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PTD和PTDEEC算式的奇异点处理 被引量：9
1
作者 崔索民 吴振森 《电波科学学报》 EI CSCD 1997年第4期369-374,共6页
将计算劈型目标电磁散射的PTD绕射系数通过简单的三角变换写成另一种表达式，提高它们在奇异点邻域的数值稳定性，数值结果表明本文给出的公式在奇异点附近比原始的表达式要好。最后将处理PTD线材系数奇异性的思路和表达式推广到PTDEEC... 将计算劈型目标电磁散射的PTD绕射系数通过简单的三角变换写成另一种表达式，提高它们在奇异点邻域的数值稳定性，数值结果表明本文给出的公式在奇异点附近比原始的表达式要好。最后将处理PTD线材系数奇异性的思路和表达式推广到PTDEEC的系数中，使PTDEEC公式适合数值计算。 展开更多
关键词 划异点处理 ptd ptdEEC 电磁散射
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PTD-HBcAg融合蛋白经树突状细胞诱导特异性CTL抑制HBV的体外研究 被引量：4
2
作者 陈小华 潘庆春 +2 位作者 余永胜 汤正好 臧国庆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期289-292,共4页
目的:探讨经PTD-HBcAg融合蛋白致敏的树突状细胞(DCs)体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTLs)对HBV的抑制作用。方法:体外分离培养小鼠髓源性DC,加入融合蛋白刺激DC成熟后与T淋巴细胞共培养,ELISA法检测T淋巴细胞上清中IL-2、IL-4、IL-10... 目的:探讨经PTD-HBcAg融合蛋白致敏的树突状细胞(DCs)体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTLs)对HBV的抑制作用。方法:体外分离培养小鼠髓源性DC,加入融合蛋白刺激DC成熟后与T淋巴细胞共培养,ELISA法检测T淋巴细胞上清中IL-2、IL-4、IL-10和INF-γ的分泌水平,流式细胞术检测胞内细胞因子水平,乳酸脱氢酶释放试验检测特异性CTL活性,并对HepG2.2.15细胞上清中HBsAg及HBV DNA水平进行检测。结果:经不同融合蛋白刺激的DCs能有效促进T淋巴细胞的细胞因子分泌,同时融合蛋白PTD-HBcAg组中IL-2(552.7±117.5ng/L)和INF-γ(150.6±7.945ng/L)明显高于HBcAg组中IL-2(420±12.47ng/L)和INF-γ(107.5±12.19ng/L)分泌。流式细胞计数术检测的PTD-HBcAg融合蛋白诱导CTL细胞水平明显高于对照组。经PTD-HBcAg融合蛋白诱导的CTL比HBcAg有明显的特异性杀伤作用(P<0.05),同时对HBsAg及HBV DNA水平有明显的抑制作用。结论:经PTD-HBcAg融合蛋白致敏的DCs能有效刺激T淋巴细胞分泌细胞因子及增加细胞毒T淋巴细胞的表达,并增强特异性CTL活性及对HepG2.2.15细胞上清中HBsAg及HBV DNA水平的抑制。 展开更多
关键词 ptd—HBcAg 融合蛋白 T淋巴细胞 细胞因子 特异性CTL
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TAT-PTD融合蛋白可能存在的跨膜递送作用机制 被引量：12
3
作者 何火聪 刘树滔 +4 位作者 潘剑茹 傅蓉 陈菁 陈躬瑞 饶平凡 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期704-710,共7页
为探讨TATPTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEXTATGFP表达质粒.在E.coliBL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione)Sepharose4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有... 为探讨TATPTD融合蛋白的跨膜递送作用机制,采用DNA重组技术构建pGEXTATGFP表达质粒.在E.coliBL21表达GST-TAT-GFP,并用谷胱甘肽(glutathione)Sepharose4B亲和柱进行纯化.GST-TAT-GFP在不同条件下与细胞的作用结果表明,GST-TAT-GFP能有效进入HeLa、SMMC7721、L02和BEL7402细胞,GST-TAT-GFP在递送时对时间和浓度有依赖关系.同时,温度对GST-TAT-GFP跨膜作用具有明显的影响,GST-TAT-GFP的跨膜作用受代谢抑制剂的影响很小,肝素的存在能明显抑制GST-TAT-GFP跨膜进入细胞的能力,GST-TAT-GFP对细胞活性没有影响.这些结果说明,TATPTD可能是通过与细胞表面的硫酸乙酰肝素等受体相结合介导融合蛋白跨膜递送进入细胞的. 展开更多
