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兔源A型多杀性巴氏杆菌Pm3和Pm6的致病性和基因组特征分析
1
作者 王锦祥 苏进博 +5 位作者 付环茹 孙世坤 高承芳 陈冬金 桑雷 谢喜平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2340-2352,共13页
旨在探究多杀性巴氏杆菌致病性的分子基础。本试验测定了兔源A型多杀性巴氏杆菌Pm3株和Pm6株的致病性,并进一步对其进行全基因组测序和比较基因组学分析。攻毒试验结果显示,Pm3和Pm6滴鼻攻毒后不仅能使试验兔产生严重的化脓性胸膜肺炎,... 旨在探究多杀性巴氏杆菌致病性的分子基础。本试验测定了兔源A型多杀性巴氏杆菌Pm3株和Pm6株的致病性,并进一步对其进行全基因组测序和比较基因组学分析。攻毒试验结果显示,Pm3和Pm6滴鼻攻毒后不仅能使试验兔产生严重的化脓性胸膜肺炎,还能导致试验兔的高死亡率。比较基因组学分析结果显示,Pm3和Pm6的基因组都比兔源低毒力多杀性巴氏杆菌s4株和AH09株的大。与s4和AH09相比,在Pm3和Pm6的基因组中鉴定到约120个具有重要生物学功能的特有基因,且有约100个这些特有基因也存在于兔源强毒力多杀性巴氏杆菌的基因组中。此外,不同动物源多杀性巴氏杆菌基因L3型脂多糖核心寡糖外核合成酶基因natC和gatF的序列存在多态性,但兔源菌株(除SD11、CIRMBP-0873和CIRMBP-0884外)的这两个基因序列却完全一致,表现出一定的宿主特异性。Pm3和Pm6均为强毒力菌株。在Pm3和Pm6基因组中鉴定到的存在于兔源强毒力菌株基因组中但不存在于兔源低毒力菌株基因组中的基因可能在Pm3和Pm6的致病过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 致病性 全基因组测序 比较基因组学
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1株山羊源D型多杀性巴氏杆菌的全基因组测序及生物学特性分析
2
作者 张振兴 陈珍 +5 位作者 陈巧玲 程逸文 陈思 满初日嘎 杜丽 王凤阳 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期167-176,共10页
多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是一种常见致病菌,可以引起多种禽类、家畜、野生动物,甚至人类的感染。本实验室先前从患病海南黑山羊组织中分离出1株D型Pm。为进一步了解该菌株的基因组特征,明确其毒力相关基因和遗传进化... 多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是一种常见致病菌,可以引起多种禽类、家畜、野生动物,甚至人类的感染。本实验室先前从患病海南黑山羊组织中分离出1株D型Pm。为进一步了解该菌株的基因组特征,明确其毒力相关基因和遗传进化关系。为Pm感染疾病的预防和临床治疗提供参考。将该菌株命名为“Pm HN01”株,使用SMRT技术和Illumina测序技术相结合的方法进行全基因组测序。使用生物信息学、PCR鉴定和系统进化树等方法对Pm HN01株的基因组特征、毒力相关基因和遗传进化关系进行分析。将测序后的基因组信息提交至NCBI,获得登录号CP037861。Pm HN01株与其他巴氏杆菌具有相似的基因组谱,大小为2349898 bp,GC含量为40.25%,预测到2401个编码基因。在GO、KEGG和COG分析中分别有1651、2227和1912个基因注释。在PHI、VFDB和T3SS分析中,分别有121、43和84个基因注释。此外,选取23个毒力基因引物对其进行PCR鉴定,结果发现Pm HN01株含有exbB、exbD、tbpA、toxA、fimA等12个毒力基因,同北京和新疆等国内菌株的进化关系最近,同美国、瑞士、丹麦等国外菌株的进化关系最远。本研究首次获得了山羊源D型Pm HN01株的完整基因组信息,为Pm的基因组数据库增添了材料,丰富了Pm的宿主类型。进一步完善了Pm HN01株的毒力基因和系统进化信息,为后续Pm的流行区域和致病性研究提供了理论参考。 展开更多
关键词 D型多杀性巴氏杆菌 基因组测序 毒力相关基因 系统进化树分析
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多杀性巴氏杆菌来源的外膜囊泡抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移并促进凋亡
3
作者 王阳 王泽益 +1 位作者 曹向乾 沈兵 《海军军医大学学报》 北大核心 2025年第8期1000-1008,共9页
目的探究多杀性巴氏杆菌(Pm)培养上清液及Pm来源的外膜囊泡(Pm-OMV)对膀胱癌细胞的生物学作用。方法培养Pm并收集其培养上清液,以PBS和脑心浸出液(BHI)细菌培养基作为对照组,通过CCK-8、划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验检测其对膀胱... 目的探究多杀性巴氏杆菌(Pm)培养上清液及Pm来源的外膜囊泡(Pm-OMV)对膀胱癌细胞的生物学作用。方法培养Pm并收集其培养上清液,以PBS和脑心浸出液(BHI)细菌培养基作为对照组,通过CCK-8、划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验检测其对膀胱癌细胞系T24和5637增殖、迁移和侵袭能力的影响。采用超速离心法收集Pm培养上清液中的Pm-OMV,以上清液剩余成分作为对照,通过CCK-8、Transwell迁移和侵袭实验检测其对T24和5637细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,通过流式细胞术检测其对T24和5637细胞凋亡的作用。最后在裸小鼠体内构建异种移植瘤模型,瘤内多点注射Pm-OMV和PBS,观察肿瘤生长情况,并通过增殖标志物Ki67免疫组织化学染色及TUNEL法检测验证Pm-OMV在体内对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。