目的:探讨IL-34对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)和炎症反应的影响。方法:给予高脂饲料喂养的雄性ApoE-/-小鼠20只分为两组,每组10只。实验组隔天1次腹腔注射200 ng重组IL-34(rIL-34),对照组隔天1次腹腔注射0.3 mL PBS,干预12周。检测小...目的:探讨IL-34对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)和炎症反应的影响。方法:给予高脂饲料喂养的雄性ApoE-/-小鼠20只分为两组,每组10只。实验组隔天1次腹腔注射200 ng重组IL-34(rIL-34),对照组隔天1次腹腔注射0.3 mL PBS,干预12周。检测小鼠血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);油红O染色评估小鼠主动脉AS形成情况;免疫组化法检测主动脉根部斑块炎症细胞(CD3+T细胞和Mac-3+巨噬细胞)浸润情况;流式细胞术检测脾脏T细胞亚群;ELISA法和Bio-Plex系统检测小鼠血清细胞炎性因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-4、IL-10、TGF-β1和IL-17A水平;qRT-PCR法检测小鼠主动脉弓上述细胞因子mRNA的表达水平。结果:两组小鼠血脂水平差异无统计学意义(P>0.05))。与对照组比较,实验组小鼠血清IL-34水平增加,主动脉和主动脉根部斑块面积增加,斑块内CD3+T细胞和Mac-3+巨噬细胞浸润增多,脾脏Th17细胞亚群比例升高,血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-17A水平升高,主动脉弓IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P均<0.05)。结论:IL-34可升高脾脏Th17细胞亚群比例,促进炎症因子表达,有助于小鼠AS形成。展开更多
目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)促进单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达诱导巨噬细胞浸润加重急性缺血性卒中(AIS)的机制。方法:采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注小鼠模型。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑缺血严重程度,HE染色...目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)促进单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达诱导巨噬细胞浸润加重急性缺血性卒中(AIS)的机制。方法:采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注小鼠模型。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑缺血严重程度,HE染色法检测缺血脑组织神经细胞损伤状况和炎症细胞浸润程度;高效液相色谱法检测急性期小鼠脑组织Hcy表达;免疫组织化学染色、Western blot、real time RT-PCR法检测小鼠脑组织MCP-1表达。Transwell小室检测巨噬细胞迁移程度,TUNEL法检测Hcy对内皮细胞影响;利用MCP-1中和抗体观察对巨噬细胞迁移的影响。结果:与假手术组比较,模型组小鼠右侧大脑半球梗死明显,缺血脑组织损伤严重,神经细胞死亡并伴有大量炎症细胞浸润;Hcy水平显著升高,MCP-1蛋白和mRNA表达均明显增加。Hcy刺激小鼠脑血管内皮细胞后可诱导NF-κB(p65)入核,促进巨噬细胞迁移,促进内皮细胞凋亡,给予NF-κB(p65)抑制剂后MCP-1生成减少;MCP-1中和抗体明显抑制巨噬细胞迁移。结论:Hcy、MCP-1与脑缺血再灌注炎性反应相关,且Hcy可能通过NF-κB通路促进MCP-1表达,发挥诱导巨噬细胞浸润作用,加重脑缺血损伤。展开更多
目的:探讨hSOD1^(G93A)转基因小鼠疾病进展中,脊髓组织内脂钙素-2(LCN2)及其受体脑型有机阳离子转运蛋白(BOCT)表达的动态改变与肌萎缩侧索硬化症(ALS)疾病进展的关系,为ALS早期抗炎干预治疗提供潜在靶点。方法:本研究选用发病前期、早...目的:探讨hSOD1^(G93A)转基因小鼠疾病进展中,脊髓组织内脂钙素-2(LCN2)及其受体脑型有机阳离子转运蛋白(BOCT)表达的动态改变与肌萎缩侧索硬化症(ALS)疾病进展的关系,为ALS早期抗炎干预治疗提供潜在靶点。方法:本研究选用发病前期、早期、中期、晚期(出生后60、95、108、122 d)hSOD1^(G93A)转基因小鼠及同窝野生型小鼠(WT小鼠)为动物模型,提取各组模型小鼠脊髓组织,应用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光多重标记检测LCN2、BOCT的表达变化。在BV2细胞中转染pcDNA3.1-G93A-SOD1质粒作为hSOD1^(G93A)BV2小胶质细胞模型,LPS刺激24 h后使用RT-qPCR和ELISA分别检测细胞中LCN2 mRNA以及培养基中LCN2水平变化;Western blot检测BOCT蛋白表达变化。结果:与同窝同时间点WT小鼠相比,108、122 d hSOD1^(G93A)转基因小鼠脊髓中LCN2 mRNA表达水平升高;60 d至122 d hSOD1^(G93A)转基因小鼠脊髓中LCN2和BOCT蛋白表达无显著差异;免疫荧光双重标记结果显示,在95、108和122 d hSOD1^(G93A)转基因小鼠脊髓前角观察到LCN2及其受体与小胶质细胞标记物Iba-1共标记。在细胞模型中,LPS刺激后,hSOD1^(G93A)BV2细胞内LCN2 mRNA和蛋白表达升高,细胞培养上清中LCN2含量升高,但细胞内BOCT表达无显著改变。结论:ALS病程中活化的小胶质细胞合成并释放LCN2显著增加,可能参与神经炎症发生和神经元死亡。展开更多