关键词 TAT-ptd 跨膜递送 GST-TAT-GFP
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融合蛋白PTD-SOD对受紫外线照射豚鼠皮肤损伤的保护作用 被引量：7
4
作者 潘剑茹 彭树美 +3 位作者 周静宏 何火聪 刘树滔 饶平凡 《辐射防护》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期284-288,共5页
采用0.26×10-4W/cm2的紫外线(UVB)照射豚鼠背部皮肤,于照射后给予不同的融合蛋白(PTD-SOD1和PTD-SOD2)霜剂和野生型SOD霜剂涂抹受照部位皮肤,利用数码相机拍摄豚鼠背部皮肤颜色的变化情况,用Photoshop软件通过测量分析皮肤红斑度... 采用0.26×10-4W/cm2的紫外线(UVB)照射豚鼠背部皮肤,于照射后给予不同的融合蛋白(PTD-SOD1和PTD-SOD2)霜剂和野生型SOD霜剂涂抹受照部位皮肤,利用数码相机拍摄豚鼠背部皮肤颜色的变化情况,用Photoshop软件通过测量分析皮肤红斑度的变化来反映辐射损伤的程度,以探讨两种融合蛋白和野生型SOD对受照豚鼠的皮肤保护作用。结果表明,照射后立即给予PTD-SOD有较好的保护作用,其效果随给药剂量的增加而增加。PTD-SOD1蛋白对一次性UVB辐射损伤的保护作用最好,野生型SOD蛋白对一次性UVB辐射损伤也有保护作用,其效果与PTD-SOD2蛋白相当。 展开更多
关键词 ptd-SOD UVB 辐射损伤 保护作用 豚鼠
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TAT PTD-Tachyplesin融合基因的重叠延伸PCR法合成 被引量：6
5
作者 邱道寿 刘晓津 +1 位作者 王军 苏永全 《安徽农业科学》 CAS 2013年第4期1438-1441,共4页
为探讨HIV-Tat蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)对中国鲎抗菌肽tachyplesin的协同作用,试验以经毕赤酵母密码子优化后的tachyplesin成熟肽(54 aa)加TAT PTD(11 aa)的cDNA序列为参考模板,设计了6条单链寡核苷酸片段,首尾引物... 为探讨HIV-Tat蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)对中国鲎抗菌肽tachyplesin的协同作用,试验以经毕赤酵母密码子优化后的tachyplesin成熟肽(54 aa)加TAT PTD(11 aa)的cDNA序列为参考模板,设计了6条单链寡核苷酸片段,首尾引物的5'端分别引入EcoR I和Xba I酶切位点,通过重叠延伸PCR方法成功合成了TAT PTD+Tachyplesin序列,序列全长219 bp,为其后续功能与协同作用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ptd TAT 鲎素 重叠延伸PCR
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局部应用PTD-SOD、SOD对小鼠皮肤创伤的抗氧化应激损伤保护效果及其比较 被引量：3
6
作者 刘元刚 张晨 +2 位作者 程欲 刘树滔 饶平凡 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第6期514-519,I0014,共7页
