枇杷鲨烯合酶(Squalene synthase)基因的克隆及序列分析 被引量：2

1

作者 李惠华 刘小英 +2 位作者 王伟 常强 苏明华 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期1090-1094,共5页

鲨烯合酶（SQS）是枇杷三萜酸生物合成过程中的关键酶。以枇杷（Eriobotrya iaponicn L．）悬浮培养细胞为材料，采用RT—PCR和RACE方法分离得到枇杷鲨烯合酶Ej-SQS（Squalene svnthase）基因的cDNA全长序列（GenBank，JQ294055），共17... 鲨烯合酶（SQS）是枇杷三萜酸生物合成过程中的关键酶。以枇杷（Eriobotrya iaponicn L．）悬浮培养细胞为材料，采用RT—PCR和RACE方法分离得到枇杷鲨烯合酶Ej-SQS（Squalene svnthase）基因的cDNA全长序列（GenBank，JQ294055），共1775bp，包含了5’非编码区为97bp，开放阅读框为1239bp，3’非编码区为439bp。该cDNA的开放阅读框推定的氨基酸序列（含412个氨基酸）与其它植物SQS具有79％～94％同源性．包含Trans_IPPS_HH保守结构域，可能属于Isoprenoid Biosynthesis enzymes，Class 1家族。为今后利用基因工程调控枇杷细胞悬浮培养物以提取目标产物奠定基础。 展开更多

关键词 枇杷 鲨烯合酶基因 基因克隆 序列分析

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TAIL-PCR方法快速克隆银杏查尔酮合成酶基因及序列分析(英文) 被引量：20

2

作者 许锋 程水源 +2 位作者 王燕 李琳玲 程述汉 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期237-243,共7页

热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列。对传统的TAIL-PCR方法进行改良:(1)将TAIL技术应用于TAIL-PCR中第3步PCR循环。(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物。以银杏品种... 热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列。对传统的TAIL-PCR方法进行改良:(1)将TAIL技术应用于TAIL-PCR中第3步PCR循环。(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物。以银杏品种家佛手的叶基因组DNA为模板,利用简并引物克隆到银杏查尔酮合成酶基因(CHS)片段序列Gbchs1,以此序列设计3条特异引物,利用改良的热不对称交错PCR方法克隆到CHS基因Gbchs2。结果表明,Gbchs2长1238bp,编码304个氨基酸并包含3’末端序列。GbCHS2蛋白质序列与其他植物的CHS蛋白质序列高度同源,包含CHS蛋白质保守的环化作用活性位点,催化活性位点、香豆素活性位点、及催化活性基序。改良后的TAIL-PCR方法为基因全长的克隆提供了一种简单快速高效的新方法。 展开更多

关键词 银杏 热不对称交错PCR 查尔酮合成酶基因 克隆 序列分析

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柿果实ACC合成酶cDNA的克隆及其序列分析 被引量：13

3

作者 饶景萍 童斌 +1 位作者 中野龙平 稻叶昭次 《西北植物学报》 CAS CSCD 2001年第5期819-825,共7页

根据其它植物 ACC合成酶 ( 1 - aminocyclopropane- 1 - carboxylic acid synthase,ACS)氨基酸保守区 ,设计 1组简并引物 ,用 RT- PCR法 ,从柿 ( Diospyros kaki Thunb.)果实扩增出3个约 1 kb左右的 c DNA片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体... 根据其它植物 ACC合成酶 ( 1 - aminocyclopropane- 1 - carboxylic acid synthase,ACS)氨基酸保守区 ,设计 1组简并引物 ,用 RT- PCR法 ,从柿 ( Diospyros kaki Thunb.)果实扩增出3个约 1 kb左右的 c DNA片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体上 ,对这些重组克隆进行序列测定和氨基酸序列推导 ,DK- ACS1由 1 1 0 1个碱基组成 ,编码 364个氨基酸 ;DK- ACS2是 1 0 86个碱基 ,编码 35 9个氨基酸 ;DK- ACS3为 1 0 89个碱基 ,编码 363个氨基酸。它们均具有其它植物 ACS合成酶中存在的 7个保守区和 1 1个不变氨基酸残基 ,且在多肽水平上有较高的同源性。与番茄 L E- ACS2的同源性 DK- ACS1是 60 .5 % ,DK- ACS2是 70 .7% ,DK- ACS3为66.9% ;与甜瓜 CM- ACS1的同源性依次分别是 60 .4% ,72 .1 %和 64.4%。 展开更多

