核糖体循环因子在蛋白质合成体系中发挥着重要作用,利用电子克隆和RT-PCR技术,从花生中克隆到1个核糖体循环因子基因,命名为AhRRF(Genbank登录号KF621303)。序列分析表明,该基因开放阅读框为837 bp,编码278个氨基酸,推测编码蛋白质的分...核糖体循环因子在蛋白质合成体系中发挥着重要作用,利用电子克隆和RT-PCR技术,从花生中克隆到1个核糖体循环因子基因,命名为AhRRF(Genbank登录号KF621303)。序列分析表明,该基因开放阅读框为837 bp,编码278个氨基酸,推测编码蛋白质的分子量为30.94 k D,等电点为9.63,无信号肽序列,AhRRF编码蛋白包含4个α-螺旋、6个β-折叠和一些无规则卷曲结构。系统发生分析结果表明,AhRRF编码蛋白与蒺藜苜蓿、鹰嘴豆、大豆和菜豆的核糖体循环因子具有较高的同源性。实时荧光定量PCR结果显示,AhRRF基因在花生的叶、花、根和幼果中均有表达,但叶中表达量最高,花中最低;UV-B辐射处理1 h时叶中的表达量显著上升,为对照的3.43倍,之后开始下降,24 h时显著低于对照。将构建的重组质粒p ET28a-AhRRF转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白RRF的表达,SDS-PAGE检测表明,重组蛋白的分子量大小约为30 k D,其大小与推测的大小一致。本研究为进一步探索UV-B辐射对花生分子机理的影响奠定基础。展开更多
文摘核糖体循环因子在蛋白质合成体系中发挥着重要作用,利用电子克隆和RT-PCR技术,从花生中克隆到1个核糖体循环因子基因,命名为AhRRF(Genbank登录号KF621303)。序列分析表明,该基因开放阅读框为837 bp,编码278个氨基酸,推测编码蛋白质的分子量为30.94 k D,等电点为9.63,无信号肽序列,AhRRF编码蛋白包含4个α-螺旋、6个β-折叠和一些无规则卷曲结构。系统发生分析结果表明,AhRRF编码蛋白与蒺藜苜蓿、鹰嘴豆、大豆和菜豆的核糖体循环因子具有较高的同源性。实时荧光定量PCR结果显示,AhRRF基因在花生的叶、花、根和幼果中均有表达,但叶中表达量最高,花中最低;UV-B辐射处理1 h时叶中的表达量显著上升,为对照的3.43倍,之后开始下降,24 h时显著低于对照。将构建的重组质粒p ET28a-AhRRF转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白RRF的表达,SDS-PAGE检测表明,重组蛋白的分子量大小约为30 k D,其大小与推测的大小一致。本研究为进一步探索UV-B辐射对花生分子机理的影响奠定基础。