目的探讨局部应用PTD-SOD、SOD对小鼠皮肤创伤的抗氧化应激损伤保护效果及其差异。方法制备机械性创伤小鼠模型和不同浓度的PTD-SOD(1000、3000、6000 U)及SOD(1000、3000、6000 U)溶液,分别用上述溶液进行治疗,同时设立模型对照组和生... 目的探讨局部应用PTD-SOD、SOD对小鼠皮肤创伤的抗氧化应激损伤保护效果及其差异。方法制备机械性创伤小鼠模型和不同浓度的PTD-SOD(1000、3000、6000 U)及SOD(1000、3000、6000 U)溶液,分别用上述溶液进行治疗,同时设立模型对照组和生理盐水对照组,各组均连续治疗13 d。观察各组创伤愈合情况,记录创伤愈合率和愈合天数;于创伤后第14天取各组小鼠创伤愈合部位皮肤,一部分制成10%组织匀浆液用于检测抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)含量,一部分制成病理组织切片用于皮肤组织学观察。结果①与模型对照组相比,PTD-SOD各组或SOD各组的抗氧化酶活性和Hyp含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高,MDA含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低,能显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)提高创伤愈合率、缩短创伤愈合时间;与生理盐水对照组相比,结果类似。②在同等剂量下,从促创伤愈合时间、抗氧化酶活性、MDA含量、Hyp含量等方面比较,PTD-SOD组明显(P<0.05)或极明显(P<0.01)优于SOD组。③适当剂量的PTD-SOD促创伤愈合效果优于高剂量PTD-SOD的促创伤愈合效果。结论 PTD-SOD或SOD在皮肤创伤治疗中具有良好的抗氧化应激损伤效果,这种保护效果在创伤愈合的早期最显著;同等剂量下,PTD-SOD在促创伤愈合的效果上明显优于SOD。 展开更多
关键词 ptd-SOD 创伤愈合 氧化应激 模型 动物
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抗PTD-bcr/abl单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：2
7
作者 陈任安 刘利 +1 位作者 蒋姗姗 梁英民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期488-490,共3页
目的:制备单克隆抗体(mAb)并初步用于PTD-bcr/abl融合蛋白的研究,为慢性粒细胞白血病的免疫治疗提供实验依据。方法:在大肠杆菌中表达PTD-bcr/abl融合蛋白,用所获得的蛋白免疫BALB/c小鼠,常规收集小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,筛选杂交瘤... 目的:制备单克隆抗体(mAb)并初步用于PTD-bcr/abl融合蛋白的研究,为慢性粒细胞白血病的免疫治疗提供实验依据。方法:在大肠杆菌中表达PTD-bcr/abl融合蛋白,用所获得的蛋白免疫BALB/c小鼠,常规收集小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,筛选杂交瘤细胞株的阳性克隆,并对其进行一系列鉴定。结果:(1)表达PTD-bcr/abl融合蛋白;(2)制备了抗PTD-bcr/abl融合蛋白mAb;(3)用mAb以多种方法检测PTD-bcr/abl融合蛋白,证实此抗体效价高,特异性强。结论:此抗体可用于PTD-bcr/abl融合蛋白的进一步研究。 展开更多
关键词 ptd-bcr/abl融合蛋白 单克隆抗体 制备
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PTD-FNK蛋白的原核表达及纯化鉴定 被引量：3
8
作者 王晓晔 石博妹 +5 位作者 王英群 刘德玉 李铭 李芳芳 李珣 胡传活 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1019-1024,共6页
【目的】原核表达Bcl-x L蛋白的突变体PTD-FNK蛋白,为揭示PTD-FNK蛋白的抗凋亡机制及加快其在家畜精液冷冻保存中的应用提供参考依据。【方法】根据FNK蛋白核苷酸序列设计两对突变引物,以p ET-28a(+)-PTD-Bcl-x L质粒为模板,PCR扩增两... 【目的】原核表达Bcl-x L蛋白的突变体PTD-FNK蛋白,为揭示PTD-FNK蛋白的抗凋亡机制及加快其在家畜精液冷冻保存中的应用提供参考依据。【方法】根据FNK蛋白核苷酸序列设计两对突变引物,以p ET-28a(+)-PTD-Bcl-x L质粒为模板,PCR扩增两段突变序列;回收PCR产物片段进行Dpn I消化,构建重组质粒并转化大肠杆菌DH5α,以IPTG诱导融合蛋白表达,探索IPTG诱导表达的适宜温度,最后以SDS-PAGE电泳和Western bloting对纯化蛋白进行鉴定。【结果】两个突变片段的PCR扩增产物大小分别为462和5616 bp,经Dpn I消化后进行重组反应,再转化至大肠杆菌DH5α能成功构建p ET-28a(+)-PTD-FNK质粒。在30℃下以IPTG诱导7 h可获得可溶性的PTD-FNK蛋白,以NI-NTA Argrose纯化后的融合蛋白经Western blotting鉴定为PTD-FNK蛋白。【结论】通过调控IPTG诱导温度可成功以可溶性形式表达出PTD-FNK蛋白,且诱导时间短,无须复性,有利于蛋白纯化及加快其在家畜精液冷冻保存中的应用。 展开更多
