列全长4239 bp, CDS序列2121 bp,包含706个氨基酸残基。对其核苷酸及蛋白序列进行生物信息学分析、并解析其启动子顺式作用元件,通过qRT-PCR方法对SiMTA1在时空表达和各种胁迫及激素处理下的表达模式进行研究。结果显示, SiMTA1具有MT-A70结构域,即N^(6)-腺苷-甲基转移酶(MTase)的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)结合亚基;二级结构预测显示,SiMTA1主要是由无规则卷曲和α-螺旋组成;SiMTA1启动子包含多种胁迫和植物激素信号应答元件;SiMTA1在孕穗期的茎节部的表达量较高;盐、干旱、生长素、细胞分裂素等均可诱导SiMTA1表达。本研究通过对谷子中甲基转移酶基因SiMTA1启动子特性及其在正常及胁迫条件下时空表达模式的研究发现, SiMTA1可能在谷子发育及胁迫和植物激素响应过程中发挥作用。研究结果为后续谷子耐逆品种的改良及新品种培育提供了理论依据及候选基因资源。 展开更多
关键词 谷子 甲基转移酶SiMTA1 启动子序列特征 胁迫及植物激素响应 时空表达模式
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杂交三倍体泥鳅减数分裂相关基因Dmc1启动子甲基化分析
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作者 马可馨 李逸帆 +5 位作者 杨悦瑶 李川 郭文轩 庄子昕 王伟 周贺 《水产科学》 北大核心 2025年第2期244-253,共10页
为探究减数分裂特异重组酶1(Dmc1)在杂交三倍体泥鳅不育机制的重要作用,本试验克隆了杂交三倍体泥鳅(4n♀×2n♂)Dmc1基因,分析了Dmc1基因的理化性质和系统发育地位。用亚硫酸氢盐测序技术和逆转录PCR技术分析了泥鳅杂交三倍体子代... 为探究减数分裂特异重组酶1(Dmc1)在杂交三倍体泥鳅不育机制的重要作用,本试验克隆了杂交三倍体泥鳅(4n♀×2n♂)Dmc1基因,分析了Dmc1基因的理化性质和系统发育地位。用亚硫酸氢盐测序技术和逆转录PCR技术分析了泥鳅杂交三倍体子代及其亲本性腺组织中Dmc1基因启动子区甲基化发生率和表达量。结果显示,Dmc1基因全长3895bp,开放阅读框为1029bp,编码342个氨基酸,Dmc1蛋白的预测分子质量为37.85ku,理论等电点为6.95。氨基酸多序列比对表明,泥鳅Dmc1氨基酸序列与其他鲤形目鱼类Dmc1氨基酸序列相似性较高,与节肢动物的相似性较低。系统发育进化树结果显示,泥鳅与其他硬骨鱼类Dmc1聚于同一进化支。亚硫酸氢盐测序结果显示,四倍体母本、二倍体父本及三倍体子代Dmc1基因的启动子区域甲基化发生率分别为100%、80.0%及82.2%。三倍体雄性子代Dmc1启动子区甲基化发生率高于二倍体父本,Dmc1基因表达量显著低于二倍体父本;三倍体雌性子代Dmc1启动子区甲基化发生率低于四倍体母本,Dmc1基因表达量显著高于四倍体母本。根据Pearson相关系数分析可知,Dmc1基因启动子区的甲基化发生率与其表达水平呈负相关(r=-0.986,P=0.014)。综上所述,在不同倍性泥鳅中Dmc1基因的表达量受启动子区域甲基化的负调控作用,因此推测Dmc1基因的DNA甲基化发生率与三倍体泥鳅的减数分裂异常及低育性具有一定的相关性。试验结果可为解析杂交三倍体泥鳅不育的分子机制提供理论依据。 展开更多
关键词 泥鳅 杂交三倍体 Dmc1 启动子甲基化
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猪CYP 3A29基因核心启动子鉴定及转录调控分析
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作者 王红 赵为民 +2 位作者 程金花 李惠侠 方晓敏 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1147-1158,共12页
