大肠杆菌FliC蛋白D0/D1结构域与Pal蛋白融合蛋白的生物信息学分析及原核表达

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作者 陈洪 车业贵 +6 位作者 陈长春 丁小丽 邱树磊 陆辉 王永娟 温洪伟 周子祥 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4894-4903,共10页

【目的】构建并表达大肠杆菌FliC蛋白D0/D1结构域与Pal蛋白的融合蛋白,为开发新型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)疫苗提供研究基础。【方法】分析GenBank数据库中大肠杆菌O1血清型菌株的FliC及Pal蛋白氨基... 【目的】构建并表达大肠杆菌FliC蛋白D0/D1结构域与Pal蛋白的融合蛋白,为开发新型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)疫苗提供研究基础。【方法】分析GenBank数据库中大肠杆菌O1血清型菌株的FliC及Pal蛋白氨基酸序列特征,选择FliC蛋白的D0/D1结构域(N-端5-140位氨基酸和C-端499-583位氨基酸)及Pal蛋白主要结构(21-173位氨基酸)构建“三明治型”融合蛋白。对融合蛋白进行理化性质、二级结构、三级结构、抗原性、致敏性及线性和不连续表位预测。通过分子对接和免疫模拟分别评估融合蛋白与免疫受体的结合能力及免疫效果。合成融合蛋白碱基序列并使用pET-28a(+)进行载体构建,采用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行融合蛋白表达,利用镍-琼脂糖凝胶6FF纯化融合蛋白并进行复性,通过Western blotting验证融合蛋白的反应原性。【结果】融合蛋白分子质量为42.72 ku,是亲水蛋白;α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占48.79%、14.25%、6.76%和30.19%,其中α-螺旋主要处于FliC蛋白D0/D1结构域;三级结构拉氏图显示,优势区域中含有的残基数占96.9%。该融合蛋白具有良好的抗原性,无致敏性,含有8个线性表位和5个不连续表位。该融合蛋白与Toll样受体2、4、5均能进行分子对接,且免疫模拟结果显示,该蛋白能引起良好的体液免疫和细胞免疫。经PCR鉴定和测序确定嵌合基因FliCN-Pal-FliCC阳性单克隆并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,成功表达纯化出融合蛋白FliCN-Pal-FliCC。融合蛋白能与大肠杆菌O1血清型阳性小鼠的血清发生反应。【结论】本研究成功构建并表达了以APEC O1血清型的FliC和Pal蛋白为基础的“三明治”型融合蛋白FliCN-Pal-FliCC,为研发APEC疫苗候选抗原提供研究基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌 FliC蛋白 结构域 pal蛋白 融合蛋白 生物信息学分析

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套袋对枇杷果实PAL、PPO、POD活性和可溶性蛋白质含量的影响 被引量：27

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作者 郑少泉 蒋际谋 +5 位作者 张泽煌 陈秀萍 许家辉 刘友接 许秀淡 黄金松 《福建农业学报》 CAS 2001年第3期45-47,共3页

以解放钟枇杷套袋后的果实为试材 ,在果锈发生严重期至成熟期 ,每隔 10 d定期测定套袋果与不套袋果果实中 PAL、PPO、POD活性及可溶性蛋白质含量。结果表明 ,套袋后 ,果实中的 PAL、PPO、POD活性提高 ,可溶性蛋白质含量下降 ;PAL、PPO、... 以解放钟枇杷套袋后的果实为试材 ,在果锈发生严重期至成熟期 ,每隔 10 d定期测定套袋果与不套袋果果实中 PAL、PPO、POD活性及可溶性蛋白质含量。结果表明 ,套袋后 ,果实中的 PAL、PPO、POD活性提高 ,可溶性蛋白质含量下降 ;PAL、PPO、POD活性的提高 ,可抑制果锈的发生 ;PAL 活性提高有利于套袋果实的着色 ; 展开更多

关键词 枇杷 苯丙氨酸解氨酶 多酚氧化酶 过氧化物酶 可溶性蛋白质 果实套袋 酶活性 含量测定

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Harpins诱导苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性防治大豆疫霉根腐病研究 被引量：7

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作者 申宏波 胡志凤 +3 位作者 丁俊杰 于永梅 顾鑫 杨晓贺 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期526-528,共3页