关键词 ptd-FNK蛋白 点突变 原核表达 纯化鉴定
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背腔式微带天线电磁散射分析的FEM/POPTD方法 被引量：4
9
作者 丁卫平 徐金平 《电波科学学报》 EI CSCD 2002年第4期365-369,共5页
将一种新的混合方法—FEM /PO PTD方法 ,应用于分析计算背腔式微带天线的电磁散射特性。通过无穷大接地导体平面上矩形背腔式微带天线的RCS计算 ,验证了该方法的正确性。在此基础上 ,计算了两组有限尺寸金属载体上背腔式微带天线的RCS... 将一种新的混合方法—FEM /PO PTD方法 ,应用于分析计算背腔式微带天线的电磁散射特性。通过无穷大接地导体平面上矩形背腔式微带天线的RCS计算 ,验证了该方法的正确性。在此基础上 ,计算了两组有限尺寸金属载体上背腔式微带天线的RCS曲线。理论分析与计算结果表明 ,该混合方法具有计算机内存需求少、计算时间短等优点。 展开更多
关键词 背腔式 微带天线 电磁散射 FEM/PO-ptd方法 有限元法 物理光学法 物理绕射理论
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抗凋亡融合蛋白PTD-Bcl-xL原核表达载体的构建及表达纯化 被引量：1
10
作者 王晓晔 石博妹 +5 位作者 王英群 李珣 刘徳玉 李铭 李芳芳 胡传活 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期1-7,共7页
人工抗凋亡蛋白PTD-Bcl-x L能保护多种因素引起的细胞异常凋亡,为了获得高纯度Bcl-x L与PTD(Protein transduction domains)的融合蛋白,首先采用TRIzol法提取SD大鼠肝脏总RNA,将RNA反转录为c DNA,设计引物以c DNA为模板,PCR扩增Bcl-x L... 人工抗凋亡蛋白PTD-Bcl-x L能保护多种因素引起的细胞异常凋亡,为了获得高纯度Bcl-x L与PTD(Protein transduction domains)的融合蛋白,首先采用TRIzol法提取SD大鼠肝脏总RNA,将RNA反转录为c DNA,设计引物以c DNA为模板,PCR扩增Bcl-x L基因,构建p UM19-T-Bcl-x L质粒,并对质粒双酶切鉴定和测序鉴定;其次设计包含PTD序列的Bcl-x L引物,以测序正确的p UM19-T-Bcl-x L质粒为模板,PCR扩增PTD-Bcl-x L序列,将扩增序列克隆入p ET28a载体,构建PTD-Bcl-x L蛋白的原核表达质粒p ET28a-PTD-Bcl-x L,并对p ET28a-PTD-Bcl-x L载体双酶切鉴定和测序鉴定;将p ET28a-PTD-Bcl-x L重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,并对IPTG诱导融合蛋白表达的浓度和诱导时间进行了优化;SDS-PAGE分析表达蛋白的可溶性情况,在变性条件下用Ni-NTA琼脂纯化融合蛋白;最后用SDS-PAGE、Western Blot及质谱对融合蛋白进行鉴定。结果表明:双酶切p UM19-T-Bcl-x L质粒出现约774 bp大小条带,p UM19-T-Bcl-x L质粒测序结果与NCBI数据库比对序列一致,表明成功构建p UM19-T-Bcl-x L质粒;双酶切p ET28a-PTD-Bcl-x L质粒出现约744 bp大小条带,p ET28a-PTD-Bcl-x L质粒测序结果与预期序列一致,表明成功构建了p ET28a-PTD-Bcl-x L原核表达载体;在IPTG诱导下p ET28a-Bcl-x L重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出36 k Da大小蛋白,最优IPTG诱导浓度为0.1 mmol/L,最佳IPTG诱导时间为6 h;SDS-PAGE电泳显示融合蛋白主要出现在菌液超声后的沉淀里,以包涵体形式表达,经Ni-NTA琼脂纯化获得了高纯度的融合蛋白;Western Blot和质谱鉴定证明IPTG诱导表达蛋白和纯化的融合蛋白为PTD-Bcl-x L蛋白。纯化得到了PTD-Bc L-x L融合蛋白,推进了PTD-Bcl-x L蛋白在猪、牛等家畜精液冷冻保存的应用进程。 展开更多