关键词 柿果 ACC合成酶 基因克隆 序列分析 果实 成熟软化

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金荞麦查尔酮合成酶基因CHS的克隆及序列分析 被引量：16

4

作者 蒙华 李成磊 +2 位作者 吴琦 邵继荣 陈惠 《草业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期162-169,共8页

采用同源克隆的方法获得金荞麦查尔酮合成酶基因(CHS)的保守片段554bp,进一步采用染色体步移法(genome-walking)和RT-PCR技术克隆到CHS基因的全长DNA序列和cDNA开放阅读框(ORF)序列。序列分析结果表明,金荞麦CHS基因DNA全长1650bp,含一... 采用同源克隆的方法获得金荞麦查尔酮合成酶基因(CHS)的保守片段554bp,进一步采用染色体步移法(genome-walking)和RT-PCR技术克隆到CHS基因的全长DNA序列和cDNA开放阅读框(ORF)序列。序列分析结果表明,金荞麦CHS基因DNA全长1650bp,含一个462bp的内含子;其cDNA编码区全长1188bp,编码395个氨基酸,命名为FdCHS,NCBI登录号为GU169470。该氨基酸序列与同为蓼科的掌叶大黄、虎杖CHS的氨基酸序列同源率分别达到94%和93%,且含有CHS活性位点和底物结合口袋位点等保守位点。 展开更多

关键词 金荞麦 查尔酮合成酶基因 克隆 序列分析

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滇龙胆GrSLS1基因的克隆与原核表达 被引量：12

5

作者 张晓东 李彩霞 +2 位作者 王连春 李涛 王元忠 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1311-1317,共7页

以滇龙胆转录组为基础,采用RT PCR技术克隆了滇龙胆幼叶裂环番木鳖苷合酶基因,命名为GrSLS1（GenBank登录号KF941191）.序列分析结果显示,GrSLS1基因开放阅读框长1 560 bp,编码519个氨基酸;GrSLS1蛋白相对分子量为59.33 kD,pI为8.96.生... 以滇龙胆转录组为基础,采用RT PCR技术克隆了滇龙胆幼叶裂环番木鳖苷合酶基因,命名为GrSLS1（GenBank登录号KF941191）.序列分析结果显示,GrSLS1基因开放阅读框长1 560 bp,编码519个氨基酸;GrSLS1蛋白相对分子量为59.33 kD,pI为8.96.生物信息学分析结果表明,GrSLS1蛋白属于SLS家族成员,其N端含有一跨膜螺旋区域（10～32）;二级结构分析结果表明,GrSLS1蛋白主要由α螺旋和无规则卷曲组成;系统发育分析表明,GrSLS1与帽柱木MsSLS2蛋白亲缘关系最近.构建原核表达载体pGEX 4T GrSLS1,对GrSLS1基因进行原核表达,SDS PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致.该研究为进一步研究GrSLS1基因功能及通过在龙胆中过表达该基因提高龙胆苦苷含量奠定基础. 展开更多

关键词 滇龙胆 GrSLS1基因 基因克隆 序列分析 原核表达

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甜荞查尔酮合酶基因Chs的克隆及序列分析 被引量：10

6

作者 李成磊 张晓伟 +3 位作者 吴琦 赵海霞 陈惠 邵继荣 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期383-387,共5页