结果在体外实验中,Pm培养上清液显示出对T24和5637细胞增殖、侵袭及迁移能力的抑制作用,与PBS组和BHI组相比差异均有统计学意义(均P<0.01);Pm-OMV不仅能够抑制T24和5637细胞的增殖、侵袭和迁移,还能诱导细胞发生凋亡,与上清液剩余成分对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。裸小鼠皮下移植瘤实验进一步证实了Pm-OMV在体内对膀胱癌细胞增殖的抑制作用和促凋亡效果,与PBS对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Pm-OMV可抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡,为研究肿瘤内微生物调控肿瘤进展的机制和开发新的膀胱癌治疗策略提供了实验依据。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 多杀性巴氏杆菌 细菌外膜囊泡 细胞增殖 细胞凋亡
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多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)保护性抗原片段的筛选及免疫效果的评估 被引量：2
4
作者 庞碧寒 姚文敬 +4 位作者 王怡涤 关丽君 薛云 张俊峰 赵战勤 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第3期278-285,共8页
为筛选产毒多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其分为N端3个片段(rPMT-N1和rPMT-N2a、rPMT-N2b)和C端5个片段(rPMT-C3、rPMTC4、rPMT-C5、rPMT-C6及rPMT-C7),利用原核... 为筛选产毒多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其分为N端3个片段(rPMT-N1和rPMT-N2a、rPMT-N2b)和C端5个片段(rPMT-C3、rPMTC4、rPMT-C5、rPMT-C6及rPMT-C7),利用原核表达系统表达这8个片段,采用His6标签蛋白纯化试剂盒纯化各重组蛋白,经SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果后,通过Image J软件计算各重组蛋白的表达量,进一步采用western blot检测各重组蛋白的反应原性。SDS-PAGE结果显示,分别获得了34 ku、62 ku、67 ku、70 ku、64 ku、102 ku、36 ku、60 ku的重组蛋白,其中rPMT-N2a、rPMT-N2b、rPMT-C5和rPMT-C7以可溶性和包涵体两种形式表达,另外4个重组蛋白均以包涵体形式表达,纯化后在上述各位置处分别出现较单一的目的条带,且各蛋白的表达量占菌体总蛋白的8.44%~35.77%。Western blot结果显示,8个重组蛋白均可与猪源T+Pm TPM-6株的猪阳性血清发生特异性反应,均具有一定的反应原性,其中rPMT-N1、rPMT-N2a、rPMT-N2b、rPMT-C5的反应原性较强。基于此,采用ISA201佐剂制备这4种重组蛋白的亚单位疫苗,间隔20 d对小鼠经皮下注射免疫(50μg/只)两次,观察并记录各组小鼠的临床症状及死亡数,评估该疫苗对小鼠的安全性。首免后35 d(二免后14 d)对各组小鼠分别以10 LD_(100)和30 LD_(100)的天然粗提PMT(cPMT)对小鼠攻毒,评估4种亚单位疫苗(rPMT-N1、rPMT-N2a、rPMT-N2b及rPMT-C5)对小鼠的免疫保护效力。安全性试验结果显示,免疫后21 d rPMT-N2a组小鼠的死亡率为2/24,rPMT-N2b组小鼠的死亡率为6/24,其余各组小鼠均无异常。ELISA结果显示,二免后各疫苗组小鼠的几何平均抗体效价分别升至1:1552、1:18820、1:1351和1:6208,表明各重组蛋白均能诱导免疫小鼠产生良好的体液免疫反应。攻毒结果显示,对照组小鼠在两种剂量的cPMT攻毒后均出现相应症状并均在24h内全部死亡,部分亚单位疫苗免疫组小鼠也出现不同程度的发病及死亡,但发病及死亡时间较对照组延长。以10LD_(100)的cPMT攻毒后,上述各疫苗对小鼠的免疫保护率分别为87.5%、100%、37.5%和100%;以30 LD_(100)的cPMT攻毒后,各疫苗对小鼠的免疫保护率分别为50%、85.7%、0和75%。本研究表明,rPMT-N2a、rPMT-C5具有作为T+Pm亚单位疫苗优势保护性抗原的潜力,该结果为后期T+Pm亚单位疫苗的研发奠定基础。 展开更多
关键词 产毒多杀性巴氏杆菌 toxA 多杀性巴氏杆菌毒素 重组蛋白 亚单位疫苗
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牛多杀性巴氏杆菌OmpA抗原间接ELISA方法的建立 被引量：1
5
作者 王润清 孙航 +4 位作者 孙雨 李歌 李琦 侯晓林 阚威 《中国动物检疫》 2025年第2期87-94,共8页
为建立一种快速检测牛多杀性巴氏杆菌的方法,分析多杀性巴氏杆菌OmpA序列信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pET32a载体上,构建相应的重组质粒pET32a-OmpA;将重组质粒转化... 为建立一种快速检测牛多杀性巴氏杆菌的方法,分析多杀性巴氏杆菌OmpA序列信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pET32a载体上,构建相应的重组质粒pET32a-OmpA;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞株中,经扩大培养成功诱导表达出了纯度较高的包涵体OmpA蛋白,将OmpA重组蛋白作为诊断抗原,经反应条件优化建立了间接ELISA抗体检测方法。经试验验证,该方法对其他相关的牛类病原无交叉反应,阳性血清稀释度为1:256时仍呈阳性,组内与组间变异系数均低于10%。结果表明,该方法特异性与敏感性较好,且具有良好的重复性与稳定性。本研究为进一步开发成熟的牛多杀性巴氏杆菌抗体检测试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 牛多杀性巴氏杆菌 OmpA蛋白 原核表达 蛋白纯化 ELISA