关键词 BCL-X L蛋白 ptd 原核表达 蛋白纯化
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抗PTD-bcr/abl多克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1
11
作者 陈任安 梁英民 +1 位作者 吴绒丽 蒋姗姗 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期241-243,共3页
目的　制备多克隆抗体并初步用于PTD -bcr/abl融合蛋白的研究 ,为慢性粒细胞白血病的免疫治疗提供实验依据。方法　在大肠杆菌中表达PTD -bcr/abl融合蛋白 ,用所获得的蛋白免疫家兔得到多克隆抗体 ,并用免疫组化染色 ,Western -blot等... 目的　制备多克隆抗体并初步用于PTD -bcr/abl融合蛋白的研究 ,为慢性粒细胞白血病的免疫治疗提供实验依据。方法　在大肠杆菌中表达PTD -bcr/abl融合蛋白 ,用所获得的蛋白免疫家兔得到多克隆抗体 ,并用免疫组化染色 ,Western -blot等方法进行此抗体的鉴定。结果　①表达PTD -bcr/abl融合蛋白。②制备了抗PTD -bcr/abl融合蛋白多克隆抗体。③并用多克隆抗体以多种方法 ,检测PTD-bcr/abl融合蛋白 ,证实此抗体效价高、特异性强。结论　此抗体可用于PTD 展开更多
关键词 ptd-bcr/abl融合蛋白 多克隆抗体 制备 鉴定
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PTD-mFoxp3融合蛋白对异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的影响 被引量：1
12
作者 徐三荣 李伟 +1 位作者 周庆 韩博 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1541-1545,共5页
本研究探讨静脉输注PTD-mFoxp3融合蛋白对同种异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的影响。10周龄C57BL/6小鼠为受体并随机分为A、B、C 3组,每组10只,移植当天(第0天)接受直线加速器X射线6.0 Gy全身照射,4-6 h内输注供体BALB/c鼠全骨髓细胞3... 本研究探讨静脉输注PTD-mFoxp3融合蛋白对同种异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的影响。10周龄C57BL/6小鼠为受体并随机分为A、B、C 3组,每组10只,移植当天(第0天)接受直线加速器X射线6.0 Gy全身照射,4-6 h内输注供体BALB/c鼠全骨髓细胞3×107+脾细胞1.5×107个。A组于移植前2 d和移植后0、1、3、5、7、9、11、13 d间断多次输入生理盐水,B组输入mFoxp3蛋白,C组输注等量PTD-mFoxp3融合蛋白。移植后每天观察受体有无移植物抗宿主病的表现;取受体肝脏、空肠上端组织做病理学检查,判断组织损伤及淋巴细胞浸润程度;用ELISA法检测受体外周血中炎性因子IL-2及INF-γ浓度;流式细胞术测定长期存活受体外周血供体细胞的比例。结果表明,照射后60 d内A、B和C组受体平均生存期分别为(32.95±5.48)d、(38.00±5.45)d和(55.30±3.15)d;病理组织学观察示,A组和B组的小肠及肝脏发生明显的损伤,符合GVHD的表现,C组的病理损伤较轻;酶联免疫吸附测定表明,C组IL-2及IFN-γ浓度明显低于A和B组;长期存活的受体形成了稳定的嵌合体状态,移植后60 d A、B、C组活存动物供体细胞比例分别为(79.46±1.80)%、(79.13±2.23)%和(85.92±2.82)%。结论:PTD-mFoxp3融合蛋白可有效降低同种异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的发生,并减轻其临床表现,降低死亡率。 展开更多
关键词 骨髓移植 ptd-mFoxp3融合蛋白 移植物抗宿主病 调节性T细胞
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用PTD方法测定2017年精河M_S6.6地震序列的深度 被引量：8