利用RT-PCR技术从甜荞中克隆得到查耳酮合酶（CHS）的cDNA开放阅读框（ORF）序列,命名为FeChs,NCBI登录号为GU172166.1。该序列长1 179 bp,编码392个氨基酸,与其它植物CHS基因的同源性为78%~92%,其推导的氨基酸序列含有CHS高度保守的活... 利用RT-PCR技术从甜荞中克隆得到查耳酮合酶（CHS）的cDNA开放阅读框（ORF）序列,命名为FeChs,NCBI登录号为GU172166.1。该序列长1 179 bp,编码392个氨基酸,与其它植物CHS基因的同源性为78%~92%,其推导的氨基酸序列含有CHS高度保守的活性位点及CHS的标签序列GFGPG。 展开更多

关键词 甜荞 查耳酮合成酶基因 克隆 序列分析

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花生蔗糖合酶基因AhSuSy的克隆和干旱胁迫表达分析 被引量：8

7

作者 何美敬 刘立峰 +3 位作者 穆国俊 侯名语 陈焕英 崔顺立 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2139-2146,共8页

蔗糖合酶（sucrose synthase,SuSy）是蔗糖代谢途径中的关键酶,在植物生长、发育和渗透调节过程中起着重要的作用。本研究利用同源克隆、RACE和TAIL-PCR相结合的方法从花生叶片中分离了蔗糖合酶基因,命名为AhSuSy（Gen Bank登录号为JF34... 蔗糖合酶（sucrose synthase,SuSy）是蔗糖代谢途径中的关键酶,在植物生长、发育和渗透调节过程中起着重要的作用。本研究利用同源克隆、RACE和TAIL-PCR相结合的方法从花生叶片中分离了蔗糖合酶基因,命名为AhSuSy（Gen Bank登录号为JF346233）。该基因cDNA序列全长2790bp,包含一个2421bp的开放阅读框（ORF）,5′端非编码区57bp,3端非编码区为312bp。根据编码区预测AhSuSy编码806个氨基酸,与大豆、拟南芥、玉米等植物中相关蛋白的氨基酸序列同源性达75%以上;成功构建了该基因的原核表达载体pET32a-AhSuSy,在IPTG诱导下得到92kD左右的蛋白,与理论值一致。半定量RT-PCR分析表明AhSuSy在花生根、茎、叶中均有表达。利用10%PEG模拟干旱处理花生幼苗,分析胁迫后AhSuSy的转录水平,同时测定蔗糖合酶活性和蔗糖含量,发现三者均表现为处理后4~12h逐渐升高,相关性分析显示花生中蔗糖含量与蔗糖合酶活性的相关系数达0.993（P=0.007〈0.01）,处理后12~24h逐渐降低。推测该基因响应干旱调控,在花生抗旱胁迫中可能起着一定的作用。 展开更多

关键词 花生 蔗糖合酶基因 克隆 半定量RT-PCR 表达分析

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毛葡萄芪合成酶基因的克隆及序列分析 被引量：8

8

作者 王西平 刘斌 王跃进 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1544-1549,共6页

芪合成酶是白藜芦醇生物合成过程中起关键作用的酶.通过RT-PCR,从高抗葡萄黑痘病的中国野葡萄毛葡萄商-24克隆了芪合成酶基因家族的2个成员VqSTS1和VqSTS2,其cDNA全长均为1 179 bp,编码392个氨基酸.氨基酸序列分析表明,VqSTS1和VqSTS2... 芪合成酶是白藜芦醇生物合成过程中起关键作用的酶.通过RT-PCR,从高抗葡萄黑痘病的中国野葡萄毛葡萄商-24克隆了芪合成酶基因家族的2个成员VqSTS1和VqSTS2,其cDNA全长均为1 179 bp,编码392个氨基酸.氨基酸序列分析表明,VqSTS1和VqSTS2编码氨基酸247-257位点的IPN（S/F）AGAIAGN ＂是芪合成酶家族固有的氨基酸保守结构域,368-378位点的GVLFGFGPGLT＂是芪合成酶与查尔酮合成酶家族固有的保守序列特征.在编码的392个氨基酸中,VqSTS1和VqSTS2仅有12个氨基酸不同,氨基酸一致性达97%.多重比较分析显示,VqSTS1与VqSTS2与五针松、河岸葡萄、白粉藤、华东葡萄及欧洲葡萄等STS在氨基酸水平的一致性分别为65%、96%、97%和98%.将VqSTS1和VqSTS2登录GenBank,登录号分别为EF158856和EF158857. 展开更多

