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题名合浦珠母贝碱性磷酸酶的分离纯化与性质研究
被引量：25
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作者
谢莉萍
林静瑜
肖锐
张荣庆
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机构
清华大学生物科学与技术系
厦门大学生物学系
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出处
《海洋科学》
CAS
CSCD
北大核心
2000年第10期37-40,共4页
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基金
国家海洋"863"资助项目!819 02 03
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文摘
以合浦珠母贝 (Pinctadafucata)为提取酶的原料 ,经Tris HCl缓冲液 (pH7.5)抽提 ,正丁醇处理 ,硫酸铵分级沉淀分离 ,DEAE 纤维素离子交换树脂柱层析 ,DEAE A25离子交换分子筛柱层析纯化 ,得到一定纯度的碱性磷酸酶 ,比活力达到1444U/mg。酶学性质和动力学性质研究表明 ,该酶催化对硝基苯磷酸 (pNPP)的水解反应 ,最适 pH值为9.72,最适温度为45℃ ,水解反应的活化能为Ka=21.4kJ/mol,初速度为6.1μmol/L,米氏常数Km 值为2.86mmol/L,Vm 值为9.09μmol/L。产物类似物HPO2 - 4,WO3 - 4 对该酶均有明显的抑制作用 ,表现为竞争性抑制。金属离子对该酶的催化活力有不同的影响 ,正一价金属离子对该酶活性无影响 ,Mg2 +,Co2 +,Mn2 +对该酶有激活作用 ,Zn2 +对该酶有明显的抑制作用。
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关键词
合浦珠母贝
碱性磷酸酶
酶活性
分离
人工育珠
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Keywords
pinctada fucata, alkaline phosphatase (alp), enzyme activity
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分类号
Q550.3
[生物学—生物化学]
S968.316.1
[农业科学—水产养殖]
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题名SDS变性剂对杂色鲍碱性磷酸酶的活力与构象的影响
被引量：3
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作者
洪燕飞
廖金花
吴国欣
陈清西
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机构
厦门大学生命科学学院教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室
福建师范大学生物工程学院
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出处
《台湾海峡》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期140-144,共5页
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基金
教育部跨世纪人才经费和细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室开放基金资助项目(2004105)
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文摘
以十二烷基磺酸钠(SDS)为变性剂,研究其对杂色鲍碱性磷酸酶(ALP)活力的影响,结果表明酶的剩余活力随着SDS浓度增高而下降,但当下降到67%时,随着SDS浓度增高,酶活力几乎不再发生明显变化.这说明杂色鲍ALP对SDS具有高度的耐受性.研究SDS对杂色鲍ALP的pH稳定性的影响,发现该酶的pH稳定性区域由5.9～10.0区域漂移到7.6～10.6区域,显示酶的pH稳定性往碱性区域偏移.进一步以荧光和紫外光谱为监测手段,研究杂色鲍ALP经SDS微扰后的分子构象变化情况.其结果表明随着SDS浓度增高,荧光发射强度逐渐发生变化,但发射峰未发生明显变化;紫外吸收强度发生变化,但吸收峰也未发生明显变化.这说明该酶活性中心对SDS变性剂并不敏感.这在以往文献中未见过报道.
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关键词
碱性磷酸酶
SDS
杂色鲍
变性剂
十二烷基磺酸钠
pH稳定性
浓度增高
发生变化
稳定性区域
酶活性中心
alp
监测手段
紫外光谱
变化情况
分子构象
发射强度
吸收强度
耐受性
酶活力
吸收峰
下降
荧光
微扰
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Keywords
marine biology
alkaline phosphatase(alp)
experimental study
Haliotis diversicolor
enzyme activity
sodium dodecyl sulfate(SDS)
conformation
denaturant
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分类号
O647.2
[理学—物理化学]
Q55
[生物学—生物化学]
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