为明确Harpins蛋白对大豆疫霉根腐病的抗病机制,对抗感不同大豆品种幼苗喷施Harpins蛋白,并测定喷施后120 h内大豆根系中苯丙氨酸解氨酶(PAL)的动态变化。结果表明:大豆喷施harpins蛋白后,根中PAL活性较对照增加,其中感病类型品种增加... 为明确Harpins蛋白对大豆疫霉根腐病的抗病机制,对抗感不同大豆品种幼苗喷施Harpins蛋白,并测定喷施后120 h内大豆根系中苯丙氨酸解氨酶(PAL)的动态变化。结果表明:大豆喷施harpins蛋白后,根中PAL活性较对照增加,其中感病类型品种增加幅度较大;在喷施Harpins蛋白后120 h内,感病品种的PAL活性呈先增加后降低的趋势,并于喷施后72 h达到峰值,而抗病品种的PAL活性呈缓慢增加趋势。 展开更多

关键词 大豆 疫霉根腐病 Harpins蛋白 pal酶

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OsPAL2;3对水稻化感抑制稗草能力的调控作用 被引量：4

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作者 李兰兰 母丹 +3 位作者 严雪 杨陆可 林文雄 方长旬 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期197-209,共13页

苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL,EC 4.3.1.5)是调控酚酸类化感物质合成的关键酶。PAL在水稻中为多基因家族,化感水稻PI312777和非化感水稻Lemont中,相同PAL基因成员的启动子组成序列均存在差异,并以OsPAL2;3、OsPAL2;... 苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL,EC 4.3.1.5)是调控酚酸类化感物质合成的关键酶。PAL在水稻中为多基因家族,化感水稻PI312777和非化感水稻Lemont中,相同PAL基因成员的启动子组成序列均存在差异,并以OsPAL2;3、OsPAL2;4基因启动子序列的差异最大,且PI321777的OsPAL2;3基因启动子的驱动活性高于Lemont。过表达OsPAL2;3基因,使PI312777和Lemont的抑草率分别提高11.11%和5.56%。过表达OsPAL2;3同时增强OsPAL2;3、OsC4H、OsCCA、OsCOL、OsOMT等基因的表达,增加水稻的原儿茶酸和香草酸含量。Co-IP结合质谱鉴定结果显示,OsPAL2;3蛋白与转酮醇酶、碳酸酐酶、果糖二磷酸醛缩酶、ATP合酶α亚基、ATP合酶β亚基等相互作用,调控水稻的苯丙氨酸代谢途径。本研究表明,OsPAL2;3的转录水平高低是P1312777和Lemont化感抑草能力差异的原因之一;OsPAL2;3与多个蛋白互作共同调控酚酸类化合物合成,该基因可用于提高水稻化感抑草能力的育种研究。 展开更多

关键词 水稻 化感作用 pal基因 启动子 酚酸 蛋白互作

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谷子PAL基因家族全基因组的鉴定和表达分析 被引量：3

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作者 孟亚轩 孙颖琦 +3 位作者 赵心月 王凤霞 瓮巧云 刘颖慧 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1572-1581,共10页

苯丙氨酸解氢酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)基因家族参与苯丙烷类代谢过程,通过调控植物抗病次生物质的合成在植物抗逆反应中发挥重要作用。为明确谷子PAL基因家族在逆境胁迫下的表达规律,该研究利用生物信息学方法对谷子PAL基... 苯丙氨酸解氢酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)基因家族参与苯丙烷类代谢过程,通过调控植物抗病次生物质的合成在植物抗逆反应中发挥重要作用。为明确谷子PAL基因家族在逆境胁迫下的表达规律,该研究利用生物信息学方法对谷子PAL基因家族进行鉴定和表达分析。结果表明:谷子具有11个PAL基因,在进化树中可分为3个亚家族,SiPAL7独自进化为一支。通过构建蛋白结构域发现PAL基因家族成员均含有保守的PAL结构域。启动子分析显示,PAL基因含有应答激素、逆境胁迫等多种因子的顺式作用元件,说明PAL基因广泛参与不同生物学调控过程。RT-qPCR结果显示,谷子PAL基因家族多为诱导型表达,不同光照条件下PAL基因表达量变化明显,不同基因具有不同响应模式,说明谷子PAL基因家族在参与光调节反应中发挥重要作用。谷子PAL基因高度保守,广泛响应不同非生物胁迫,具有表达特异性。该研究结果为揭示PAL基因家族在调节谷子抗性及胁迫应答过程中的作用提供了参考。 展开更多

关键词 谷子 pal基因家族 生物信息学分析 蛋白结构 表达分析

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应用RACE法克隆雷竹笋PAL基因及序列分析

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作者 张规富 汪浩 《江西农业学报》 CAS 2018年第1期1-6,共6页