文摘目的:探讨IL-34对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)和炎症反应的影响。方法:给予高脂饲料喂养的雄性ApoE-/-小鼠20只分为两组,每组10只。实验组隔天1次腹腔注射200 ng重组IL-34(rIL-34),对照组隔天1次腹腔注射0.3 mL PBS,干预12周。检测小鼠血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);油红O染色评估小鼠主动脉AS形成情况;免疫组化法检测主动脉根部斑块炎症细胞(CD3+T细胞和Mac-3+巨噬细胞)浸润情况;流式细胞术检测脾脏T细胞亚群;ELISA法和Bio-Plex系统检测小鼠血清细胞炎性因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-4、IL-10、TGF-β1和IL-17A水平;qRT-PCR法检测小鼠主动脉弓上述细胞因子mRNA的表达水平。结果:两组小鼠血脂水平差异无统计学意义(P>0.05))。与对照组比较,实验组小鼠血清IL-34水平增加,主动脉和主动脉根部斑块面积增加,斑块内CD3+T细胞和Mac-3+巨噬细胞浸润增多,脾脏Th17细胞亚群比例升高,血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-17A水平升高,主动脉弓IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P均<0.05)。结论:IL-34可升高脾脏Th17细胞亚群比例,促进炎症因子表达,有助于小鼠AS形成。
文摘目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)促进单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达诱导巨噬细胞浸润加重急性缺血性卒中(AIS)的机制。方法:采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注小鼠模型。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑缺血严重程度,HE染色法检测缺血脑组织神经细胞损伤状况和炎症细胞浸润程度;高效液相色谱法检测急性期小鼠脑组织Hcy表达;免疫组织化学染色、Western blot、real time RT-PCR法检测小鼠脑组织MCP-1表达。Transwell小室检测巨噬细胞迁移程度,TUNEL法检测Hcy对内皮细胞影响;利用MCP-1中和抗体观察对巨噬细胞迁移的影响。结果:与假手术组比较,模型组小鼠右侧大脑半球梗死明显,缺血脑组织损伤严重,神经细胞死亡并伴有大量炎症细胞浸润;Hcy水平显著升高,MCP-1蛋白和mRNA表达均明显增加。Hcy刺激小鼠脑血管内皮细胞后可诱导NF-κB(p65)入核,促进巨噬细胞迁移,促进内皮细胞凋亡,给予NF-κB(p65)抑制剂后MCP-1生成减少;MCP-1中和抗体明显抑制巨噬细胞迁移。结论:Hcy、MCP-1与脑缺血再灌注炎性反应相关,且Hcy可能通过NF-κB通路促进MCP-1表达,发挥诱导巨噬细胞浸润作用,加重脑缺血损伤。
文摘目的:探讨hSOD1^(G93A)转基因小鼠疾病进展中,脊髓组织内脂钙素-2(LCN2)及其受体脑型有机阳离子转运蛋白(BOCT)表达的动态改变与肌萎缩侧索硬化症(ALS)疾病进展的关系,为ALS早期抗炎干预治疗提供潜在靶点。方法:本研究选用发病前期、早期、中期、晚期(出生后60、95、108、122 d)hSOD1^(G93A)转基因小鼠及同窝野生型小鼠(WT小鼠)为动物模型,提取各组模型小鼠脊髓组织,应用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光多重标记检测LCN2、BOCT的表达变化。在BV2细胞中转染pcDNA3.1-G93A-SOD1质粒作为hSOD1^(G93A)BV2小胶质细胞模型,LPS刺激24 h后使用RT-qPCR和ELISA分别检测细胞中LCN2 mRNA以及培养基中LCN2水平变化;Western blot检测BOCT蛋白表达变化。结果:与同窝同时间点WT小鼠相比,108、122 d hSOD1^(G93A)转基因小鼠脊髓中LCN2 mRNA表达水平升高;60 d至122 d hSOD1^(G93A)转基因小鼠脊髓中LCN2和BOCT蛋白表达无显著差异;免疫荧光双重标记结果显示,在95、108和122 d hSOD1^(G93A)转基因小鼠脊髓前角观察到LCN2及其受体与小胶质细胞标记物Iba-1共标记。在细胞模型中,LPS刺激后,hSOD1^(G93A)BV2细胞内LCN2 mRNA和蛋白表达升高,细胞培养上清中LCN2含量升高,但细胞内BOCT表达无显著改变。结论:ALS病程中活化的小胶质细胞合成并释放LCN2显著增加,可能参与神经炎症发生和神经元死亡。
