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一种E.coli-Free的酵母同源重组系统稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的新方法
被引量：
3
1
作者
庹德财
沈文涛
+2 位作者
言普
黎小瑛
周鹏
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2017年第8期1492-1500,共9页
侵染性克隆是研究病毒的重要工具,而偏大的病毒基因组及其在大肠杆菌中的不稳定给构建侵染性克隆造成很大困难。通常采用插入内含子和酵母同源重组等方式可以获得稳定克隆,但本实验最初利用酵母同源重组系统并未成功构建番木瓜畸形花叶...
侵染性克隆是研究病毒的重要工具,而偏大的病毒基因组及其在大肠杆菌中的不稳定给构建侵染性克隆造成很大困难。通常采用插入内含子和酵母同源重组等方式可以获得稳定克隆,但本实验最初利用酵母同源重组系统并未成功构建番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV)的侵染性克隆。经研究证实,该不稳定现象确实存在于大肠杆菌中,而非酵母和农杆菌细胞。通过改良酵母同源重组方法,成功构建了有/无内含子intron 2的PLDMV侵染性克隆p35S-FL和p35S-FL-In2,农杆菌注射接种番木瓜均发病,侵染效率达64.7%~69.7%。本研究通过酵母同源重组质粒直接转化农杆菌,建立了一种10 d内即可稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的E.coli-Free酵母同源重组新方法。该方法对其他在大肠杆菌中不稳定的植物病毒侵染性克隆的构建具有重要意义。
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关键词
酵母同源重组
番木瓜畸形花叶病毒
侵染性克隆
不稳定性
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职称材料
原核表达dsRNA抗番木瓜畸形花叶病毒的研究
被引量：
2
2
作者
张涛
沈文涛
+2 位作者
言普
黎小瑛
周鹏
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2014年第7期1416-1423,共8页
番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）是一种已对番木瓜种植业构成潜在威胁的新型病害,在转基因植物备受争议的背景下,利用原核表达的dsRNA来防控病毒的策略不失为一种新的选择.本文选取PLDMV CP基因全长（...
番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）是一种已对番木瓜种植业构成潜在威胁的新型病害,在转基因植物备受争议的背景下,利用原核表达的dsRNA来防控病毒的策略不失为一种新的选择.本文选取PLDMV CP基因全长（879 bp）,运用OZ-LIC法构建了含有pdk内含子的ihpRNA结构,将其嵌入原核表达载体pSP73中,并转化RNaseⅢ缺陷型大肠杆菌M-Jm109LacY,构建了1种能高表达dsRNA的原核表达菌株M-Jm109LacY-CP879,以终浓度为0.4 mmol/LIPTG诱导后能够稳定高效的表达CP879-dsRNA.研究共设2个处理：保护性处理与治疗性处理.分别用含有CP879-dsRNA的粗提液对这2个处理的番木瓜植株进行喷施处理,通过统计发病率、观察病症变化以及ELISA分析结果表明,保护性处理能有效抑制番木瓜畸形花叶病毒的侵染,主要表现为发病时间推迟和相对较低的发病率;治疗性处理植株的病毒积累量会在喷施后第3～12天内出现暂时性的降低.结果表明,保护效果优于治疗效果,若每月喷施2～3次dsRNA粗提液,有望能够有效地预防PLDMV的侵染.
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关键词
番木瓜畸形花叶病毒
原核表达
DSRNA
RNA沉默
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职称材料
番木瓜感染畸形花叶病毒后的生理变化及扫描电镜观察
被引量：
6
3
作者
安娜
张荣萍
陈萍
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期714-720,共7页
【目的】阐明番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)的侵染机理及侵染后番木瓜自身防御体系对抗病毒的作用机制,为番木瓜病毒病防治提供参考。【方法】以台农二号番木瓜为材料,通过RTPCR检测接种PLDMV处理组(T...
【目的】阐明番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)的侵染机理及侵染后番木瓜自身防御体系对抗病毒的作用机制,为番木瓜病毒病防治提供参考。【方法】以台农二号番木瓜为材料,通过RTPCR检测接种PLDMV处理组(T)与健康空白对照组(CK)的病毒感染情况,采用分光光度法测定PLDMV侵染对番木瓜相关生理指标的影响,运用扫描电镜法观察两组番木瓜叶片的微观结构差异。【结果】通过RT-PCR检测,证明T番木瓜植株已感染PLDMV。T与CK番木瓜叶片在表征、微观解剖结构及生理指标等方面均存在明显差异,与CK番木瓜叶片相比,T番木瓜叶片纵切面栅海比及背部绒毛密度明显小于CK番木瓜,气孔密度大于CK番木瓜;T番木瓜的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性和脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、超氧阴离子(O)含量均显著高于CK番木瓜(P<0.05,下同),过氧化氢酶(CAT)活性和叶绿素(Chl)含量显著低于CK番木瓜,而超氧化物歧化酶(SOD)和几丁质酶活性两组间无显著差异(P>0.05)。【结论】番木瓜受PLDMV侵染后,其叶片结构被破坏,细胞毒害损伤严重,体内代谢紊乱,多种代谢调节平衡被打破,番木瓜的正常生长发育受阻。
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关键词
番木瓜
番木瓜畸形花叶病毒(
pldmv
)
扫描电镜
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职称材料
题名
一种E.coli-Free的酵母同源重组系统稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的新方法
被引量：
3
1
作者
庹德财
沈文涛
言普
黎小瑛
周鹏
机构
中国热带农业科学院热带生物技术研究所
出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2017年第8期1492-1500,共9页
基金
海南省自然科学基金面上项目(No.20163121)
文摘