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内蒙古地区牛呼吸道感染的主要病原菌及支原体分离鉴定及耐药性和毒力基因检测
6
作者 尹凯雯 毛伟 +9 位作者 曹金山 孙月 董海燕 韩凯凡 王博 李培锋 张志丹 樊宏亮 郭宇 赵红霞 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1328-1341,共14页
【目的】了解内蒙古地区某规模化牧场牛呼吸道疾病主要致病菌及支原体的感染情况、耐药性及毒力基因携带情况,为该牧场牛呼吸道疾病的防治提供用药依据。【方法】采集死亡牛的肺脏组织进行病原菌分离培养、生化鉴定、16S rRNA基因测序、... 【目的】了解内蒙古地区某规模化牧场牛呼吸道疾病主要致病菌及支原体的感染情况、耐药性及毒力基因携带情况,为该牧场牛呼吸道疾病的防治提供用药依据。【方法】采集死亡牛的肺脏组织进行病原菌分离培养、生化鉴定、16S rRNA基因测序、PCR鉴定、药敏试验、耐药基因及毒力基因检测等。【结果】分离得到在TSA平板上显示圆润、灰白色、透明或半透明菌落,特异性基因及血清型基因扩增符合A型多杀性巴氏杆菌、A6型溶血性曼氏杆菌预期条带的细菌各1株;在PPLO固体培养基出现肉眼可观察的小气泡,镜检呈煎蛋样,特异性基因扩增符合预期条带的牛支原体1株。16S rRNA测序比对结果发现,3种病原体分别与多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌和牛支原体相似性在99%以上。耐药性及毒力基因检测结果显示,多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌对氧氟沙星高度敏感,对卡那霉素、阿米卡星、庆大霉素等抗菌药物敏感;多杀性巴氏杆菌携带strA、strB、tetA、tetB、qnrA、bla ROB耐药基因,携带exbB、exbD、ompA、psl等22种毒力基因;溶血性曼氏杆菌携带strA、strB耐药基因,携带gcp、gs60、lktC、tbpB 4种毒力基因;牛支原体对链霉素、红霉素、克林霉素耐药,对环丙沙星、阿米卡星和卡那霉素中介,对庆大霉素、氧氟沙星、恩诺沙星、四环素敏感,携带strA、strB、mph、msr-E耐药基因,携带VspX、VspY2、VpmA、P81毒力基因。【结论】该牧场病死牛呼吸道疾病为多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌及牛支原体混合感染所致,且分离菌株携带多种毒力基因,建议临床中治疗牛呼吸道疾病使用氧氟沙星作为主要治疗抗菌药物,不建议使用红霉素、克林霉素等抗菌药物。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 溶血性曼氏杆菌 牛支原体 分离鉴定 耐药性 毒力基因
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1例种鹅鸭瘟病毒与多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断及病原鉴定
7
作者 吴鹏 袁阳 +6 位作者 杨芸芸 冯轶 王艳 杨颖 陈江凤 姜海波 文明 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2253-2265,共13页
【目的】确定贵州某种鹅场种鹅发病死亡的病因,为种鹅多病原混合感染的防治提供参考。【方法】对发病灰鹅进行临床症状及剖检观察、组织切片观察、细菌分离培养鉴定和6种水禽常见病毒(鸭瘟病毒(DPV)、鸭圆环病毒(DuCV)、禽流感病毒(AIV... 【目的】确定贵州某种鹅场种鹅发病死亡的病因,为种鹅多病原混合感染的防治提供参考。【方法】对发病灰鹅进行临床症状及剖检观察、组织切片观察、细菌分离培养鉴定和6种水禽常见病毒(鸭瘟病毒(DPV)、鸭圆环病毒(DuCV)、禽流感病毒(AIV)、鹅细小病毒(GPV)、鸭病毒性肝炎病毒(DHV)和禽坦布苏病毒(TMUV))PCR检测,进一步对病原菌进行相似性分析、荚膜血清型鉴定、药敏试验和致病性试验及分离病毒的致病性检测。【结果】发病灰鹅头颈肿大,肝脏表面出现灰黄色坏死灶,心脏及肺脏表面有出血点。组织切片结果显示,发病灰鹅肝脏、肺脏和肾脏均出现明显病变。分离菌株菌落呈灰白色、表面光滑的露滴状;革兰染色见红色短杆状阴性菌;瑞氏染色见两极浓染的球杆菌。生化试验结果显示,分离菌株葡萄糖、果糖、甘露醇和麦芽糖等反应为阳性。PCR检测及16S rRNA基因鉴定结果显示,分离菌株扩增出大小为460 bp的多杀性巴氏杆菌特异性基因Kmt1,且与NCBI中巴氏杆菌参考菌株16S rRNA基因序列相似性为98.6%~99.3%,鉴定其为多杀性巴氏杆菌。经血清型鉴定,分离株为A型荚膜血清型多杀性巴氏杆菌。分离菌株对诺氟沙星、庆大霉素和庆大霉素等敏感,对万古霉素中度敏感;将多杀性巴氏杆菌分离株接种小鼠,测得最小致死量(MLD)<5 CFU。病毒PCR检测及测序比对分析显示,发病灰鹅为鸭瘟病毒(DPV)感染,且DPV分离株与NCBI DPV参考株UL 6基因序列相似性为98.9%~100%;经鸭胚盲传3代,尿囊液PCR检测出DPV;鸭胚成纤维细胞(DEF)接种DPV,9 h后DEF缩圆,24 h后贴壁的DEF脱落或形成合胞体;经测定,DPV分离株的半数组织培养感染剂量(TCID 50)为2.88×10^(-9)/0.1 mL。【结论】本研究最终诊断发病灰鹅为DPV与多杀性巴氏杆菌混合感染,并分离得到1株毒力较强的A型荚膜血清型多杀性巴氏杆菌与1株毒力较强的DPV,本研究结果可为多杀性巴氏杆菌与DPV感染水禽引起的疾病的防治、病原学调查和多联疫苗等提供科学依据和技术支持。 展开更多
关键词 鹅 A型多杀性巴氏杆菌 鸭瘟病毒 分离鉴定 病原特性
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三叶青多糖对巴氏杆菌灭活疫苗佐剂作用的研究
8