13
作者 宋秀青 《中国地震》 北大核心 2017年第4期694-702,共9页
2017年8月9日精河发生M_S6.6地震,随后发生一系列余震。本文采用PTD方法和新疆测震台网分析的震相数据,基于新疆"2015地壳速度模型",计算了该地震序列的震源深度,得到M_S6.6主震震源深度约为14km,M_S≥2.5余震深度为9~18km。... 2017年8月9日精河发生M_S6.6地震,随后发生一系列余震。本文采用PTD方法和新疆测震台网分析的震相数据,基于新疆"2015地壳速度模型",计算了该地震序列的震源深度,得到M_S6.6主震震源深度约为14km,M_S≥2.5余震深度为9~18km。所有震相数据来自中国地震台网中心编目数据库。 展开更多
关键词 ptd方法 震源深度 地壳速度模型 精河MS6.6地震
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基于DDM技术的FEM/PO-PTD方法在深腔导体目标RCS分析中的应用 被引量：1
14
作者 丁卫平 何小祥 徐金平 《微波学报》 CSCD 北大核心 2003年第2期10-14,共5页
采用一种基于区域分解法 (DDM)的混合方法———FEM/PO PTD法 ,分析带有深腔的三维电大尺寸导体目标的电磁散射特性。应用DDM将原有深腔分成若干个较小的子域。对于腔体开口面所在子域 ,应用等效原理 ,结合物理光学法 (PO)与物理绕射理... 采用一种基于区域分解法 (DDM)的混合方法———FEM/PO PTD法 ,分析带有深腔的三维电大尺寸导体目标的电磁散射特性。应用DDM将原有深腔分成若干个较小的子域。对于腔体开口面所在子域 ,应用等效原理 ,结合物理光学法 (PO)与物理绕射理论 (PTD) ,得到腔体开口面的边界积分方程 ;对于其它子域 ,通过传输条件实现各子域间的耦合。在各子域内推导出此边值问题的等价泛函 ,应用基于棱边的有限元法 (Edge basedFEM)进行分析。理论分析与计算结果表明 ,该混合方法与其它计算同类问题的方法相比 ,有较高的计算精度 ,同时能减少对计算机内存的需求。 展开更多
关键词 DDM 区域分解法 FEM/PO-ptd 电磁散射 物理光学法 物理绕射理论 基于棱边的有限元法 深腔导体目标 RCS分析
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穿膜肽TAT-PTD的固相合成及其与DNA相互作用的研究 被引量：1
15
作者 管玉霞 罗泓 王锡平 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期94-98,共5页
通过N-芴甲氧羰基(N-fluorenylmethoxycarbonyl,Fmoc)作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成TAT-PTD多肽,运用高效液相色谱和质谱鉴定合成多肽的纯度和相对分子质量。通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳阻滞实验研究合成的TAT-... 通过N-芴甲氧羰基(N-fluorenylmethoxycarbonyl,Fmoc)作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成TAT-PTD多肽,运用高效液相色谱和质谱鉴定合成多肽的纯度和相对分子质量。通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳阻滞实验研究合成的TAT-PTD多肽与质粒DNA相互作用,实验表明TAT-PTD多肽与质粒DNA可以通过静电作用相互吸引、靠近并结合,于是为下一步小单孢菌基因工程的细胞转导提供了依据。 展开更多
关键词 小单孢菌 TAT-ptd多肽 质粒DNA 琼脂糖凝胶阻滞电泳 紫外吸收光谱
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PTD-Cry3Aa原核融合表达产物对甘薯小象甲的活性研究 被引量：2
16
作者 邱道寿 刘晓津 《生物灾害科学》 2012年第4期347-351,共5页