旨在鉴定猪CYP 3A29基因核心启动子及相应的转录调控因子,分析转录因子对CYP 3A29启动子活性的调控。本研究以3头健康的大白母猪(30 kg)为试验材料,利用PCR和Western blot检测CYP 3A29基因在猪各组织(心、肝、脾、肺、肾、小肠、肌肉)... 旨在鉴定猪CYP 3A29基因核心启动子及相应的转录调控因子,分析转录因子对CYP 3A29启动子活性的调控。本研究以3头健康的大白母猪(30 kg)为试验材料,利用PCR和Western blot检测CYP 3A29基因在猪各组织(心、肝、脾、肺、肾、小肠、肌肉)中的表达分布;构建不同片段长度的CYP 3A29基因启动子双荧光素酶报告载体,转染293T和AML12细胞系,检测荧光素酶活性,确定CYP 3A29基因的核心启动子区域;利用Animal TFDB网站分析CYP 3A29核心启动子区域可能存在的转录调控因子,针对核心启动子区域构建分段缺失双荧光素酶报告载体,检测荧光素酶活性大小,确定转录因子结合位点;构建转录因子结合突变位点的双荧光素酶报告载体和转录因子shRNA载体,探讨转录因子对CYP 3A29核心启动子的调控作用。结果显示,CYP 3A29基因在猪肝脏中表达量最高;CYP 3A29启动子4个不同检测区域(-2026~+62 bp、-1526~+62 bp、-1026~+62 bp和-528~+62 bp)中-528~+62 bp活性最高,为CYP 3A29核心启动子区;CYP 3A29启动子-528~-448 bp区域负向调控核心启动子活性,且含有潜在的转录因子RUNX 1结合位点;突变RUNX 1结合位点可显著降低-528~+62 bp启动子的荧光素酶活性,而干扰RUNX 1基因则显著升高-528~+62 bp野生型启动子的荧光素酶活性,但对-528~+62 bp突变型启动子的荧光素酶活性无显著影响,提示RUNX 1转录因子可负向调控CYP 3A29基因核心启动子活性。本研究结果为进一步解析猪CYP 3A29基因的转录调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪 CYP 3A29 核心启动子 RUNX 1 转录调控
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小黑杨PnsICE1基因启动子克隆及瞬时表达分析 被引量：3
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作者 王艳敏 白卉 +1 位作者 于文喜 邢亚娟 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期77-83,共7页
ICE1基因是能够编码类似MYC的b HLH转录因子,在低温条件下能够特定地结合CBF3启动子中的MYC作用元件,继而诱导CBF3调控的下游基因的表达,在植物逆境胁迫应答中具有重要的功能。本研究通过PCR扩增技术从小黑杨(Populus simonii×P.ni... ICE1基因是能够编码类似MYC的b HLH转录因子,在低温条件下能够特定地结合CBF3启动子中的MYC作用元件,继而诱导CBF3调控的下游基因的表达,在植物逆境胁迫应答中具有重要的功能。本研究通过PCR扩增技术从小黑杨(Populus simonii×P.nigra)基因组DNA中克隆得到1 247 bp ICE1基因启动子序列,在线预测分析发现,该段序列中含有典型的真核生物核心启动子区域,除了包含多个TATA-box、CAAT-box等基本顺式作用元件外,还存在其它反应元件,如ABRE、DOFCOREZM、MYBCORE、W-box和MYCCONSENSUSATHSE等,这些元件有的与赤霉素、脱落酸等激素相关,有些与逆境胁迫诱导相关,这表明Pns ICE1基因启动子可能与逆境胁迫相关,在小黑杨抵御逆境胁迫的生理过程中具有重要功能。将克隆得到的Pns ICE1启动子取代p BI121中的Ca MV35S启动子,构建植物表达载体p BI121-ICEPro,由Pns ICE1启动子驱动报告基因gus表达,并用农杆菌介导的瞬时侵染法转化拟南芥。对瞬时侵染后的拟南芥进行GUS染色分析。结果表明,在Pns ICE1启动子的驱动下,报告基因gus在花及根部中特异表达,Pns ICE1启动子具有启动活性。 展开更多
关键词 小黑杨 pnsice1启动子 顺式调控元件 逆境胁迫
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葡萄VvCCD1b基因克隆及与其启动子互作的转录因子筛选 被引量：1
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作者 陈一恒 李少楠 +4 位作者 董天宇 唐美玲 唐雯 卢素文 房经贵 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期2215-2224,共10页