关键词 毛葡萄 芪合成酶 基因克隆 序列分析

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全雌系苦瓜ACC合成酶基因cDNA克隆及序列分析 被引量：4

9

作者 王日升 张曼 +4 位作者 方锋学 黄如葵 刘文君 杨丽涛 李杨瑞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期54-58,共5页

以全雌系苦瓜‘X-Hei-d-d’花蕾为材料,根据已报道ACC合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid synthase,ACS)保守氨基酸序列设计简并引物,采用RT-PCR技术及序列拼接,获得了全雌系苦瓜ACS基因cDNA序列,命名为Mc-ACS4(GenBank登录... 以全雌系苦瓜‘X-Hei-d-d’花蕾为材料,根据已报道ACC合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid synthase,ACS)保守氨基酸序列设计简并引物,采用RT-PCR技术及序列拼接,获得了全雌系苦瓜ACS基因cDNA序列,命名为Mc-ACS4(GenBank登录号:FJ459814)。该序列包含一个1 455 bp的完整开放阅读框,编码484个氨基酸,具有7个保守区;系统进化上与普通苦瓜ACS基因首先聚类,同源性达99%,二者仅有2个氨基酸差异,推测可能与全雌系苦瓜性别分化有关。 展开更多

关键词 苦瓜 全雌系 ACC合成酶 基因克隆 序列分析

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阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因的克隆与表达载体构建 被引量：7

10

作者 赵钟鑫 王健 +1 位作者 李琴 尚啸 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期308-316,共9页

以阔叶薰衣草(Lavandula latifolia)的鲜叶为试材,通过RT-PCR技术,获得阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因的cDNA序列。该序列长度为1809bp,编码602个氨基酸,包含一个1809 bp的开放阅读框,与NCBI上已公布的阔叶薰衣草的芳樟醇合成酶蛋白序列相... 以阔叶薰衣草(Lavandula latifolia)的鲜叶为试材,通过RT-PCR技术,获得阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因的cDNA序列。该序列长度为1809bp,编码602个氨基酸,包含一个1809 bp的开放阅读框,与NCBI上已公布的阔叶薰衣草的芳樟醇合成酶蛋白序列相似度为98%,有21个核苷酸差异,11个氨基酸差异,将其命名为Lslis。序列分析研究表明:Lslis具有多数单萜烯类合成酶基因典型的保守结构域,即DDXXD,RRX8W和(N,D)D(L,I,V)X(S,T)XXXE;具有芳樟醇合酶活性必需的DDXXD功能基团。Lslis推导氨基酸序列的预测分子质量和等电点分别为70.36和5.66 kD;疏水性分析结果表明其大部分氨基酸区域为亲水结构,该基因为亲水多肽。Lslis和已公布的阔叶薰衣草芳樟醇合酶Lllis的蛋白二级结构预测结果表明,两者在整体结构上基本保持一致,但Lslis相对于Lllis要少一个α螺旋结构。将其连接到pMD18-T的载体上,通过中间载体pCAMBIA1303,构建了Lslis基因的植物表达载体,并将其导入农杆菌,经菌落PCR鉴定和测序结果表明该片段已插入表达载体。 展开更多

关键词 阔叶薰衣草 芳樟醇合成酶 基因克隆 序列分析 植物表达载体构建

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油茶查尔酮合酶和异构酶基因的cDNA克隆 被引量：5

11

作者 谭晓风 张党权 +4 位作者 陈鸿鹏 谢禄山 王晓红 石明旺 胡芳名 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期9-13,共5页