应用RACE法,克隆获得了雷竹笋PAL基因的全长序列,并对其进行了生物信息学分析。结果表明:雷竹笋PAL基因的开放阅读框长度为2103 bp,共编码701个氨基酸,其中具有1个保守的活性位点Ala-Ser-Gly(A-S-G);在PAL蛋白的二级结构中含有大量的α... 应用RACE法,克隆获得了雷竹笋PAL基因的全长序列,并对其进行了生物信息学分析。结果表明:雷竹笋PAL基因的开放阅读框长度为2103 bp,共编码701个氨基酸,其中具有1个保守的活性位点Ala-Ser-Gly(A-S-G);在PAL蛋白的二级结构中含有大量的α螺旋和β折叠,其三级结构模型为一个带柄的圆锥形。构建的PAL基因核苷酸序列进化树结果显示雷竹与毛竹、绿竹的亲缘关系最近,与小麦、大麦、水稻、佛肚竹的亲缘关系较近,与玉米、高粱的亲缘关系较远。 展开更多

关键词 雷竹笋 RACE技术 克隆 pal基因 序列分析 蛋白质结构

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药物处理对疯枣枝过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶活性的影响 被引量：8

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作者 赵进红 王玉山 +5 位作者 冯殿齐 牛庆霖 张丽君 王爱喜 赵勇 罗磊 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第3期360-364,共5页

通过不同药物处理,测定枣疯枝中可溶性蛋白质含量、过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶活性的变化规律。结果表明:吲哚乙酸可促进过氧化物酶活性增强,吲哚乙酸浓度与过氧化物酶活性呈显著正相关。适宜浓度的土霉素和吲哚乙酸可以大大增强与抗... 通过不同药物处理,测定枣疯枝中可溶性蛋白质含量、过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶活性的变化规律。结果表明:吲哚乙酸可促进过氧化物酶活性增强,吲哚乙酸浓度与过氧化物酶活性呈显著正相关。适宜浓度的土霉素和吲哚乙酸可以大大增强与抗枣疯病密切相关的过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶的酶活性。枣疯枝中可溶性蛋白质含量降低,过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶活性提高。该两种酶可作为抗枣疯病品种选择的重要指标。 展开更多

关键词 枣疯病 过氧化物酶 苯丙氨酸解氨酶 可溶性蛋白质

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新几内亚凤仙花瓣发育过程中花色素苷及其相关生化物质含量的研究 被引量：8

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作者 陈段芬 张岩 方正 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期28-32,共5页

为进一步探索花色素苷及其合成过程中某些生化物质含量的关系,将新几内亚凤仙花瓣发育分为8个阶段,通过测定各阶段花瓣中可溶性糖、可溶性蛋白质和脱镁叶绿素的含量以及苯丙氨酸解氨酶活性来探讨上述因素对花色素苷积累的影响。结果表明... 为进一步探索花色素苷及其合成过程中某些生化物质含量的关系,将新几内亚凤仙花瓣发育分为8个阶段,通过测定各阶段花瓣中可溶性糖、可溶性蛋白质和脱镁叶绿素的含量以及苯丙氨酸解氨酶活性来探讨上述因素对花色素苷积累的影响。结果表明:花瓣发育过程中,花色素苷含量在花蕾即将开放时达到最高值;花色素苷合成的关键时期在花瓣发育的前4个阶段;可溶性糖、可溶性蛋白质和叶绿素含量以及苯丙氨酸解氨酶活性与花色素苷的累积均有一定相关性;花未开放之前,随着花色素苷含量的增加,可溶性糖含量增加,而可溶性蛋白质含量下降;苯丙氨酸解氨酶在花瓣发育前期表现出较高活性,其峰值均先于花色素苷的峰值出现;脱镁叶绿素的降解有助于花色素苷的合成。 展开更多

关键词 新几内亚风仙 花色素苷 可溶性糖 可溶性蛋白质 苯丙氨酸解氨酶(pal) 脱镁叶绿素

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穗花狐尾藻生长及酚类物质含量对光照强度的响应研究 被引量：8

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作者 葛芳杰 刘碧云 +2 位作者 鲁志营 高云霓 吴振斌 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期30-33,54,共5页

沉水植物穗花狐尾藻(Myriophyllum spicatum)能产生对水华蓝藻生长有抑制效应的酚类活性物质。为了揭示光照强度对穗花狐尾藻的生长及其体内酚类物质含量的影响,文章研究了不同光照强度下穗花狐尾藻的生物量及其顶端组织与茎中的可溶性... 沉水植物穗花狐尾藻(Myriophyllum spicatum)能产生对水华蓝藻生长有抑制效应的酚类活性物质。为了揭示光照强度对穗花狐尾藻的生长及其体内酚类物质含量的影响,文章研究了不同光照强度下穗花狐尾藻的生物量及其顶端组织与茎中的可溶性糖、可溶性蛋白、总酚的含量以及与酚类代谢相关酶——苯丙氨酸裂解酶(Phenylalanine ammonia-lyase,PAL)的活性,结果表明:穗花狐尾藻生物量随着光照强度的减弱而显著降低;高光照强度和中等光照强度下,顶端组织中可溶性蛋白、总酚含量和PAL酶活都明显高于茎中各指标;茎中的总酚含量、PAL酶活性在低光照强度下显著高于高光照强度和中等光照强度下。 展开更多