【目的】筛选葡萄类胡萝卜素裂解双加氧酶(CCD)基因VvCCD1b启动子互作的转录因子,挖掘参与调控葡萄类胡萝卜素代谢的潜在因子,为深入探究葡萄类胡萝卜素的代谢调控网络提供理论参考。【方法】克隆VvCCD1b基因的cDNA及其启动子序列,利用... 【目的】筛选葡萄类胡萝卜素裂解双加氧酶(CCD)基因VvCCD1b启动子互作的转录因子,挖掘参与调控葡萄类胡萝卜素代谢的潜在因子,为深入探究葡萄类胡萝卜素的代谢调控网络提供理论参考。【方法】克隆VvCCD1b基因的cDNA及其启动子序列,利用生物信息学软件对VvCCD1b基因的染色体位置、启动子顺式作用元件及其编码蛋白的理化性质、保守结构域等进行预测分析。基于转录组数据分析不同葡萄品种及不同处理下葡萄CCD家族成员表达模式。通过酵母单杂交技术筛选与VvCCD1b基因启动子互作的转录因子,并进行点对点验证。【结果】通过PCR克隆获得VvCCD1b基因序列全长1641 bp,位于13号染色体上,编码546个氨基酸残基,为亲水性蛋白,二级结构由α-螺旋(16.67%)、β-折叠(5.49%)、延伸链(24.54%)和无规则卷曲(53.30%)构成,具有RPE65保守结构域。VvCCD1b基因启动子含有光响应元件(G-box、3-AF1 binding site、GATA-motif、TCT-motif)、水杨酸(SA)响应元件(SARE)、脱落酸(ABA)响应元件(ABRE)及AP2/ERF、WRKY、MADS-box转录因子结合元件。VvCCD1b基因表达水平随果实发育逐渐升高且受光照与逆境胁迫的影响。以VvCCD1b基因启动子为诱饵,初步筛选出VvRAP2-4、VvWRKY4、VvBHLH137转录因子及葡萄液泡加工酶、葡萄糖苷酶等18个功能蛋白,其中VvRAP2-4、VvWRKY4转录因子与VvCCD1b基因启动子间存在互作。【结论】VvCCD1b为亲水性蛋白,基因表达水平随果实发育逐渐升高,且受到干旱、高温、水涝胁迫和光照的影响。通过酵母单杂交技术筛选出与VvCCD1b启动子互作的候选转录因子。 展开更多
关键词 葡萄 VvCCD1b基因 启动子 酵母单杂交 转录因子
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山羊NPC1基因核心启动子鉴定与转录调控分析
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作者 李崇瑞 陈思 +7 位作者 翟哲 王雪梅 吴艳茹 刘志勇 蒋俊明 满初日嘎 杜丽 王凤阳 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期154-163,共10页
NPC1基因编码的C型尼曼匹克蛋白1(NPC1)参与脂筏形成、病原微生物内吞以及内吞体的胞内转运等过程。本试验旨在阐明海南黑山羊NPC1基因的转录调控机制,为研究病原微生物与宿主细胞互作提供理论参考。首先,以山羊NPC1基因1466 bp启动子... NPC1基因编码的C型尼曼匹克蛋白1(NPC1)参与脂筏形成、病原微生物内吞以及内吞体的胞内转运等过程。本试验旨在阐明海南黑山羊NPC1基因的转录调控机制,为研究病原微生物与宿主细胞互作提供理论参考。首先,以山羊NPC1基因1466 bp启动子序列为模板,构建9个启动子5'端连续缺失的双荧光素酶报告载体,筛选NPC1基因核心启动子区;继而对核心启动子区的关键转录因子进行预测分析,构建转录因子结合位点缺失的双荧光素酶报告载体,筛选NPC1基因的关键转录因子结合位点。结果表明:山羊NPC1基因的核心启动子区位于转录起始位点上游-195 bp至-60 bp,并且该区域存在E2F3(-134/-120 bp)、SREBP-1(-107/-96 bp)、SP1(-68/-62 bp)等多个转录因子结合位点。双荧光素酶报告实验结果表明,缺失E2F3、SREBP-1、SP1三个转录因子结合位点均会使山羊NPC1基因启动子的转录活性显著下降(P<0.01),且缺失SREBP-1结合位点后NPC1基因转录活性下降最显著。提示,SREBP-1转录因子对海南黑山羊NPC1基因转录活性具有重要的调控作用。本试验成功鉴定山羊NPC1基因的核心启动子区(-195/-60 bp)及该区域的关键转录因子结合位点SREBP-1,为进一步研究山羊NPC1基因介导病原微生物与宿主互作分子机制提供理论基础。 展开更多
关键词 海南黑山羊 NPC1基因 转录调控 核心启动子 SREBP-1
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在不同养殖背景下鳜mc1r组织表达差异和启动子转录调控分析
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作者 贾晓丹 梁旭方 何珊 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期149-156,共8页