查尔酮合酶和查尔酮异构酶是类黄酮代谢与色素苷代谢的关键酶.以油茶近成熟种子cDNA文库和EST文库为材料,通过分子克隆方法鉴定了1条查尔酮合酶基因全长cDNA和1条查尔酮异构酶全长cDNA.结果表明:油茶查尔酮合酶基因的cDNA含1479 bp,编码... 查尔酮合酶和查尔酮异构酶是类黄酮代谢与色素苷代谢的关键酶.以油茶近成熟种子cDNA文库和EST文库为材料,通过分子克隆方法鉴定了1条查尔酮合酶基因全长cDNA和1条查尔酮异构酶全长cDNA.结果表明:油茶查尔酮合酶基因的cDNA含1479 bp,编码412个氨基酸,为目前最长的查尔酮合酶,与其它物种的查尔酮合酶具有极高的相似性,在进化上高度同源;油茶查尔酮异构酶基因的cDNA含899 bp,编码206个氨基酸,与茶的查尔酮异构酶基因高度同源,但与其它物种的相似性较低. 展开更多

关键词 经济林 油茶 查尔酮合酶 查尔酮异构酶 全长CDNA 序列分析 基因克隆

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无花果ACC合成酶基因克隆及序列分析 被引量：3

12

作者 张帅 张明 +3 位作者 寇天舒 马俊莲 唐霞 张子德 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期34-37,共4页

为进一步利用基因工程手段调控无花果乙烯的合成,以无花果果肉为材料提取基因组DNA,根据已报道的无花果ACC合成酶基因序列设计引物,采用PCR技术扩增得到一条约600 bp的特异片段,将该片段克隆到pGM-Teasy vector上经PCR、酶切和测序鉴定... 为进一步利用基因工程手段调控无花果乙烯的合成,以无花果果肉为材料提取基因组DNA,根据已报道的无花果ACC合成酶基因序列设计引物,采用PCR技术扩增得到一条约600 bp的特异片段,将该片段克隆到pGM-Teasy vector上经PCR、酶切和测序鉴定。序列分析结果表明,基因全长590 bp,编码196个氨基酸,该序列与GenBank上已登陆的Masui Dauphine-ACS1的cDNA序列同源性达99%,氨基酸同源性达98%。结果表明,成功克隆到了无花果ACS基因片段。 展开更多

关键词 无花果 ACC合成酶 基因克隆 序列分析

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洋葱花青素合成酶基因的克隆和序列分析 被引量：8

13

作者 缪军 刘冰江 +5 位作者 杨妍妍 霍雨猛 张一卉 霍凤梅 修景润 吴雄 《山东农业科学》 2010年第1期1-5,共5页

采用PCR法克隆了洋葱的花青素合成酶基因AcANS，并对其进行序列比对和生物信息学分析。结果表明，其开放阅读框为1059bp，编码352个氨基酸残基；具有一个富含AT的内含子，符合GT—AG规则；其蛋白质第210～309肽段含有20G—Fe（Ⅱ）加氧... 采用PCR法克隆了洋葱的花青素合成酶基因AcANS，并对其进行序列比对和生物信息学分析。结果表明，其开放阅读框为1059bp，编码352个氨基酸残基；具有一个富含AT的内含子，符合GT—AG规则；其蛋白质第210～309肽段含有20G—Fe（Ⅱ）加氧酶家族基因的结构域。 展开更多

关键词 洋葱 花青素合成酶基因 基因克隆 序列分析

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花生△^(12)-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及序列分析 被引量：8