关键词 穗花狐尾藻 光强 苯丙氨酸裂解酶 可溶性糖 可溶性蛋白 总酚

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采收季节银杏叶片黄酮醇糖苷含量和生理变化的研究 被引量：12

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作者 姜玲 章文才 马湘涛 《湖北农业科学》 1998年第4期40-42,共3页

对采收季节银杏叶片的分析结果表明：黄酮醇糖苷从９月初开始积累，在９月中旬至１０月初保持较高水平，然后逐步下降。苯丙氨酸转氨酶活性随气温变化而变化，但当寒潮入侵后，其活性则急剧上升，达到高峰。从９月初开始，可溶性糖和可... 对采收季节银杏叶片的分析结果表明：黄酮醇糖苷从９月初开始积累，在９月中旬至１０月初保持较高水平，然后逐步下降。苯丙氨酸转氨酶活性随气温变化而变化，但当寒潮入侵后，其活性则急剧上升，达到高峰。从９月初开始，可溶性糖和可溶性蛋白质浓度呈上升趋势，在落叶期到来前达到最高峰。叶绿素含量总体表现持续下降的趋势，当进入落叶期时，其含量急剧下降。 展开更多

关键词 银杏 黄酮醇糖苷 可溶性糖 可溶性蛋白质 pal

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不同抗性甜瓜接种蔓枯病菌后若干生理指标的变化 被引量：9

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作者 王红英 钱春桃 +5 位作者 张永兵 伊鸿平 郭勤卫 刘佳 吴明珠 陈劲枫 《中国瓜菜》 2012年第1期7-10,共4页

对不同抗性甜瓜接种蔓枯病菌后测定叶片中叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白含量和3种防御酶(PPO、PO、PAL)的活性。结果表明:叶绿素含量在接种后呈现先增加后减小趋势,抗病甜瓜增幅大,叶绿素含量高于感病甜瓜;可溶性糖含量在接种后先降低... 对不同抗性甜瓜接种蔓枯病菌后测定叶片中叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白含量和3种防御酶(PPO、PO、PAL)的活性。结果表明:叶绿素含量在接种后呈现先增加后减小趋势,抗病甜瓜增幅大,叶绿素含量高于感病甜瓜;可溶性糖含量在接种后先降低后升高、再降低再升高,抗病甜瓜可溶性糖含量高于感病甜瓜;可溶性蛋白含量在接种后逐渐升高,感病甜瓜峰值出现早于抗病甜瓜;3种酶活性在接种后都有不同程度提高,其中抗病甜瓜酶活性增幅高于感病甜瓜。几种酶活性变化可以用于甜瓜蔓枯病抗性鉴定。 展开更多

关键词 甜瓜 蔓枯病菌 叶绿素 可溶性糖 可溶性蛋白 PPO PO pal

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Cu^(2+)对离体培养的红花百里香不定芽生长及挥发油的影响 被引量：1

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作者 徐治朋 李晓东 +1 位作者 鲁朝晖 李凌 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期37-44,共8页

以离体培养的红花百里香不定芽为材料,采用不同浓度CuCl2处理,测定不定芽的各种指标,研究Cu2+对红花百里香不定芽的增殖生长及挥发油的影响.结果表明,低浓度的CuCl2可以促进红花百里香不定芽的增殖生长,而高浓度的CuCl2起抑制作用;其中5... 以离体培养的红花百里香不定芽为材料,采用不同浓度CuCl2处理,测定不定芽的各种指标,研究Cu2+对红花百里香不定芽的增殖生长及挥发油的影响.结果表明,低浓度的CuCl2可以促进红花百里香不定芽的增殖生长,而高浓度的CuCl2起抑制作用;其中50μmol/L的CuCl2对不定芽的增殖效果最好,增殖系数高达20.35,精油含量达到27.25‰,提高了23.98%,且颜色更深.说明一定浓度的Cu2+能促进红花百里香不定芽的增殖生长,增强其抗逆性,促进百里香挥发油的合成积累,改变其成分组成. 展开更多

关键词 红花百里香 CU2+ 可溶性糖 可溶性蛋白 SOD POD pal 挥发油

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