乙型肝炎病毒(adr亚型)preS2-S基因转基因小鼠的建立 被引量：4

1

作者 苏小平 姚玉成 +8 位作者 訾晓渊 赵书民 熊俊 李建秀 王新民 丁佳 许燕 余宏宇 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期168-171,共4页

目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。 方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder... 目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。 方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder)小鼠 ,再以免疫组织化学法分析乙型肝炎病毒蛋白在这些小鼠中的表达特性 ,PCR和免疫组化均阳性的转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配用于传代培育 ,并用 PCR法检测其子代小鼠。结果 :共注射受精卵 6 9枚。选取存活受精卵 5 8枚分别植入 4只假孕小鼠 ,产仔并存活 2 3只。经尾组织 DNA PCR筛选得到 5只整合 pre S2 - S基因的 founder小鼠 ,免疫组织化学法发现其中3只小鼠的肝脏中表达 HBs Ag,进而对其中表达较强的阳性鼠进行保种。结论 :所建立的乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因转基因小鼠品系具有表达乙肝病毒中蛋白的生物学特性 。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 MHBS 转基因小鼠 pres2-S基因

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HBV preS2S-rhGM-CSF融合基因表达质粒的构建和表达 被引量：3

2

作者 郭晓兰 邓健康 +1 位作者 朱道银 唐恩洁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期548-551,共4页

目的 :研究GM CSF和preS2对乙肝DNA疫苗的免疫增强作用。方法 :采用PCR方法 ,扩增HBVpreS2 +S基因约 84 6bp的片段和rhGM CSF(包括甘氨酸接头 )基因 4 5 0bp的片段。通过T A克隆技术和基因定向克隆 ,构建融合基因的真核表达质粒pcDNA3.1... 目的 :研究GM CSF和preS2对乙肝DNA疫苗的免疫增强作用。方法 :采用PCR方法 ,扩增HBVpreS2 +S基因约 84 6bp的片段和rhGM CSF(包括甘氨酸接头 )基因 4 5 0bp的片段。通过T A克隆技术和基因定向克隆 ,构建融合基因的真核表达质粒pcDNA3.1 S2S rhGM CSF ,并在HepG2细胞中表达。结果 :经酶切、PCR及DNA测序鉴定 ,融合基因表达质粒HB VpreS2S rhGM CSF成功地构建。将其转染HepG2细胞后 ,目的基因的转录通过RT PCR得到证实 ,而且表达的融合蛋白能与抗 HBs、抗 preS2和抗 GM CSF单克隆抗体 (mAb)均产生特异性反应。结论 :融合基因表达载体pcDNA3.1 S2S rhGM CSF的成功构建并表达 。 展开更多

关键词 HBV pres2 GM-CSF 融合基因

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乙型肝炎病毒preS2蛋白在转基因小鼠肝脏中的表达 被引量：2

3

作者 金艳花 訾晓渊 +8 位作者 姚玉成 熊俊 李建秀 苏小平 王新民 倪文君 丛文铭 杨康鹃 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期175-178,共4页

目的 :分析乙型肝炎病毒 pre S2蛋白在 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠肝脏中的分布及其病理学作用。方法 :采用原核显微注射法将质粒 pc DNA3.1- pre S/ St注射入小鼠受精卵雄原核 ,制备转基因小鼠。PCR法在基因组水平筛选 3′... 目的 :分析乙型肝炎病毒 pre S2蛋白在 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠肝脏中的分布及其病理学作用。方法 :采用原核显微注射法将质粒 pc DNA3.1- pre S/ St注射入小鼠受精卵雄原核 ,制备转基因小鼠。PCR法在基因组水平筛选 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠首建者 (founder)及后代 ;免疫组织化学法在蛋白水平检测 pre S2蛋白在这些小鼠中的表达 ;H- E染色分析转基因小鼠肝组织的病理学变化。结果 :经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后 ,共出生 15只新生小鼠 ,其中存活 7只 ,经 PCR检测后获得 2只 founder转基因小鼠 ,命名为 C5 7- Tg N (pre S/ St) SMMU。免疫组织化学检测发现转基因小鼠肝细胞质中有 pre S 2蛋白表达 ,H- E染色发现转基因小鼠肝组织中央静脉周围有淋巴细胞聚集。将这 2只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配 ,进行传代培育 ,PCR法筛选阳性转基因小鼠 ,目前已传至 F2 代。 结论 :本研究成功建立了稳定遗传 3′末端缺失的 pre S/ S基因并表达 pre S2蛋白的转基因小鼠 C5 7- Tg N((pre S/ St) SMMU,它将是体内研究 3′末端缺失的 pre S/ 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 pres2蛋白 转基因小鼠 preS/S基因 肝