为探究鳜(Siniperca chuatsi)黑素皮质素1受体基因mc1r在不同养殖背景下的组织表达差异及转录调控机制,研究以在黑白养殖背景下产生的深、浅色体表鳜为研究对象,通过实时荧光定量PCR测定mc1r基因的组织表达差异;其次以鳜基因组DNA为模板... 为探究鳜(Siniperca chuatsi)黑素皮质素1受体基因mc1r在不同养殖背景下的组织表达差异及转录调控机制,研究以在黑白养殖背景下产生的深、浅色体表鳜为研究对象,通过实时荧光定量PCR测定mc1r基因的组织表达差异;其次以鳜基因组DNA为模板,通过PCR扩增mc1r基因5′侧翼区不同长度的缺失片段并克隆至pGL3-Basic载体,之后将重组质粒转染到HEK 293T细胞,检测双荧光素酶的相对活性并预测其存在潜在的转录因子。结果显示,黑色背景养殖所产生的深色体表鳜与野生型更为相似;RT-qPCR检测显示深色体表鳜mc1r在背部皮肤和腹部皮肤表达量最高,而浅色体表鳜脑中表达量最高;双荧光素酶活性检测发现,构建的5个缺失片段启动子活性之间存在显著差异,且−159∽−+292启动子活性最高,推测其为mc1r核心启动子区域,并且通过在线软件预测出存在MITF、SP1等转录因子。研究克隆了鳜mc1r基因启动子区域并进行了转录活性分析,并且对潜在的转录因子进行了预测,为鱼类mc1r基因分子机制表达调控及表皮颜色可控性研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 MC1R 组织表达 启动子活性 转录因子 鳜
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FOXM1c调控选择性自噬接头蛋白p62启动子活性的研究
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作者 顾超 杨家龙 +1 位作者 舒超 徐芳 《塔里木大学学报》 2024年第4期98-104,共7页
为研究转录因子FOXM1c对自噬相关蛋白p62启动子活性的影响。通过生物信息学软件预测转录因子FOXM1c和p 62基因启动子的结合位点,合成p 62基因野生型的启动子片段和突变型p 62基因DNA片段,并分别构建含有p 62野生型和突变型启动子片段的... 为研究转录因子FOXM1c对自噬相关蛋白p62启动子活性的影响。通过生物信息学软件预测转录因子FOXM1c和p 62基因启动子的结合位点,合成p 62基因野生型的启动子片段和突变型p 62基因DNA片段,并分别构建含有p 62野生型和突变型启动子片段的荧光素酶报告基因载体;构建pcDNA3.1-FOXM1c-EGFP表达载体;用双荧光素酶报告基因检测系统分析FOXM1c对野生型和突变型p 62基因启动子转录活性的影响。结果表明,构建的野生型和突变型的p 62启动子均具有转录活性,转录因子FOXM1c与野生型的p 62基因启动子存在负调控作用,突变后这种相互作用消失。 展开更多
关键词 FOXM1c P62 启动子 细胞自噬
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不同启动子调控的DREB1A基因对黄瓜的遗传转化 被引量：12
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作者 纪巍 李杰 +3 位作者 朱延明 柏锡 代翠红 侯爱菊 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第4期442-447,共6页
以黄瓜(CucumissativusL.)主栽品种长春密刺的子叶节为受体材料,采用农杆菌介导法,将分别由诱导型启动子rd29A和组成型启动子35S调控的转录因子DREB1A基因导入黄瓜,获得大量PCR阳性植株。统计结果表明:诱导型启动子rd29A调控的DREB1A基... 以黄瓜(CucumissativusL.)主栽品种长春密刺的子叶节为受体材料,采用农杆菌介导法,将分别由诱导型启动子rd29A和组成型启动子35S调控的转录因子DREB1A基因导入黄瓜,获得大量PCR阳性植株。统计结果表明:诱导型启动子rd29A调控的DREB1A基因抗性芽率和再生植株PCR阳性率明显高于组成型启动子35S。 展开更多
关键词 黄瓜 DREB1A基因 启动子 遗传转化
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甘蔗ScMOC1基因启动子的克隆与瞬时表达分析 被引量：10