14

作者 潘丽娟 禹山林 +2 位作者 杨庆利 闵平 曹玉良 《花生学报》 2007年第3期5-10,共6页

根据已报道的△12-脂肪酸脱氢酶基因(FAD)的氨基酸保守序列设计引物进行RT-PCR扩增,得到花生△12-脂肪酸脱氢酶基因881bp部分cDNA序列,然后通过快速扩增cDNA末端技术(RACE),向两端延伸得到1410bp的花生△12-脂肪酸脱氢酶基因全长cDNA序... 根据已报道的△12-脂肪酸脱氢酶基因(FAD)的氨基酸保守序列设计引物进行RT-PCR扩增,得到花生△12-脂肪酸脱氢酶基因881bp部分cDNA序列,然后通过快速扩增cDNA末端技术(RACE),向两端延伸得到1410bp的花生△12-脂肪酸脱氢酶基因全长cDNA序列。序列分析表明有一个长1140bp、编码379个氨基酸残基的开放阅读框,所编码蛋白质的大小约为43kDa。推测的氨基酸序列具有膜整合蛋白酶特异性的3个组氨酸保守区;氨基酸疏水性分析结果表明,所编码的氨基酸序列存在2个具有膜固定蛋白(membrance-anchored protein)重要特征的疏水结构,2个疏水区共跨膜4次,这些特性表明所获得的序列为△12-脂肪酸脱氢酶基因。 展开更多

关键词 花生 脂肪酸脱氢酶 基因克隆 序列分析

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甜瓜鲨烯合酶基因克隆及酶分子结构分析 被引量：3

15

作者 黄海霞 苏何玲 +5 位作者 史云龙 肖雅伦 谭燕莲 梁杨浩 刘永明 吴耀生 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期373-379,387,共8页

葫芦素类是主要分布于葫芦科植物中具有多种医药活性的四环三萜类化合物,目前药用葫芦素原料主要从甜瓜蒂中提取。该研究从甜瓜中克隆葫芦素类合成关键酶——鲨烯合酶(SQS)的基因,并对其序列进行了生物信息学分析。结果表明:DNA测序和BL... 葫芦素类是主要分布于葫芦科植物中具有多种医药活性的四环三萜类化合物,目前药用葫芦素原料主要从甜瓜蒂中提取。该研究从甜瓜中克隆葫芦素类合成关键酶——鲨烯合酶(SQS)的基因,并对其序列进行了生物信息学分析。结果表明:DNA测序和BLASTRefSeqGene分析表明,克隆的甜瓜SQS基因片段具有完整的该酶基因开放阅读框架(ORF)序列。ORF分析显示,甜瓜SQS由417氨基酸残基构成,等电点为7.56。对推衍的甜瓜SQS氨基酸序列分析结果提示,该酶二级结构以α螺旋为主。结构域预测结果表明,SQS属于异戊二烯合酶家族,具有法呢酰基二磷酸及镁离子的结合位点。三级结构预测提示,甜瓜SQS为单体酶,其活性中心主要由几个α螺旋围绕形成的穴状结构。磷酸化位点分析显示,S^(48)处于酶活性中心相关^(47)VSRSF^(52)的模体中,而S^(196)是正选择位点,提示这两处磷酸化位点可能是甜瓜SQS酶活性调节的关键部位。以甜瓜SQS基因ORF序列构建系统发生树的系统发生分类结果与形态学分类结果一致。该研究结果为葫芦素类的生物合成调控研究提供了新的线索和实验依据。 展开更多

关键词 甜瓜 鲨烯合酶 基因克隆 序列分析

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花生γ-生育酚甲基转移酶基因(γ-TMT)的克隆及序列分析 被引量：5

16

作者 李拴柱 万勇善 刘风珍 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1856-1863,共8页