作者 向秋菊 崔雪梅 +8 位作者 虞乐 罗艳芳 黄叶娥 季权安 石团员 胡子喆 宋厚辉 鲍国连 刘燕 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第8期839-845,874,共8页
为研究三叶青多糖(THP)作为佐剂对巴氏杆菌(Pm)灭活疫苗诱导小鼠免疫应答的影响,本研究将96只ICR雌性小鼠随机均分为4组:空白组(BC组)、Pm灭活疫苗组(Pm),含铝胶佐剂Pm疫苗组(Alum-Pm)、含THP佐剂的Pm疫苗组(THP-Pm),分别免疫相应疫苗两... 为研究三叶青多糖(THP)作为佐剂对巴氏杆菌(Pm)灭活疫苗诱导小鼠免疫应答的影响,本研究将96只ICR雌性小鼠随机均分为4组:空白组(BC组)、Pm灭活疫苗组(Pm),含铝胶佐剂Pm疫苗组(Alum-Pm)、含THP佐剂的Pm疫苗组(THP-Pm),分别免疫相应疫苗两次,每次间隔两周。采用ELISA方法分别检测小鼠二免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和42 d时血清IgG抗体水平,以及二免后28 d血清IgG1、IgG2a抗体亚类水平,以及Th1型(INF-γ)、Th2型(IL-4、IL-5)和Th17型(IL-17)细胞因子水平。结果显示,与Alum-Pm组相比,THP-Pm组小鼠血清中IgG抗体水平在二免后14 d和28 d显著升高(P<0.05),于28 d达到峰值,且THP-Pm组小鼠血清中IgG1和IgG2a抗体亚类水平显著高于其它各组(P<0.05)。与BC组相比,THP-Pm组小鼠血清IFN-γ和IL-17细胞因子分泌水平显著升高(P<0.05),IL-4和IL-5极显著升高(P<0.01、P<0.001);与Pm组相比,THP-Pm组小鼠血清IFN-γ和IL-5细胞因子的分泌水平显著升高(P<0.05),细胞因子IL-4的分泌水平极显著升高(P<0.01);与Alum-Pm组相比,仅IL-4的分泌水平显著升高(P<0.05)。二免后28 d取各组小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞悬液,采用CCK-8法检测各组小鼠淋巴细胞增殖水平,采用荧光定量PCR(qPCR)检测淋巴细胞中T-bet和GATA-3基因的相对转录水平,采用流式细胞术检测淋巴细胞中CD4^(+)与CD8^(+)T淋巴细胞亚群的比值。CCK-8法检测结果显示,分别经灭活的Pm和LPS刺激后,THP-Pm组小鼠淋巴细胞的增殖水平极显著高于其余各组(P<0.01、P<0.001、P<0.0001),经ConA刺激后THP-Pm组小鼠淋巴细胞的增殖水平极显著高于BC组和Pm组(P<0.01)。qPCR检测结果显示,经Pm刺激后,THP-Pm组小鼠淋巴细胞T-bet mRNA的相对转录水平极显著高于BC组(P<0.0001)和Pm组(P<0.001),显著高于Alum-Pm组(P<0.01);THP-Pm组小鼠淋巴细胞GATA-3 mRNA的相对转录水平极显著高于BC组(P<0.001),显著高于Pm组和Alum-Pm组(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与Pm组相比,THP-Pm组小鼠淋巴细胞CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞的比值显著升高(P<0.05)。二免后49 d通过攻毒试验检测免疫不同佐剂的Pm疫苗对小鼠的保护作用,结果显示,攻毒后10 d内BC组、Pm组、Alum-Pm组、THP-Pm组小鼠的存活率分别为0、33.3%、66.7%、83.3%,其中THP-Pm组小鼠的存活率极显著高于BC组和Pm组(P<0.01)。本研究首次证实THP佐剂可显著增强Pm灭活疫苗的免疫保护效果,为THP作为新型疫苗佐剂的开发与应用提供了重要参考依据。 展开更多
关键词 三叶青多糖 巴氏杆菌 灭活疫苗 佐剂 免疫保护
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多杀性巴氏杆菌感染小鼠肝脏转录组分析
9
作者 黄惠娴 陈巧玲 +5 位作者 王雪梅 蒋俊明 刘志勇 陈思 王凤阳 杜丽 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期177-187,共11页
本试验旨在探究多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)感染小鼠肝脏组织的转录组变化情况,筛选Pm感染后参与免疫反应的相关基因及信号通路。采用腹腔注射法构建Pm(HN01株)感染小鼠动物模型,收集感染组和对照组新鲜肝脏组织,提取总RN... 本试验旨在探究多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)感染小鼠肝脏组织的转录组变化情况,筛选Pm感染后参与免疫反应的相关基因及信号通路。采用腹腔注射法构建Pm(HN01株)感染小鼠动物模型,收集感染组和对照组新鲜肝脏组织,提取总RNA进行转录组测序,筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进行功能富集分析,采用qRT-PCR对测序数据进行验证。(结果)转录组测序分析结果显示,共获得5710个DEGs(Fold Change≥1.5且P<0.05),其中2968个DEGs上调,2742个DEGs下调。GO功能注释结果显示,免疫相关的GO terms包括肿瘤坏死因子的细胞反应、白细胞介素1的细胞反应、正向调控炎症反应等;KEGG富集分析结果显示,DEGs在MAPK信号通路、TNF信号通路和补体与凝血级联激活通路等免疫相关通路中显著富集。qRT-PCR验证结果表明,随机选取的S100A9、IL1RN、LCN2、CD14、CXCL1、S100A8、JUNB、TNFRSF1A、CD63、C3共10个DEGs变化趋势与转录组测序结果一致。本研究表明,肝脏在防御Pm入侵中通过激活补体与凝血级联激活通路和TNF信号通路参与免疫应答反应,为进一步研究Pm与宿主之间相互作用的分子机制奠定理论基础。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 转录组 肝脏 TNF信号通路