侵染性克隆是研究病毒的重要工具,而偏大的病毒基因组及其在大肠杆菌中的不稳定给构建侵染性克隆造成很大困难。通常采用插入内含子和酵母同源重组等方式可以获得稳定克隆,但本实验最初利用酵母同源重组系统并未成功构建番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV)的侵染性克隆。经研究证实,该不稳定现象确实存在于大肠杆菌中,而非酵母和农杆菌细胞。通过改良酵母同源重组方法,成功构建了有/无内含子intron 2的PLDMV侵染性克隆p35S-FL和p35S-FL-In2,农杆菌注射接种番木瓜均发病,侵染效率达64.7%~69.7%。本研究通过酵母同源重组质粒直接转化农杆菌,建立了一种10 d内即可稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的E.coli-Free酵母同源重组新方法。该方法对其他在大肠杆菌中不稳定的植物病毒侵染性克隆的构建具有重要意义。
关键词
酵母同源重组
番木瓜畸形花叶病毒
侵染性克隆
不稳定性
Keywords
Yeast homologous recombination
papaya
leqfdistortion
mosaic
virus
（
pldmv
）
infectious clone
instability
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
原核表达dsRNA抗番木瓜畸形花叶病毒的研究
被引量：
2
2
作者
张涛
沈文涛
言普
黎小瑛
周鹏
机构
海南大学农学院
中国热带农业科学院热带生物技术研究所
中国热带农业科学院分析测试中心
出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2014年第7期1416-1423,共8页
基金
国家自然科学基金(No.31171822)
海南省重点科技计划(No.ZDXM20120027)
海南省重大科技专项(No.ZDZX2013023-1-08)
文摘
番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）是一种已对番木瓜种植业构成潜在威胁的新型病害,在转基因植物备受争议的背景下,利用原核表达的dsRNA来防控病毒的策略不失为一种新的选择.本文选取PLDMV CP基因全长（879 bp）,运用OZ-LIC法构建了含有pdk内含子的ihpRNA结构,将其嵌入原核表达载体pSP73中,并转化RNaseⅢ缺陷型大肠杆菌M-Jm109LacY,构建了1种能高表达dsRNA的原核表达菌株M-Jm109LacY-CP879,以终浓度为0.4 mmol/LIPTG诱导后能够稳定高效的表达CP879-dsRNA.研究共设2个处理：保护性处理与治疗性处理.分别用含有CP879-dsRNA的粗提液对这2个处理的番木瓜植株进行喷施处理,通过统计发病率、观察病症变化以及ELISA分析结果表明,保护性处理能有效抑制番木瓜畸形花叶病毒的侵染,主要表现为发病时间推迟和相对较低的发病率;治疗性处理植株的病毒积累量会在喷施后第3～12天内出现暂时性的降低.结果表明,保护效果优于治疗效果,若每月喷施2～3次dsRNA粗提液,有望能够有效地预防PLDMV的侵染.
关键词
番木瓜畸形花叶病毒
原核表达
DSRNA
RNA沉默
Keywords
papaya
leaf distortion
mosaic
virus
（
pldmv
）
Prokaryotic expression system
dsRNA
RNA silencing
分类号
S667.97 [农业科学—果树学]
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职称材料
题名
番木瓜感染畸形花叶病毒后的生理变化及扫描电镜观察
被引量：
6
3
作者
安娜
张荣萍
陈萍
机构
海南大学热带农林学院
出处
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期714-720,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31560544)
海南省自然科学基金项目(317009)
海南省教育厅高等学校科学研究项目(HNJG2014-05)
文摘
【目的】阐明番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)的侵染机理及侵染后番木瓜自身防御体系对抗病毒的作用机制,为番木瓜病毒病防治提供参考。【方法】以台农二号番木瓜为材料,通过RTPCR检测接种PLDMV处理组(T)与健康空白对照组(CK)的病毒感染情况,采用分光光度法测定PLDMV侵染对番木瓜相关生理指标的影响,运用扫描电镜法观察两组番木瓜叶片的微观结构差异。【结果】通过RT-PCR检测,证明T番木瓜植株已感染PLDMV。T与CK番木瓜叶片在表征、微观解剖结构及生理指标等方面均存在明显差异,与CK番木瓜叶片相比,T番木瓜叶片纵切面栅海比及背部绒毛密度明显小于CK番木瓜,气孔密度大于CK番木瓜;T番木瓜的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性和脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、超氧阴离子(O)含量均显著高于CK番木瓜(P<0.05,下同),过氧化氢酶(CAT)活性和叶绿素(Chl)含量显著低于CK番木瓜,而超氧化物歧化酶(SOD)和几丁质酶活性两组间无显著差异(P>0.05)。【结论】番木瓜受PLDMV侵染后,其叶片结构被破坏,细胞毒害损伤严重,体内代谢紊乱,多种代谢调节平衡被打破,番木瓜的正常生长发育受阻。
关键词
番木瓜
番木瓜畸形花叶病毒(
pldmv
)
扫描电镜
Keywords
Carica
papaya
L.
papaya
leaf-distortion
mosaic
virus
(
pldmv
)
scanning electron microscope
分类号
S668.2 [农业科学—果树学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种E.coli-Free的酵母同源重组系统稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的新方法
庹德财
沈文涛
言普
黎小瑛
周鹏
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2017
3
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职称材料
2
原核表达dsRNA抗番木瓜畸形花叶病毒的研究
张涛
沈文涛
言普
黎小瑛
周鹏
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2014
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
番木瓜感染畸形花叶病毒后的生理变化及扫描电镜观察
安娜
张荣萍
陈萍
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
6
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