为探讨TAT PTD对苏云金杆菌鞘翅目特效基因CryAa是否具有协同作用,本试验在实现了融合基因TAT PTD-Cry3Aa大肠杆菌原核表达的基础上,以甘薯小象甲为生测对象测定了原核表达产物PTD-Cry3Aa与Cry3Aa的毒力。结果表明,用大肠杆菌表达的Cry3... 为探讨TAT PTD对苏云金杆菌鞘翅目特效基因CryAa是否具有协同作用,本试验在实现了融合基因TAT PTD-Cry3Aa大肠杆菌原核表达的基础上,以甘薯小象甲为生测对象测定了原核表达产物PTD-Cry3Aa与Cry3Aa的毒力。结果表明,用大肠杆菌表达的Cry3A和PTD-Cry3Aa包涵体初提物均对甘薯小象甲成虫和幼虫有杀虫活性,且表现出一定毒力增效作用,对成虫的增效倍数为2.01倍,对幼虫的增效作用更加明显,达到3.19倍。这一研究结果对于甘薯小象甲的生物防治研究以及转基因抗虫甘薯的研究具有重要的指导作用。 展开更多
关键词 Cry3Aa 蛋白转导结构域(ptd) 甘薯小象甲
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Bcl-xL及PTD-FNK蛋白的细胞保护作用研究进展 被引量：3
17
作者 王英群 石博妹 +5 位作者 李珣 许春荣 李美珍 唐荣福 王晓晔 胡传活 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期1967-1974,共8页
作者首先简述了Bcl-2蛋白家族成员Bcl-xL蛋白的结构与功能,Bcl-xL蛋白是体内重要的抗凋亡蛋白,其头部折叠结构完全符合Bcl-2家族蛋白结构模型,对多种细胞具有保护作用;其次介绍了Bcl-xL蛋白的功能增强型突变体PTD-FNK蛋白的生物学特性... 作者首先简述了Bcl-2蛋白家族成员Bcl-xL蛋白的结构与功能,Bcl-xL蛋白是体内重要的抗凋亡蛋白,其头部折叠结构完全符合Bcl-2家族蛋白结构模型,对多种细胞具有保护作用;其次介绍了Bcl-xL蛋白的功能增强型突变体PTD-FNK蛋白的生物学特性、功能、作用机制及临床应用情况,其对体内外细胞的穿透能力很强,可能通过抑制细胞线粒体途径的凋亡对不同类型细胞受到的多种损伤刺激产生良好的防御作用,这种组织细胞保护作用目前已经在临床治疗上被广泛应用。目前两种蛋白批量生产及实践应用的难点是其原核表达形式为包涵体,需要经过复杂的复性过程才能获取可溶性蛋白,且蛋白在复性过程中损耗极大。通过探索诱导两种蛋白表达的最优条件,大量诱导蛋白的可溶性表达并且进行纯化是今后研究工作的重点和方向,可为更好地推进其在组织细胞常温、低温、冷冻保存及医学临床中的应用奠定基础。 展开更多
关键词 BCL-XL蛋白 ptd-FNK蛋白 细胞保护
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恐龙谷南缘山区DIM点云的PTD滤波改进试验研究 被引量：3
18
作者 罗为东 甘淑 +3 位作者 袁希平 高莎 毕瑞 袁新悦 《激光与红外》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期938-944,共7页
无人机DIM点云滤波处理是地物分类、地物单体化提取和地形特征分析的关键步骤,为解决高原山区因地形复杂而导致DIM点云滤波处理难度大和精度低等问题。选择以滇中高原恐龙谷南缘山区为试验区,首先利用DJI Phantom 4 RTK采集影像数据,解... 无人机DIM点云滤波处理是地物分类、地物单体化提取和地形特征分析的关键步骤,为解决高原山区因地形复杂而导致DIM点云滤波处理难度大和精度低等问题。选择以滇中高原恐龙谷南缘山区为试验区,首先利用DJI Phantom 4 RTK采集影像数据,解算密集影像获取DIM点云;其次,考虑山体点与地面点有较大高程差,选择经典PTD滤波算法对实验区密集匹配点云进行滤波处理;最后,综合考虑实验区山顶和山脚存在较大高程差且山体两侧沟壑丛生,山体两侧地面点易被识别为非地面点,提出以脊-谷交汇地形特征点为PTD滤波算法的种子点,在山体两侧精细化构建不规则三角网的改进PTD滤波算法。结果表明:1)PTD滤波算法得到地面点较为完整保留整个实验区,但明显的地物如山体两侧低矮植被和山脚蔬菜大棚基本未被剔除,且山体部分的地面点易被识别为非地面点而在出现山体K1、K2、K3区域的空洞现象。2)针对恐龙谷南缘山区复杂地形,提出以脊-谷交汇地形特征点为PTD滤波算法的种子点,在山体两侧精细化构网,山体低矮植被部分清除,相对于PTD滤波算法蔬菜大棚大面积被清除。并且山体两侧地面点得到较为完成保留,未出现明显点云空洞的现象。 展开更多
关键词 DIM点云 点云滤波 ptd算法 地形特征点
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免疫荧光法检测融合蛋白PTD4-Cu,Zn-SOD在人星形胶质细胞中穿膜能力及保护作用 被引量：2