γ-生育酚甲基转移酶（γ-TMT）催化γ-生育酚转变为生物活性最高的α-生育酚,是决定植物中维生素E成分和活性的关键酶。本研究采用电子克隆与PCR相结合的方法获得了花生6个栽培品种（A.hypogaeaL.）和花生区组4个二倍体野生种中γ-TMT... γ-生育酚甲基转移酶（γ-TMT）催化γ-生育酚转变为生物活性最高的α-生育酚,是决定植物中维生素E成分和活性的关键酶。本研究采用电子克隆与PCR相结合的方法获得了花生6个栽培品种（A.hypogaeaL.）和花生区组4个二倍体野生种中γ-TMT的全长DNA序列,定名为AhgTMT;从栽培品种丰花2号中获得γ-TMT的cDNA序列,定名为AhrTMT。同一栽培品种的AhgTMT与AhrTMT的序列完全对应,说明该基因无内含子。AhrTMT编码区长1059bp,编码352个氨基酸残基的AhTMT蛋白。AhTMT分子量为39.09kD,等电点6.72,总平均亲水性–0.12;预测的二级结构中α-螺旋占55.40%,β-折叠占10.51%,无规则卷曲占34.09%;被定位于叶绿体,含有甲基转移酶保守的SAM结构域。AhTMT与已报道植物γ-TMT氨基酸序列的相似性为61.75%~72.80%。栽培品种的AhgTMT与A.ipaensis（BB）、A.batizocoi（BB）、A.duranensis（AA）、A.kuhlmannii（AA）4个野生种的核苷酸序列同源性分别是100%、99.91%、99.74%和95.63%。 展开更多

关键词 花生 维生素E Γ-生育酚甲基转移酶 基因克隆 序列分析

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大青杨纤维素合成酶PuCesA6基因cDNA的克隆及序列分析 被引量：4

17

作者 许雷 刘一星 方连玉 《西南林业大学学报（自然科学）》 CAS 2012年第5期26-32,共7页

以大青杨总RNA为模板,通过反转录PCR获得纤维素合成酶PuCesA6基因的全长cDNA序列。序列分析结果表明:其cDNA序列全长3 778 bp,开放读码框序列3 264 bp,共编码1 087个氨基酸。PuCesA6基因编码的氨基酸序列具备被子植物纤维素合酶基因的特... 以大青杨总RNA为模板,通过反转录PCR获得纤维素合成酶PuCesA6基因的全长cDNA序列。序列分析结果表明:其cDNA序列全长3 778 bp,开放读码框序列3 264 bp,共编码1 087个氨基酸。PuCesA6基因编码的氨基酸序列具备被子植物纤维素合酶基因的特征:锌指结构域、高变区I(HVR-I)、高变区II(HVR-II)与β-糖苷转移酶有关的保守结构域以及8个跨膜区。通过多氨基酸序列比对发现,与光皮桦BlCesA5相似度最高,为89%;其次是玉米ZmCesA8,相似度为80%,且8类CesA的锌指结构与C末端氨基酸序列高度保守。34种CesA蛋白序列的分子进化分析表明,大青杨PuCesA6蛋白与欧洲颤杨PtrCesA6蛋白亲缘关系最近,相似度达99%;和光皮桦BlCe-sA5、大桉EgCesA6蛋白同聚为一类。 展开更多

关键词 大青杨 纤维素合酶基因 克隆 序列分析

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蝴蝶兰蔗糖合成酶基因的cDNA克隆及其表达分析 被引量：2

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作者 李冬梅 朱根发 +3 位作者 操君喜 孙映波 王真 吕复兵 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第4期662-668,共7页