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鸭源巴氏杆菌的分离鉴定及致病性研究
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作者 刘丹 冯雅婷 +4 位作者 陈宗超 朱敏 郭容 王桂军 于圣青 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期67-74,共8页
本研究对广东省4个养殖场分离的疑似多杀性巴氏杆菌20株,通过细菌形态学观察、PCR鉴定、生化试验共鉴定出17株多杀性巴氏杆菌,并对其进行血清型分型、药敏检测、毒力基因检测以及致病性试验。结果显示:17株分离菌均为荚膜A型巴氏杆菌;14... 本研究对广东省4个养殖场分离的疑似多杀性巴氏杆菌20株,通过细菌形态学观察、PCR鉴定、生化试验共鉴定出17株多杀性巴氏杆菌,并对其进行血清型分型、药敏检测、毒力基因检测以及致病性试验。结果显示:17株分离菌均为荚膜A型巴氏杆菌;14/17株分离菌对多粘菌素B敏感,敏感率高达82%,17株分离菌对新霉素、丁胺卡那、头孢噻肟和呋喃唑酮4种药物的耐药率达80%以上;对17株菌均检测到其中的13个毒力基因;PM-3毒力最强,4个菌可以引起半数试验动物死亡。本研究表明从广东省4个养鸭场分离的菌株致病性强,且表现多重的严重耐药性。研究结果为预防控制鸭源巴氏杆菌提供参考依据。 展开更多
关键词 鸭源巴氏杆菌 分离 鉴定 耐药性 致病性
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三十四株猪源多杀性巴氏杆菌的分型及耐药性分析
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作者 马彩萍 祝瑶 +10 位作者 刘红道 周光斌 许秋 林龙华 柴霁芸 侯杰 孙宏飞 杜素素 范翠龙 夏利宁 张万江 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期4074-4085,共12页
旨在了解我国猪源多杀性巴氏杆菌(Pm)的流行特征和耐药情况。本研究对来自黑龙江、辽宁、吉林、内蒙古、陕西、宁夏、河南的病死猪脏器进行细菌分离培养,经16S rRNA测序和kmt基因鉴定,利用荚膜分型、脂多糖基因型分型、多位点序列分型(M... 旨在了解我国猪源多杀性巴氏杆菌(Pm)的流行特征和耐药情况。本研究对来自黑龙江、辽宁、吉林、内蒙古、陕西、宁夏、河南的病死猪脏器进行细菌分离培养,经16S rRNA测序和kmt基因鉴定,利用荚膜分型、脂多糖基因型分型、多位点序列分型(MLST)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)等方法对Pm进行分型;通过微量肉汤稀释法分析Pm对8种抗生素的敏感性;通过Illumina PE 150对细菌全基因组测序,采用ResFinder数据库分析细菌的耐药基因,最后通过小鼠致病性试验确定分离菌株的毒力。结果显示,分离菌在血平板上形成表面光滑、湿润、中央微凸、半透明的菌落;革兰染色可见呈红色、球状或短杆状的细菌;共获得34株Pm,荚膜A型19株(占55.88%),荚膜D型14株(占41.18%)和荚膜F型1株(2.94%);脂多糖基因型L3有8株,脂多糖基因型L6有26株。MLST分析得到8个MLST型,ST11为优势基因型,占比为35.29%。可将Pm分为21个PFGE谱型,菌株间具有明显的多样性。耐药性结果显示,34株Pm对多黏菌素B、四环素、氟苯尼考、氯霉素、头孢噻呋、环丙沙星、卡那霉素的耐药率分别为38.23%、35.29%、23.53%、14.71%、11.76%、8.82%、2.94%,对庆大霉素不耐药;耐药基因检测结果显示,18株Pm携带9种耐药基因,分别为tet(B)、tet(C)、tet(L)、floR、aadA14、sul2、aph(6)-Id、aph(3″)-Ib和aph(3′)-Ia。Pm荚膜A型菌株毒力强于荚膜D型菌株,经腹腔注射31.5 CFU·mL^(-1) PmA1菌株后的试验组小鼠死亡率为100%。综上表明,34株猪源Pm中流行血清型为荚膜A型和D型,MLST型为ST11,荚膜A型菌株毒力较荚膜D型菌株强,且PFGE分型表明菌株间存在多样性,本研究为多杀性巴氏杆菌病的疫苗研发及防治提供了理论依据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 荚膜分型 MLST分型 PFGE 耐药性
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宁夏地区牛支原体、溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌感染监测与分析
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作者 李家任 郭亚男 +3 位作者 王建东 邵喜成 王学义 何生虎 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5721-5731,共11页
近年来牛呼吸道疾病常被报道,牛呼吸道疾病对牛业有着严重危害,牛呼吸道疾病的大肆流行会为养殖场带来不可逆转的损失。为揭示近年来宁夏回族自治区犊牛呼吸道主要病原体牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia... 近年来牛呼吸道疾病常被报道,牛呼吸道疾病对牛业有着严重危害,牛呼吸道疾病的大肆流行会为养殖场带来不可逆转的损失。为揭示近年来宁夏回族自治区犊牛呼吸道主要病原体牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia hyopneumoniae,Mh)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia,K.pn)的流行情况,本研究采用形态观察结合分子生物学检测方法,对2022—2024年间采集自宁夏地区不同县/区的457份牛鼻拭子及组织样品进行了病原分离及分子生物学检测鉴定病原体。系统分析了宁夏不同年份、不同地区、不同季节、不同生长阶段肉牛感染M.bovis、Mh、Pm、K.pn的情况。