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作者 李旭娟 林秀琴 +7 位作者 字秋艳 李纯佳 徐超华 吴转娣 朱建荣 刘洪博 方志存 刘新龙 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期709-717,共9页
MOC1属于植物特有的GRAS家族蛋白基因,是调控植物腋芽形成发育的关键基因。启动子对基因转录效率起直接调控作用,其功能分析可以精确定位基因的表达部位、发育阶段和调控机制,克隆甘蔗腋芽形成发育关键基因ScMOC1的启动子序列,研究其功... MOC1属于植物特有的GRAS家族蛋白基因,是调控植物腋芽形成发育的关键基因。启动子对基因转录效率起直接调控作用,其功能分析可以精确定位基因的表达部位、发育阶段和调控机制,克隆甘蔗腋芽形成发育关键基因ScMOC1的启动子序列,研究其功能对该基因表达调控机制具有重要意义。本研究以我国主栽甘蔗品种新台糖22号(ROC22)的基因组DNA为模板,通过基因组步移和巢式PCR技术克隆到ScMOC1起始密码子ATG上游1874 bp的启动子序列。PlantCARE在线分析预测表明,该序列包含多个真核生物启动子必需的核心元件TATA-box、CAAT-box以及与光响应、激素响应和分生组织表达等相关的顺式作用元件,推测ScMOC1启动子可通过激素诱导调控ScMOC1表达,且该启动子可能通过分生组织表达顺式调控元件CAT-box参与ScMOC1对甘蔗分蘖的调控。将获得的启动子序列替换pBI121质粒中的CaMV35S启动子驱动下游GUS基因表达进行活性分析,结果表明:本研究克隆的启动子片段能驱动GUS基因在甘蔗嫩叶中瞬时表达。5′缺失分析表明该启动子的基础启动子序列在起始密码子ATG上游350～500 bp之间。该结果为后续ScMOC1的调控机制研究奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 甘蔗 ScMOC1启动子 克隆 瞬时表达分析
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TNF-α拮抗胰岛素样生长因子-1对人α1(Ⅰ)胶原启动子的激活 被引量：9
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作者 伍严安 李德岩 +3 位作者 高春芳 万伟东 仲人前 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期715-717,共3页
目的 :探讨 TNF-α对胰岛素样生长因子 - 1(IGF- 1)激活人α1( )胶原启动子的作用。 方法 :构建含不同长短α1( )胶原启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的重组体 p COL H1 0 .2 7,p COL H1 2 .5 ;用脂质体法瞬时转染至NIH3T... 目的 :探讨 TNF-α对胰岛素样生长因子 - 1(IGF- 1)激活人α1( )胶原启动子的作用。 方法 :构建含不同长短α1( )胶原启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的重组体 p COL H1 0 .2 7,p COL H1 2 .5 ;用脂质体法瞬时转染至NIH3T3细胞和人皮肤成纤维细胞中 ,加入 IGF- 1或 (和 ) TNF-α,测定 CAT活性。 结果 :10 0 ng/ m l IGF- 1可使转染至NIH3T3细胞的 p COL H1 0 .2 7和 p COL H1 2 .5表达的 CAT活性分别增高至对照的 (5 .4± 0 .2 5 )倍与 (5 .8± 0 .3)倍 ,使转染至人皮肤成纤维细胞的这两个重组体表达的活性分别增高至对照的 (4 .5± 0 .2 2 )倍与 (4 .9± 0 .2 )倍。而 TNF-α能抑制 IGF- 1诱导的 p COL H1 2 .5活性。 结论 :TNF- α在转录启动水平抑制 IGF- 1对人 α1( )胶原基因表达的促进作用。 展开更多
关键词 器官纤维化 TNF-Α IGF-1 α1(Ⅰ)胶原启动子
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人α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性研究 被引量：18
