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表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1单核细胞自噬和凋亡 被引量：4
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作者 陆娟 邹治情 +7 位作者 夏雯 戴晓玥 席月 丁龙坤 张敏 吴亮 阴晴 许化溪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期406-414,共9页
目的研究表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1细胞自噬和凋亡机制。方法在大肠杆菌中表达重组杀白细胞素(rPVL),并免疫家兔制备多克隆抗血清。采用反转录PCR和Western blot法鉴定表达PVL的耐甲氧西林金黄... 目的研究表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1细胞自噬和凋亡机制。方法在大肠杆菌中表达重组杀白细胞素(rPVL),并免疫家兔制备多克隆抗血清。采用反转录PCR和Western blot法鉴定表达PVL的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。分别使用表达PVL的MRSA(MRSA^(PVL+))和不表达PVL的MRSA(MRSA^(PVL-))感染THP-1细胞,于感染后1、3、6 h收集细胞,采用实时定量PCR检测自噬相关基因3(ATG3)、ATG4B、ATG5、ATG7、ATG12;Western blot法检测beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、caspase-3的蛋白水平;二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针负载法检测细胞活性氧(ROS)水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功制备PVL多克隆抗体,鉴定出1株MRSA^(PVL-)菌和1株MRSA^(PVL+)菌。分别以两株菌与THP-1细胞共培养1 h,MRSA^(PVL+)组仅ATG7表达量显著高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组;共培养3 h,MRSA^(PVL+)组ATG7和ATG12表达量高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组,其他基因表达量变化不明显。感染1、3、6 h,MRSA^(PVL+)感染组细胞PI3K、AKT和mTOR磷酸化水平显著低于MRSA^(PVL-)感染组和正常对照组;感染1 h和3 h,MRSA^(PVL-)感染组细胞PI3K、AKT和mTOR磷酸化水平显著低于正常对照组;感染6 h,MRSA^(PVL-)菌感染组细胞mTOR磷酸化水平显著低于正常对照组。感染1、3、6 h,MRSA^(PVL+)组细胞ROS水平和凋亡率均高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组,且随着感染时间的延长细胞ROS水平和凋亡率持续增加;MRSA^(PVL-)组细胞ROS水平和凋亡率也高于正常对照组。结论MRSA^(PVL+)对THP-1细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制作用更强,可促进ATG12/ATG7/ATG5自噬通路活化增加THP-1细胞自噬;同时,MRSA^(PVL+)诱导THP-1细胞ROS产生增加,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) panton-valentine杀白细胞素(pvl) 巨噬细胞 自噬 凋亡
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全国多中心细菌耐药监测网中血流感染相关金黄色葡萄球菌的分子流行病学研究 被引量：27
2
作者 毛镭篥 肖盟 +2 位作者 王贺 赵颖 徐英春 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期120-125,共6页
目的首次研究全国多中心血流感染相关金黄色葡萄球菌(金葡菌)的分子流行病学特征。方法全国17省市34所医院共149株血流感染相关的金葡菌,分析杀白细胞毒素(pvl)基因,多位点序列分型(MLST)和spa分型(编码葡萄球菌A蛋白)及甲氧西林耐药金... 目的首次研究全国多中心血流感染相关金黄色葡萄球菌(金葡菌)的分子流行病学特征。方法全国17省市34所医院共149株血流感染相关的金葡菌,分析杀白细胞毒素(pvl)基因,多位点序列分型(MLST)和spa分型(编码葡萄球菌A蛋白)及甲氧西林耐药金葡菌(MRSA)琼脂稀释法的药敏结果。结果受试菌计有71株MRSA和78株甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)。pvl阳性株为11株,MRSA只占1株。MLST显示有23种不同的序列型(ST)结果,MRSA含6种ST分型,主要型别为ST239及ST5;MSSA有20种ST分型,但是各型别比例均不超过15%。spa分型共45种型别,MRSA含8种型别,优势型别为t030和t037;MSSA有38种型别,优势型别为t091和t189。MRSA对常用抗菌药物耐药率依次为环丙沙星91.18%,左氧氟沙星91.18%,红霉素76.47%,莫西沙星73.53%,克林霉素70.59%,利福平58.82%,甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑17.65%;对利奈唑胺、万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁、替加环素等药物均100%敏感。结论血流感染相关MRSA传播的优势型别为ST239-t037和ST239-t030,并对多种抗菌药物存在不同程度耐药,需加强细菌耐药性监测。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 panton-valentine杀白细胞素基因 多位点序列分型 葡萄球菌A蛋白分型 多重聚合酶链反应 药敏试验
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金黄色葡萄球菌主要毒力因子对宿主固有免疫系统的影响 被引量：5
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作者 廖明喻 逄龙 +1 位作者 杨娅丽 马笑雪 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第5期102-107,共6页
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),简称金葡菌,是重要的人类病原菌,是世界范围内细菌感染的主要原因。金葡菌通过产生多种毒素如p-v杀白细胞素(panton-valentine leukocidin,PVL),引起固有免疫细胞如巨噬细胞、中性粒细胞释放多... 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),简称金葡菌,是重要的人类病原菌,是世界范围内细菌感染的主要原因。金葡菌通过产生多种毒素如p-v杀白细胞素(panton-valentine leukocidin,PVL),引起固有免疫细胞如巨噬细胞、中性粒细胞释放多种促炎因子导致机体炎症损伤,并诱导这些细胞发生凋亡坏死,而高效地逃避固有免疫系统的识别和消除,引起严重的感染性疾病。本文综述了金葡菌产生的alpha溶血素、PVL、可溶性调控蛋白(Phenol-soluble Modulin,PSM)和Staphopain的促炎机制及对宿主固有免疫细胞的杀伤作用,为临床治疗金葡菌引起的感染提供参考。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 alpha溶血素 p-v杀白细胞素(pvl) 可溶性调控蛋白(PSM) 半胱氨酸蛋白酶
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