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HBVpreS2-S基因诱发的体液免疫引起乙肝转基因小鼠肝组织损伤 被引量：1

4

作者 刘红 姚玉成 +4 位作者 葛军辉 李建秀 苏娟 张钦宪 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期159-163,共5页

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。 方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小... 目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。 方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)体内 ,不同时间点静脉采血检测小鼠血清 HBs Ag、抗 HBs抗体、前 S2抗原、前 S2抗体、转氨酶、尿素氮和肌酐的变化 ,并处死动物检查肝、脾、肾、肠、肺和肌肉组织的病理学改变。 结果 :DNA免疫正常小鼠后 8～14周 ,抗 HBs抗体的浓度维持在 130～ 14 0 m IU/ ml;免疫后小鼠抗血清转移到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)后 2、4、7和 14 d,小鼠血清中未检测到 HBs Ag和前 S2抗原 ,抗 HBs抗体持续阳性 ,前 S2抗体 14 d时转阴 ;AL T2、4 d升高 ,7d恢复到正常 ;AST14 d内始终高于正常值 ,4 d时达高峰 ;尿素氮异常 ,γ- GT与肌酐正常。转基因小鼠肝脏出现急性乙型肝炎的改变 ,初期 (2 d、4 d)血窦内和汇管区有淋巴细胞浸润 ,4 d肝细胞开始肿胀 ;中期 (7d)全小叶出现肝细胞气球样变 ,肝小叶内出现肝细胞点灶性坏死伴单个核细胞浸润 ,汇管区轻度单个核细胞的浸润 ;后期 (14 d)时肝细胞肿胀明显减轻 。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 pres2-S基因 体液免疫 转基因小鼠 乙型肝炎

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T载体克隆乙肝病毒preS2+S基因的实验研究 被引量：2

5

作者 张彤 秦东春 +1 位作者 张光磊 张绍祖 《河南医科大学学报》 1998年第1期56-59,共4页

将商品化真核表达载体pcDNA3改造成T载体pcDNA3－T，并运用pcDNA3－T直接克隆了由PCR扩增的adw2亚型乙肝病毒preS2与S基因。结果：pcDNA3－T与PCR产物的重组率高达70％。提示：该方法具有简便，省时等特点。

关键词 T载体 pres2+S基因 乙型肝炎病毒

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多角体蛋白基因核苷酸序列对HBsAg(PreS2+S)在家蚕中表达的作用

6

作者 杨瑞丽 金勇丰 +1 位作者 吴玉澄 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 2002年第1期39-44,共6页

应用PCR突变的方法 ,在乙肝病毒表面抗原 (HBsAg)前S2序列的 5’端融合了BmNPV多角体蛋白基因5’端的 12个碱基 ,获得了融合乙肝表面抗原中蛋白基因 (HBMp) ;通过同源重组将其插入到BmNPV基因组多角体启动子后 ,构建了重组杆状病毒BmPAK... 应用PCR突变的方法 ,在乙肝病毒表面抗原 (HBsAg)前S2序列的 5’端融合了BmNPV多角体蛋白基因5’端的 12个碱基 ,获得了融合乙肝表面抗原中蛋白基因 (HBMp) ;通过同源重组将其插入到BmNPV基因组多角体启动子后 ,构建了重组杆状病毒BmPAK HBMp。用重组病毒BmPAK HBMp和BmPAK HBM(带有非融合乙肝表面抗原中蛋白基因 )感染家蚕细胞及蛹 ,对两种病毒的表达产物用ELISA进行了跟踪检测 ,结果表明融合蛋白比非融合蛋白HBsAg活性提高了 6 0 %～ 80 % ,作为HBsAg构成部分的PreS2抗原性提高了 8～ 10倍 ;并且HBsAg和PreS2 Ag表达的时相曲线不同 ,PreS2 Ag的表达量比HBsAg早 1～ 2d达到最大值。ELISA检测和Westernblotting分析表明 ,多角体基因序列的存在更有利于中蛋白全基因 (PreS2 +S)的表达。 展开更多