利用低夜温诱导的蝴蝶兰花芽的抑制消减杂交文库中分离的蔗糖合成酶基因的ESTs片段,采用RT-PCR和RACE技术,从蝴蝶兰花芽中克隆得到蔗糖合成酶基因的全长cDNA,命名为PhSUS,GenBank登录号JX162557。该基因全长2 816 bp,包含147 bp的5′非... 利用低夜温诱导的蝴蝶兰花芽的抑制消减杂交文库中分离的蔗糖合成酶基因的ESTs片段,采用RT-PCR和RACE技术,从蝴蝶兰花芽中克隆得到蔗糖合成酶基因的全长cDNA,命名为PhSUS,GenBank登录号JX162557。该基因全长2 816 bp,包含147 bp的5′非编码区、218 bp的3′非编码区和一个长度为2 451 bp编码816个氨基酸的开放阅读框。PhSUS预测的分子量为93.30 ku,等电点为5.95。蛋白同源性分析结果表明,PhSUS与兰科植物的文心兰、石斛兰和莫氏兰(Mokara)等的蔗糖合成酶有很高同源性。保守结构域分析结果表明,PhSUS含有蔗糖合成酶和葡糖基转移酶两个保守功能域及4个ADP结合位点。表达分析结果表明,PhSUS在检测的组织中都有表达,但表达丰度不同。PhSUS在花蕾发育中后期、成熟花和花器官的表达量都较营养阶段根和叶中的表达量高。PhSUS的克隆为研究其参与花芽分化和发育的表达调控奠定了重要基础。 展开更多

关键词 蝴蝶兰 蔗糖合成酶基因 基因克隆 序列分析 基因表达

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葡萄白藜芦醇合酶基因cDNA克隆及原核表达 被引量：2

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作者 付洪冰 崔莹 崔崇士 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期422-427,共6页

从贝达葡萄中提取总RNA,采用RT-PCR方法,克隆到了白藜芦醇合酶(resveratrol synthase,RS)基因的全长cDNA。将其与圆叶葡萄(Vitis rotundifolia)、华东葡萄(Vitis pseudoreticulata)、河南毛葡萄(Vitis ficifolia)、河岸葡萄(Vitis vulpi... 从贝达葡萄中提取总RNA,采用RT-PCR方法,克隆到了白藜芦醇合酶(resveratrol synthase,RS)基因的全长cDNA。将其与圆叶葡萄(Vitis rotundifolia)、华东葡萄(Vitis pseudoreticulata)、河南毛葡萄(Vitis ficifolia)、河岸葡萄(Vitis vulpine)、酿酒葡萄(Vitis virufera)、羊蹄甲(Bauhinia)、花生(Arachis hvpogaea)、虎杖(Polygonum cuspiaatum)、大黄(Rheum officinale)进行氨基酸同源性比对,结果表明:分离的RS基因与其他葡萄的RS基因编码的氨基酸同源性达到97%以上,与其他属的RS基因编码的氨基酸同源性达到64%以上。生物信息学分析表明,该蛋白分子量为43kD,等电点pI=6.2,包含392个氨基酸残基。将RS的全长cDNA插入到表达载体pET28a中构建重组表达质粒pET28a-RS,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE电泳检测结果表明,以30℃、0.5mmol.L-1IPTG诱导4h时该基因表达效果最好,诱导产物为1个约43kD的蛋白,为进一步纯化和鉴定目的蛋白提供了基础。 展开更多

关键词 葡萄 白藜芦醇合酶 基因克隆 序列分析 原核表达

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花生甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆与序列分析 被引量：8

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作者 迟晓元 潘丽娟 +6 位作者 陈明娜 陈娜 杨珍 王通 王冕 和亚男 禹山林 《花生学报》 2013年第4期14-24,共11页

甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的功能及作用机理在模式植物拟南芥中已经得到了较为充分的研究,但是在花生中还没有关于这类基因的报道,其功能也没有得到证实。本研究通过Bioedit软件在花生cDNA文库中找到了6个可能编码GPAT蛋白的基因片段,... 甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的功能及作用机理在模式植物拟南芥中已经得到了较为充分的研究,但是在花生中还没有关于这类基因的报道,其功能也没有得到证实。本研究通过Bioedit软件在花生cDNA文库中找到了6个可能编码GPAT蛋白的基因片段,其中有3个基因没有包含完整的开放阅读框。我们通过5'-和3'-RACE RT-PCR对这3个基因的全长进行了克隆,得到了包含完整读码框的基因序列,并将序列在GenBank上注册,同时对得到的序列进行了初步分析。 展开更多

关键词 甘油-3-磷酸酰基转移酶基因 花生 基因克隆 序列分析

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