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作者 王皓 高春芳 +3 位作者 万伟东 伍严安 赵文静 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期711-714,共4页
目的 :探索器官纤维化形成中调控 型胶原基因高水平转录的启动片段。方法 :从人α1( )胶原基因转录起始点上游 - 2 .5 kb～ + 42 bp的片段中 ,取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的质粒组成 6个重组体 ,... 目的 :探索器官纤维化形成中调控 型胶原基因高水平转录的启动片段。方法 :从人α1( )胶原基因转录起始点上游 - 2 .5 kb～ + 42 bp的片段中 ,取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的质粒组成 6个重组体 ,脂质体法转染上述重组体至正常人原代培养皮肤成纤维细胞 ,CAT- EL ISA测定细胞 CAT表达水平以比较各重组体的启动子活性。结果 :- 2 483～ + 42 bp,- 2 6 8～ + 42 bp序列具有强启动 CAT表达活性 ,而 - 10 5～ + 42 bp片段启动CAT活性最低。结论 :人α1( )胶原基因 - 2 483～ + 42 bp,- 2 6 8～ + 42 bp片段有高启动活性 ,是进一步研究纤维化相关DNA结合蛋白的重要调控靶序列。 展开更多
关键词 启动子 器官纤维化 α1(Ⅰ)胶原基因 基因转录
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人β1整合素近端和远端启动子报告基因载体的构建和鉴定及启动活性分析 被引量：9
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作者 陈卫 苏踊跃 +3 位作者 梁光萍 陈建 张曼辉 罗向东 《医学研究生学报》 CAS 2007年第2期135-137,141,共4页
目的:克隆整合素β1近端启动子和远端启动子基因序列,构建并鉴定整合素β1启动子调控的荧光素酶报告基因载体pGL3-261和pGL3-1442。方法:以本室构建的含整合素β1全长启动子基因序列(1756 bp)的重组载体pGL3-β1为模板,用含有酶切位点... 目的:克隆整合素β1近端启动子和远端启动子基因序列,构建并鉴定整合素β1启动子调控的荧光素酶报告基因载体pGL3-261和pGL3-1442。方法:以本室构建的含整合素β1全长启动子基因序列(1756 bp)的重组载体pGL3-β1为模板,用含有酶切位点的特异性引物扩增出整合素β1近端和远端启动子基因序列,克隆至荧光素酶表达载体pGL3-basic,构建含正确目的基因的表达载体pGL3-261和pGL3-1442,经NheⅠ、XhoⅠ酶切、聚合酶链式反应(PCR)扩增及测序鉴定;并用pGL3-261和pGL3-1442质粒与pGL3-β1质粒同时转染人表皮细胞株HaCaT进行活性分析。结果:酶切及序列测定表明,克隆获得的近端启动子261bp和远端启动子1442bp与GenBank DNA序列数据库对比分析序列一致,且插入方向正确;此三种质粒都有明显的启动子活性,远端启动子活性与全长启动子活性无显著差异,但明显高于近端启动子活性。结论:成功构建了整合素β1近端和远端启动子基因序列荧光素酶报告基因载体,整合素β1远端启动子在HaCaT细胞中起主要作用。为下一步研究人整合素β1启动子核心区、基因表达调控机制及其信号转导通路等奠定基础。 展开更多
关键词 整合素Β1 远端启动子 近端启动子 载体
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猪DKK1基因启动子区的克隆及其活性分析 被引量：10
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作者 胡慧艳 贾青 +6 位作者 侯胜奎 刘津 赵思思 张伟峰 张军 张建亭 边慧敏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1150-1157,共8页