关键词 核苷酸序列 家蚕 核型多角体病毒 多角体蛋白基因 乙肝病毒表面抗原 HBSAG 基因表达

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乙型肝炎病毒PreS_2S基因在毕赤酵母中表达的研究

7

作者 李利 金立杰 +5 位作者 杨屹 邵丽军 谷丽娟 刘岩松 董厉子 王宇 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期44-48,共5页

构建重组质粒PHIL-D2/PreS2S以研究乙肝病毒PreS2(120-146)S基因编码蛋白在毕赤酵母中的表达。通过PCR扩增获得PreS2S片段,插入含AOX1启动子的Pichia Pastoris表达载体PHIL-D2中,构建重组表达质粒PHIL-D2/PreS2S,转化酵母宿主菌GS115。... 构建重组质粒PHIL-D2/PreS2S以研究乙肝病毒PreS2(120-146)S基因编码蛋白在毕赤酵母中的表达。通过PCR扩增获得PreS2S片段,插入含AOX1启动子的Pichia Pastoris表达载体PHIL-D2中,构建重组表达质粒PHIL-D2/PreS2S,转化酵母宿主菌GS115。挑取阳性克隆摇床培养,甲醇诱导表达。通过ELISA、RPHA鉴定表达产物。成功构建了PHIL-D2/PreS2S真核表达载体,经过序列分析,插入的基因为在中国流行的adr亚型。在毕赤酵母中重组载体表达了S蛋白,S蛋白的表达量为34.9 mg/L,PreS2抗原检测为强阳性。利用毕赤酵母表达系统能够有效地表达乙型肝炎病毒的PreS2S蛋白,PreS2S蛋白具有良好的生物学活性。 展开更多

关键词 pres2基因 S基因 毕赤酵母 表达

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双重表达乙肝病毒前S_2抗原的重组质粒的疫苗效应

8

作者 周陶友 赵连三 +3 位作者 陈敏 陈守春 刘丽 唐红 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期808-811,共4页

目的:乙肝病毒(HBV)的前S2抗原具有比S抗原更强的免疫原性,可以更有效地诱生特异性免疫应答。文中构建含有前S2抗原编码基因的3种重组质粒,观察接种后诱生特异性体液免疫应答的情况。方法:采用PCR技术扩增HBV的S2-S和S1-S2-S基因;同时... 目的:乙肝病毒(HBV)的前S2抗原具有比S抗原更强的免疫原性,可以更有效地诱生特异性免疫应答。文中构建含有前S2抗原编码基因的3种重组质粒,观察接种后诱生特异性体液免疫应答的情况。方法:采用PCR技术扩增HBV的S2-S和S1-S2-S基因;同时串联拼接产生S2-S-S2片段。继而构建重组表达质粒pcDNA3.1/S2S、pcDNA3.1/S1S2S和pcDNA3.1/S2SS2。后者意在表达S抗原的同时,双重表达前S2抗原。然后将上述3种质粒分别以100μg肌肉接种BALB/c小鼠,于2、4周后各加强1次。初次接种后3、5、8和12周,分别采血检测小鼠的前S2抗体和抗-HBs。结果:初次接种后3周,S2SS2组小鼠血清的前S2抗体检出率为12.5%,低于S1S2S组(25%)和S2S组(37.5%);但5周时则达到87.5%,并持续到12周,优于S1S2S组和S2S组;并且S2SS2组的前S2抗体滴度达到1∶2000,高于S2S组(1∶500)和S1S2S组(1∶50)。不过,S2SS2组同期的抗-HBs检出率和抗-HBs滴度则低于S1S2S组和S2S组。结论:重组质粒pcDNA3.1/S2S-S2以串联拼接方式双重表达前S2抗原,能够诱生较高水平的特异性前S2抗体,但其诱生抗HBs的能力却明显降低,这是在设计改造基因疫苗时需要考虑的一个重要问题。 展开更多