结果显示,Pm在四种病原体中检出率最高(38.73%),极显著高于其他三种病原体(P<0.001);中部干旱带M.bovis检出率极显著高于引黄灌区(P<0.01)和南部山区(P<0.001);冬季M.bovis(50%)和K.pn(70.5%)检出率均为最高且极显著高于夏秋季(P<0.001);Pm秋季检出率最高(45.3%),极显著高于冬季(P<0.01)和春季(P<0.001);育成期牛Pm检出率极显著高于哺乳期和成熟期(P<0.001);单一Pm检出率最高(16.85%),显著高于混合感染检出率(P<0.01);Mh+Pm(7.22%)混合感染率最高。本研究从多个角度调查及分析了宁夏地区牛支原体、溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌的发生规律,总结不同时间、地区、生长阶段等因素对牛呼吸系统疾病检出率的影响,为宁夏地区牛呼吸道主要细菌感染防治提供了科学依据。 展开更多
关键词 宁夏地区 牛支原体 溶血性曼氏杆菌 多杀性巴氏杆菌 肺炎克雷伯菌
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多杀性巴氏杆菌:研究现状的回顾与面临的挑战
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作者 江南松 陈红梅 +1 位作者 黄瑜 程龙飞 《福建畜牧兽医》 2025年第3期45-51,共7页
本文对多杀性巴氏杆菌的流行病学、病理机制、诊断技术、耐药性、治疗策略等方面的相关研究进行综述。在流行病学上,阐述全球流行趋势、宿主范围与传播途径及监测方法;病理机制方面,探讨致病因子、免疫逃逸及宿主免疫反应;诊断技术涵盖... 本文对多杀性巴氏杆菌的流行病学、病理机制、诊断技术、耐药性、治疗策略等方面的相关研究进行综述。在流行病学上,阐述全球流行趋势、宿主范围与传播途径及监测方法;病理机制方面,探讨致病因子、免疫逃逸及宿主免疫反应;诊断技术涵盖分子诊断、快速检测及实验室培养鉴定;耐药性研究涉及耐药机制、监测分析及基因传播;治疗策略包括抗生素治疗、疫苗研发及替代疗法;最后对未来研究热点、综合防控策略及面临的挑战与机遇进行展望,旨在为多杀性巴氏杆菌相关研究及防控提供全面参考。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 流行病学 病理机制 诊断技术 耐药性 治疗策略
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猪源多杀性巴氏杆菌OppA蛋白的免疫原性及免疫保护性分析
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作者 袁凌琳 徐晓蓉 +7 位作者 赵自亮 刘霞 倪兴维 徐婷婷 程钟坤 朱桓奕 杨晓伟 赵光伟 《西南大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第11期111-120,共10页
为探究猪源多杀性巴氏杆菌寡肽渗透酶A(oligopeptide permease A,OppA)的免疫原性和免疫保护性,通过对OppA基因克隆与原核表达,鉴定重组蛋白的免疫活性,而后将其免疫SPF小鼠通过ELISA方法检测血清中特异性IgG抗体水平和细胞因子IL-2、T... 为探究猪源多杀性巴氏杆菌寡肽渗透酶A(oligopeptide permease A,OppA)的免疫原性和免疫保护性,通过对OppA基因克隆与原核表达,鉴定重组蛋白的免疫活性,而后将其免疫SPF小鼠通过ELISA方法检测血清中特异性IgG抗体水平和细胞因子IL-2、TNF-α的动态变化,评估其免疫原性,进而对小鼠进行攻毒保护性试验,通过存活时间和主要脏器组织病理变化分析其免疫保护性。结果表明:OppA蛋白为含有21个B细胞抗原表位的稳定蛋白,原核表达并变、复性处理后能与小鼠抗多杀性巴氏杆菌阳性血清发生结合反应;通过重组蛋白免疫小鼠后7 d、21 d和35 d,血清中OppA特异性IgG抗体均显著高于未免疫组;细胞因子IL-2的变化与抗体相似,均显著升高;TNF-α首免后显著下降,在二免、三免后与未免疫组无显著差异。保护性试验结果显示未免疫组小鼠在攻毒后24 h内全部死亡,免疫组小鼠24 h内死亡7只,剩余3只观察期内存活,存活率30%;病理组织学观察发现两组死亡小鼠的肝脏、脾脏和肺脏均出现典型的病理变化(出血、炎性细胞浸润等),但免疫组小鼠病变程度较轻。表明猪源多杀性巴氏杆菌OppA蛋白具有良好的免疫原性,能够刺激小鼠产生免疫应答,具有一定的免疫保护效果。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 OppA蛋白 免疫原性 免疫保护性
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基于PK/PD模型对甲砜霉素粉在鸡口服给药方案药效再评价
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作者 谷日飞 张思微 +5 位作者 赵志杰 宋伟硕 张峻铭 马晓茹 高嫣珺 卜仕金 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期4007-4017,共11页