旨在初步探索DKK1基因转录调控机制,本研究利用启动子在线预测软件分析了该基因启动子区序列特征,根据Ensembl数据库已公布的猪DKK1基因的5′侧翼区序列,设计特异性PCR引物进行扩增、测序,进而构建启动子区不同缺失片段的pGL3-DKK1双荧... 旨在初步探索DKK1基因转录调控机制,本研究利用启动子在线预测软件分析了该基因启动子区序列特征,根据Ensembl数据库已公布的猪DKK1基因的5′侧翼区序列,设计特异性PCR引物进行扩增、测序,进而构建启动子区不同缺失片段的pGL3-DKK1双荧光素酶表达载体,分别转染293T细胞和Hela细胞,并进行双荧光素酶报告基因检测。结果显示,DKK1基因启动子中含有1个TATA-box、多种转录因子和1个CpG岛;DKK1基因启动子对239T细胞具有偏好性,其中p-1 679/+292bp启动子片段活性最高,且显著高于其他缺失片段(P<0.01)。-953^-1 679bp为核心启动子区域,-586^-953bp区域可能存在负调控元件,在-953^-1 679bp区域可能存在正调控元件。本试验通过对DKK1基因进行生物信息学分析并结合不同长度启动子片段双报告基因活性检测,证实了DKK1基因的5′侧翼区序列具有启动子转录活性,并初步确定了该基因的启动子区域,找到了启动子的核心区域和主要调控区域,为进一步研究DKK1基因转录调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 DKK1基因 启动子 荧光素酶活性 报告基因
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人Six1基因缺失突变体对上皮钙黏素(E-cadherin)启动子活性的影响 被引量：8
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作者 洪甜 李玲 +6 位作者 李文超 郭靖 梁迎春 纪贝贝 梅国徽 徐小洁 叶棋浓 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期224-227,共4页
Sine oculis homeobox homolog（Six）基因为同源盒基因,最早发现于果蝇,是一种在多种生物中均有表达且高度保守的转录因子,不仅参与调控胚胎的正常发育和器官形成,还参与多种肿瘤的发生发展。胃癌细胞Six1高表达增加胃癌细胞的侵袭能... Sine oculis homeobox homolog（Six）基因为同源盒基因,最早发现于果蝇,是一种在多种生物中均有表达且高度保守的转录因子,不仅参与调控胚胎的正常发育和器官形成,还参与多种肿瘤的发生发展。胃癌细胞Six1高表达增加胃癌细胞的侵袭能力。在胰腺癌细胞中,Six1能够通过上调细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的表达促进胰腺癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 Six1 E-CADHERIN 上皮间质转化 重组质粒 启动子
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不同启动子表达Cry1Ie蛋白的特性分析 被引量：5
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作者 张春鸽 赵灿 +4 位作者 束长龙 孙冰 宋福平 高继国 张杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期192-196,共5页
苏云金芽胞杆菌启动子P1Ac与T7启动子表达的Cry1Ie蛋白对鳞翅目害虫小菜蛾(Plutella xylostella)幼虫的杀虫活性有较大差异。P1Ac启动子表达的Cry1Ie蛋白LC50为1.73μg/mL,T7启动子表达的Cry1Ie蛋白LC50为18.18μg/mL,后者是前者的10.5... 苏云金芽胞杆菌启动子P1Ac与T7启动子表达的Cry1Ie蛋白对鳞翅目害虫小菜蛾(Plutella xylostella)幼虫的杀虫活性有较大差异。P1Ac启动子表达的Cry1Ie蛋白LC50为1.73μg/mL,T7启动子表达的Cry1Ie蛋白LC50为18.18μg/mL,后者是前者的10.5倍。主要从形态、碱溶性及抗胰蛋白酶稳定性等方面对其进行了初步的探索。结果显示,两者在形态上无显著差异,均有相对较为规则的颗粒存在;在碱溶性方面无显著差异,均有约20.0%的包涵体能溶解于pH10.5 50.0 mmol/L Na2CO3的溶液;在对抗胰蛋白酶的稳定性方面无明显差异,由此说明这三方面都不是二者活性差异的原因,推测是T7启动子表达的Cry1Ie蛋白折叠不正确导致其活性较差。 展开更多
关键词 cry1Ac基因启动子P1Ac T7启动子 大肠杆菌 Cry1Ie蛋白 表达
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