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农杆菌介导pta和sb 401基因共转化水稻的研究(英文) 被引量:3
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作者 起登凤 邹良平 +3 位作者 李平 王世全 李双成 尹福强 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期79-82,共4页
利用农杆菌介导法,将半夏凝集素(pta)基因和高赖氨酸蛋白(sb401)基因导入水稻中,经潮霉素抗性筛选,得到70株独立再生植株。通过PCR检测,从中筛选出18株转基因植株。对这些转基因植株当代进行Southern blotting分析表明:pta基因和sb... 利用农杆菌介导法,将半夏凝集素(pta)基因和高赖氨酸蛋白(sb401)基因导入水稻中,经潮霉素抗性筛选,得到70株独立再生植株。通过PCR检测,从中筛选出18株转基因植株。对这些转基因植株当代进行Southern blotting分析表明:pta基因和sb401基因已经共转化并整和到受体基因组中。对转基因植株后代的叶片进行RT-PCR分析表明:pta基因在转录水平上得到了有效的表达。测定10株T0转基因植株成熟种子的赖氨酸和总蛋白质量分数表明,与对照相比,赖氨酸和总蛋白的提高率分别为8.48%~35.34%和4.55%~32.74%,表明sb401基因在大部分转基因植株成熟种子中的蛋白质水平上得到了比较有效的表达。 展开更多
关键词 半夏凝集素基因 高赖氨酸蛋白基因 赖氨酸含量
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半夏凝集素基因克隆及其对桃蚜的抗性研究 被引量:11
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作者 吴志明 董文琦 +4 位作者 党志红 潘文亮 谢晓亮 温春秀 陈劲枫 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期45-50,共6页
研究了半夏凝集素(Pinellia ternataagglutinin,PTA)基因对桃蚜(Myzus persicae)的抗性。从半夏幼叶中提取总RNA,采用RT-PCR法分离克隆出PTA1基因cDNA片段,该基因在GenBank中登录号为DQ092435。序列分析表明:该cDNA片段全长为810bp,编码... 研究了半夏凝集素(Pinellia ternataagglutinin,PTA)基因对桃蚜(Myzus persicae)的抗性。从半夏幼叶中提取总RNA,采用RT-PCR法分离克隆出PTA1基因cDNA片段,该基因在GenBank中登录号为DQ092435。序列分析表明:该cDNA片段全长为810bp,编码269个氨基酸组成的蛋白,具有单子叶植物甘露糖凝集素基因家族的特征,含有3个由4个氨基酸(QDNY)组成的甘露糖专一结合位点,与报道的天南星科凝集素基因氨基酸序列的同源性在72.7%~92.9%。构建了35S启动子控制下的PTA1基因的植物表达载体pBI121PTA1,该载体含有抗卡那霉素的选择标记基因(nptⅡ),利用根癌农杆菌介导法转化烟草获得抗卡那霉素的植株。PCR和半定量RT-PCR分析表明:PTA1基因已经整合到植物基因组中并在转录水平上得到了有效表达。抗蚜虫鉴定表明:转基因植株有效地抑制了蚜虫的群体增长率,平均抑制率达77.02%,表明该基因对同翅目害虫的抗虫基因工程有重要的应用价值。 展开更多
关键词 半夏凝集素 基因克隆 转基因烟草 抗性 桃蚜
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半夏凝集素基因的克隆及转基因烟草对蚜虫的抑制作用 被引量:8
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作者 张正英 令利军 +2 位作者 王红梅 李淑洁 李静雯 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期21-25,共5页
采用同源序列克隆方法,通过设计特异性引物从甘肃西和半夏叶片基因组DNA中克隆到1条1069bp的半夏凝集素基因pta,与以同科内植物的mRNA为模板扩增得到的凝集素基因序列的同源性很高,达到98%以上,功能区完整,具有1条信号肽和3个甘... 采用同源序列克隆方法,通过设计特异性引物从甘肃西和半夏叶片基因组DNA中克隆到1条1069bp的半夏凝集素基因pta,与以同科内植物的mRNA为模板扩增得到的凝集素基因序列的同源性很高,达到98%以上,功能区完整,具有1条信号肽和3个甘露糖结合区,GenBank登录号AY725425。用该基因替换pBI121载体的GUS基因,正向插入35S启动子之下,构建了植物表达载体pBI—pta。通过农杆菌介导法转化烟草,从20株Kan抗性植株中得到PCR检测阳性植株14株,证明pta已整合到烟草基因组中。对随机挑取的7株PCR阳性植株进行了抗蚜虫(Myzus persicae)筛选试验,结果表明:不同株系蚜口密度抑制率在22.5%~89.4%,平均蚜口密度抑制率56.2%。 展开更多
关键词 同源克隆 半夏凝集素基因(pta) 表达载体构建 蚜虫抗性
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半夏凝集素基因在水稻中的转化及筛选 被引量:3
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作者 崔彦芹 李尚伟 +3 位作者 张丽萍 杜娟 李云峰 查仁明 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期1419-1422,共4页
为了获得转基因抗虫水稻,将半夏凝集素基因pta导入水稻,并进行鉴定和筛选。在抗虫基因pta的5'端加2×35S启动子,两端分别添加HindⅢ和Spe I酶切位点,并进行人工合成。将pta与植物表达载体p1301连接,经双酶切和测序鉴定。结果表... 为了获得转基因抗虫水稻,将半夏凝集素基因pta导入水稻,并进行鉴定和筛选。在抗虫基因pta的5'端加2×35S启动子,两端分别添加HindⅢ和Spe I酶切位点,并进行人工合成。将pta与植物表达载体p1301连接,经双酶切和测序鉴定。结果表明:重组表达载体p1301-pta构建成功;载体p1301-pta转化农杆菌LBA4404后用浸染法将pta基因导入水稻恢复系辐恢838中,对转化再生植株进行GUS染色以及GUS和pta基因的PCR鉴定后,共得到16株转基因阳性植株。 展开更多
关键词 半夏凝集素基因 水稻 表达载体构建 转基因植株
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