通过开展甲砜霉素粉在鸡口服给药的体内药动学试验获得有关药动学参数,结合蒙特卡洛模拟(MCS),评估甲砜霉素粉在鸡临床推荐给药方案的合理性。设静脉注射组(10 mg·kg^(-1),按体重计算)和口服低、高剂量组(10、20 mg·kg^(-1),... 通过开展甲砜霉素粉在鸡口服给药的体内药动学试验获得有关药动学参数,结合蒙特卡洛模拟(MCS),评估甲砜霉素粉在鸡临床推荐给药方案的合理性。设静脉注射组(10 mg·kg^(-1),按体重计算)和口服低、高剂量组(10、20 mg·kg^(-1),按体重计算)3组,预定时间采集血样,采用经验证的鸡血浆中甲砜霉素含量HPLC测定方法检测鸡血浆中甲砜霉素的浓度。拟合甲砜霉素在鸡体内药动学参数,建立甲砜霉素对多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)的流行病学临界值(ECOFF),结合甲砜霉素对多杀性巴氏杆菌抑菌、杀菌和清除对应的PK/PD临界值,经MCS获得当前给药方案对多杀性巴氏杆菌不同MIC分布下的达标率(target attainment rate,TAR),进一步优化临床给药方案。结果显示,甲砜霉素10 mg·kg^(-1)(按体重计算)单剂量静注给药后,AUC_(inf)为(14.21±5.69)μg·h·mL^(-1),T_(1/2Z)为(1.85±1.20)h,CL为(803.11±297.78)mL·(kg·h)^(-1),V_(C)为(403.63±93.74)mL·kg^(-1);甲砜霉素粉按10、20 mg·kg^(-1)(按体重计算)单剂量经口灌服给药后,C_(max)分别为(1.70±0.27)μg·mL^(-1)和(3.36±0.98)μg·mL^(-1),T_(max)分别为(1.30±0.48)h和(1.50±0.53)h,AUC_(inf)分别为(5.01±0.80)μg·h·mL^(-1)和(12.38±3.21)μg·h·mL^(-1),T 1/2Z分别为(2.25±1.03)h和(2.31±1.00)h,口服生物利用度分别为33.84%和43.08%。甲砜霉素粉低、高剂量(10、20 mg·kg^(-1),按体重计算)对多杀性巴氏杆菌在ECOFF(2μg·mL^(-1))处抑菌、杀菌和清除的达标率分别为26.96%和86.03%、10.77%和58.89%、9.40%和49.62%,均小于90%。计算获得抑菌、杀菌和清除的达标率所需24 h给药量分别为43.1、66.4和78.1 mg·kg^(-1)(按体重计算)。结果表明,甲砜霉素粉当前在鸡的临床推荐给药方案无法实现对多杀性巴氏杆菌全身感染的细菌学治愈,建议有效的24 h给药推荐量为45 mg·kg^(-1)(按体重计算)。 展开更多
关键词 甲砜霉素粉 PK/PD 多杀性巴氏杆菌 药效再评价
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1例多杀巴斯德氏菌混合非结核分枝杆菌肺部感染病例的病原学分析
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作者 郑文颖 叶硕 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第4期441-446,共6页
目的报道1例多杀巴斯德氏菌混合非结核分枝杆菌肺部感染病例,研究多杀巴斯德氏菌的病原学特征。方法病例为69岁女性,以支气管扩张伴感染入院,行支气管肺泡灌洗液细菌培养、分枝杆菌分离培养及Dano-seq多重病原体检测后,对多杀巴斯德氏... 目的报道1例多杀巴斯德氏菌混合非结核分枝杆菌肺部感染病例,研究多杀巴斯德氏菌的病原学特征。方法病例为69岁女性,以支气管扩张伴感染入院,行支气管肺泡灌洗液细菌培养、分枝杆菌分离培养及Dano-seq多重病原体检测后,对多杀巴斯德氏菌株进行药敏检测、二代测序及分析。结果培养和Dano-seq多重病原体检测出堪萨斯分枝杆菌、多杀巴斯德氏菌。多杀巴斯德氏菌主要的毒力因子有htrB、rfaE、msbA等21个,耐药基因存在floR、sul2、FosA3等10个,MLST分析pmultocida方案分型为ST12。经构建进化树分析发现与国内主要流行株同源。结论传统分离培养联合二代测序的检测方案有助于快速准确地识别少见病原菌,并提供必要的药敏结果,从而促进罕见病的准确诊治。 展开更多
关键词 多杀巴斯德氏菌 人兽共患病 二代测序 进化树
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2018—2023年浙江省禽源巴氏杆菌血清型鉴定与耐药性分析
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作者 蒋利明 许怡臻 +2 位作者 陈怡洁 李双茂 李军星 《中国动物检疫》 2025年第10期42-50,共9页
为了解浙江省禽源多杀性巴氏杆菌的优势血清型及耐药情况,对2018—2023年从浙江省家禽养殖场分离的51株多杀性巴氏杆菌进行系统分析。通过平板划线接种法、PCR技术、乙醇沉淀法、苯酚硫酸法及纸片琼脂扩散法(K-B)等方法,对菌株的荚膜血... 为了解浙江省禽源多杀性巴氏杆菌的优势血清型及耐药情况,对2018—2023年从浙江省家禽养殖场分离的51株多杀性巴氏杆菌进行系统分析。通过平板划线接种法、PCR技术、乙醇沉淀法、苯酚硫酸法及纸片琼脂扩散法(K-B)等方法,对菌株的荚膜血清型、脂多糖血清型、荚膜多糖含量、毒力因子及耐药谱进行了检测。结果显示:所有分离株均为荚膜血清型A型和脂多糖血清型L1型,不同分离株荚膜多糖含量存在显著差异(P<0.05);对10种毒力基因检测发现,除toxA、nanH和tbpA未检出外,其余毒力基因检出率均为100%;耐药性分析显示,25株受试菌株对氨苄西林、强力霉素、阿莫西林等11种抗菌药物保持较高敏感性,而对四环素、卡那霉素、复方新诺明、青霉素等抗菌药物的耐药性较强,其中15株(占60%)表现为多重耐药。结果表明,浙江省禽源多杀性巴氏杆菌荚膜血清型以A型为主,脂多糖血清型以L1型为主,多重耐药菌株比例较高。本研究为禽源多杀性巴氏杆菌感染的临床防控提供了信息支持。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 血清型分型 毒力基因 耐药性 流行病学
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牛溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的PCR检测及分离鉴定
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作者 耿玉静 龚玲朵 +5 位作者 李玉婉 张斐洋 王留幸 韩妙层 郎洪武 汤承 《现代畜牧兽医》 2025年第2期31-35,共5页