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作者 孟丽华 薛荣亮 +2 位作者 雷晓鸣 镇路明 魏兰璎 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期309-314,共6页
目的观察蛋白质转导4型-铜,锌超氧物歧化酶融合蛋白(protein transduction domain4-cuprum,zinc superoxide dismutase fusion protein,PTD4-Cu,Zn-SOD)能否穿膜进入体外培养的人星形胶质细胞,能否在穿膜后仍保持其生物学活性,能否减轻... 目的观察蛋白质转导4型-铜,锌超氧物歧化酶融合蛋白(protein transduction domain4-cuprum,zinc superoxide dismutase fusion protein,PTD4-Cu,Zn-SOD)能否穿膜进入体外培养的人星形胶质细胞,能否在穿膜后仍保持其生物学活性,能否减轻人星形胶质细胞的缺氧损伤。方法免疫组化及荧光法观察融合蛋白穿膜后在人星形胶质细胞内的荧光分布情况,评估融合蛋白的穿膜能力;制备人星形胶质细胞缺氧损伤模型后,实验分为空白对照组、Cu,Zn-SOD组、PTD4-Cu,Zn-SOD组。空白组加DMEM培养基(不含血清)作为对照,其余两组分别加入含有Cu,Zn-SOD、PTD4-Cu,Zn-SOD终浓度为2μmol/L的DMEM培养基,干预时间为1 h,用SOD活性及MDA含量测试盒,观察融合蛋白干预后的缺氧损伤星形胶质细胞中二者的变化。结果FITC荧光标记的融合蛋白PTD4-Cu,Zn-SOD可以进入体外培养的人星形胶质细胞中,且在细胞核中有聚集分布;经3组干预后,和对照组相比,PTD4-Cu,Zn-SOD组及Cu,Zn-SOD组均能提高星形胶质细胞内的SOD活性,融合蛋白PTD4-Cu,Zn-SOD组提高星形胶质细胞内SOD活性更为明显。和Cu,Zn-SOD组、对照组相比,PTD4-Cu,Zn-SOD组能降低星形胶质细胞内的MDA含量。结论PTD4-Cu,Zn-SOD能穿膜进入体外培养的人星形胶质细胞;融合蛋白PTD4-Cu,Zn-SOD能增加人星形胶质细胞缺氧损伤后的SOD活性,降低MDA含量。 展开更多
关键词 蛋白质转导超氧物歧化酶融合蛋白 穿膜能力 免疫荧光
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以寡聚精氨酸为PTD的嵌合基因的表达及其对HER2阳性SGC-7901胃癌细胞的杀伤作用 被引量：1
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作者 赵智凝 王涛 +5 位作者 任君琳 张瑞 赵晶 温伟红 贾林涛 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期735-737,共3页
目的：构建以寡聚精氨酸（R9）为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3的真核表达载体，并检测瞬时转染该载体对HER2阳性SGC-7901肿瘤细胞及HER2阴性HeLa肿瘤细胞生长的影响。方法：用PCR法获得融合了R9的活性caspase-3基因片段，并... 目的：构建以寡聚精氨酸（R9）为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3的真核表达载体，并检测瞬时转染该载体对HER2阳性SGC-7901肿瘤细胞及HER2阴性HeLa肿瘤细胞生长的影响。方法：用PCR法获得融合了R9的活性caspase-3基因片段，并将其克隆人含有HER2单链抗体e23sFv基因的真核表达载体，以脂质体法转染SGC-7901细胞及HeLa细胞，用间接免疫荧光、细胞计数等方法，检测其在两种细胞中的表达及其对两种细胞生长的影响。结果：成功构建了以R9为蛋白质转导结构域的嵌合抗体／caspase-3基因真核表达载体pCMV—e23sFv-R9-casp3，瞬时转染该质粒发现SGC-7901细胞和HeLa细胞均以分泌形式表达e23sFv—R9-casp3蛋白，但SGC-7901细胞生长受到明显抑制，细胞形态发生改变，出现核浓缩等凋亡特征；而HeLa细胞生长未受抑制，细胞形态无明显变化。结论：以分泌形式表达的嵌合蛋白，其HER2抗体部分能够介导靶向识别，R9可以辅助效应分子活化、转位至细胞液，活性caspase-3能高效杀伤细胞。 展开更多
关键词 寡聚精氨酸 蛋白质转导结构域 嵌合基因 靶向治疗
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