为了解溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)在我国牛群中的流行情况,研究对来自四川、宁夏和内蒙古等7个省(自治区)21个牛呼吸道疾病综合征(BRDC)发病牛场的344份鼻腔棉拭子进行分型... 为了解溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)在我国牛群中的流行情况,研究对来自四川、宁夏和内蒙古等7个省(自治区)21个牛呼吸道疾病综合征(BRDC)发病牛场的344份鼻腔棉拭子进行分型检测、细菌分离鉴定及毒力测定。结果显示,344份被检样本Mh和Pm的检出率分别为27.3%和14.8%,混合感染率为28.6%;Mh A1型和Mh A6型占比分别为55.9%(38/68)和44.1%(30/68),Pm荚膜A型和荚膜B型占比分别为66.7%(23/34)和33.3%(11/34);分离获得Mh A1型6株和Mh A6型4株,Pm荚膜A型11株和荚膜B型6株。毒力测定结果显示,4株Mh A6型和1株Mh A1型可部分致死小鼠,最高和最低致死剂量分别为10^(10)、10^(5) CFU/mL;17株Pm分离株均能够100%致死小鼠,最高和最低致死剂量分别为10^(6)、10 CFU/mL。研究表明,Mh和Pm是引起当地牛BRDC的重要病原菌,混合感染较为普遍,Mh A1型的流行率高于Mh A6型,但Mh A6型的毒力高于Mh A1型。Pm荚膜A型的检出率高于Pm荚膜B型。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 溶血性曼氏杆菌 细菌分离鉴定 血清型 致病性
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牛MB、MH、PM三重PCR检测方法的建立与应用
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作者 沈思思 江波涛 +9 位作者 刘雪松 冯万宇 兰世捷 张蕾 苗艳 李丹 张国华 王欢 王岩 陈亮 《东北农业大学学报》 北大核心 2025年第2期72-79,共8页
为建立可同时检测牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,MH)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,PM)的三重PCR检测方法,试验采用上述3种病原体对应的copD/F(MB)、lktc(MH)、kmt(PM)基因设计特异... 为建立可同时检测牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,MH)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,PM)的三重PCR检测方法,试验采用上述3种病原体对应的copD/F(MB)、lktc(MH)、kmt(PM)基因设计特异性引物。通过筛选退火温度和引物质量浓度,验证方法特异性、敏感性和重复性,建立可同时检测MB、MH和PM的三重PCR检测方法,并初步应用于临床。结果表明:该方法特异性强,仅对MB、MH和PM有特异性扩增,方法最适退火温度为52.5℃,最适引物质量浓度为1.0 mg·L^(-1);对3种病原体最低检出限MB为1.75×10^(3)拷贝数·μL^(-1)、MH为1.34×10^(4)拷贝数·μL^(-1)、PM为1.96×10^(4)拷贝数·μL^(-1),利用该三重PCR和单项PCR分别检测黑龙江省268份临床样本,显示三重PCR阳性检出率MB为28.73%(77/268)、MH为13.43%(36/268)、PM为20.52%(55/268)。混合感染以MB和PM为主,感染率为8.96%(24/268);其次为MB和MH,感染率为6.72%(18/268);MH和PM感染率为3.36%(9/268);同时感染3种病原体的感染率为1.12%(3/268)。三重PCR扩增结果与单项PCR检测结果总符合率为92.84%。说明建立的三重PCR可为MB、MH和PM临床快速检测及流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 牛 牛支原体 溶血性曼氏杆菌 多杀性巴氏杆菌 三重PCR
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猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及毒力基因检测
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作者 张蕾 陈亮 +7 位作者 高圣玥 冯万宇 苗艳 兰世捷 沈思思 田秋丰 白长胜 黄宣凯 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期66-73,共8页
对某猪场育肥猪发生的疑似猪肺疫病例进行病原菌的分离鉴定及毒力基因检测,无菌采集病死猪肺脏组织进行细菌分离,以不同培养基培养后进行革兰氏染色,采用微量生化试管培养法对其进行生化试验,采用16S rRNA测序和kmtⅠ基因鉴定法对其进... 对某猪场育肥猪发生的疑似猪肺疫病例进行病原菌的分离鉴定及毒力基因检测,无菌采集病死猪肺脏组织进行细菌分离,以不同培养基培养后进行革兰氏染色,采用微量生化试管培养法对其进行生化试验,采用16S rRNA测序和kmtⅠ基因鉴定法对其进行鉴定,并以多重PCR对其进行荚膜血清分型,通过K-B法检测其药物敏感性,同时检测其毒力因子和耐药基因的携带情况,并进行分离菌的小鼠致病性试验。结果显示,致病菌为荚膜A型多杀性巴氏杆菌,在血平板上长成淡灰白色、圆形、光滑湿润的凸起菌落,在马丁肉汤琼脂培养基上呈圆润微凸起、白色半透明的菌落;生化特性与多杀性巴氏杆菌相符;分离菌不仅携带oma87、plpB、ompA等13种高检出率毒力基因,还携带猪源A型该菌较少检出的pfhA、hsf-1、hgbA和pmHAS毒力基因;分离菌对四环素等10种药物高度敏感,对氨苄西林等6种药物中度敏感,对恩诺沙星等7种药物耐药;其携带大环内酯类耐药基因(ermC)和氨基糖胺类耐药基因(strA、strB、aacA4和aadB);小鼠致病性试验结果显示,该菌具有一定的致病性。研究结果为养殖业多杀性巴氏杆菌病的诊断和治疗提供参考依据。 展开更多
关键词 猪 多杀性巴氏杆菌 分离鉴定 病原特性
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