关键词 乙肝病毒 前S2抗原 基因疫苗

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Adr亚型HBV中蛋白基因的T载体克隆及序列分析

9

作者 赵秀英 黄德庄 +2 位作者 阎惠平 贺丽香 罗朝霞 《首都医科大学学报》 CAS 1999年第4期272-274,共3页

构建含适当限制酶切位点的ａｄｒ 亚型乙肝病毒（ＨＢＶ） 中蛋白基因克隆，比较分析序列变化，用作ＨＢＶ 疫苗表达及诊断试剂的研究。患者血清经蛋白酶Ｋ 消化，再以酚氯仿抽提，对提取物进行ＰＣＲ 扩增。回收ＰＣＲ 阳性产物，经... 构建含适当限制酶切位点的ａｄｒ 亚型乙肝病毒（ＨＢＶ） 中蛋白基因克隆，比较分析序列变化，用作ＨＢＶ 疫苗表达及诊断试剂的研究。患者血清经蛋白酶Ｋ 消化，再以酚氯仿抽提，对提取物进行ＰＣＲ 扩增。回收ＰＣＲ 阳性产物，经琼脂糖酶消化后直接克隆至Ｔ 载体。转化后提取质粒经ＰＣＲ 及酶切鉴定，再行序列分析。结果：１０ 份血清提取物的ＰＣＲ 有３ 份获阳性产物，分别经Ｔ 载体克隆后转化ＤＨ１０ｂ 菌，３ 株阳性克隆经酶切及序列分析显示同属于ａｄｒ 亚型，与国内已发表序列的同源性大于９９ ．６ ％ 。提示该克隆是用作ＨＢｓＡｇ 蛋白表达或探针标记研究的理想克隆。 展开更多

关键词 T载体 乙型肝炎 HBV 蛋白基因 克隆

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慢性乙型肝炎病毒感染者血清前S_2蛋白和聚合人血清白蛋白结合活性的对比研究

10

作者 田琦琦 骆抗先 +1 位作者 章廉 卢桥生 《第一军医大学学报》 CSCD 1990年第1期22-25,共4页

以合成的前S2肽免疫兔获得抗血清。分别以抗前S2抗体和聚合人血清白蛋白作试剂,用固相放免法检测前S2和聚合人血清白蛋白结合活性。在甲型肝炎和HBsAg(-)的各类慢性肝病病人中均未检出。在经肝活检诊断的慢性乙型活动性肝炎,两者的检出... 以合成的前S2肽免疫兔获得抗血清。分别以抗前S2抗体和聚合人血清白蛋白作试剂,用固相放免法检测前S2和聚合人血清白蛋白结合活性。在甲型肝炎和HBsAg(-)的各类慢性肝病病人中均未检出。在经肝活检诊断的慢性乙型活动性肝炎,两者的检出率在病情增重期显著高于缓解期,并高于肝组织正常的无症状HBV携带者。在HBeAg(+)组中两者的检出率均显著高于抗HBe(+)组。在上述检测中,聚合人血清白蛋白结合活性与前S2并不相同,后者的检出率仅为前者的56.7％。 展开更多

关键词 乙肝病毒 前S2蛋白 PHSA

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抗PreS_2随访在肝炎、肝癌中的临床意义

11

作者 陈紫榕 刘小朋 +4 位作者 张信 李龙洋 袁志华 陈仁英 周善健 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1991年第1期9-11,共3页

本文报道209例乙型肝病血清PreS_2检出率为52.6％。肝硬化和肝癌之PreS_2检出率低,与慢活肝比较,有非常显著差异(P<0.01)。慢性肝病、病损严重、检出率低。LEIA法的检出率稍高于ELISA法。这可能是前者通过发光仪放大的结果。PreS_2与... 本文报道209例乙型肝病血清PreS_2检出率为52.6％。肝硬化和肝癌之PreS_2检出率低,与慢活肝比较,有非常显著差异(P<0.01)。慢性肝病、病损严重、检出率低。LEIA法的检出率稍高于ELISA法。这可能是前者通过发光仪放大的结果。PreS_2与HBeAg相平行,表明PreS_2代表病毒复制水平。 152例乙型肝病的抗PreS_2检出率为11.18％。17例抗PreS_2阳性血清中,有3例与PreS_2并存,并存率为17.7％。这可能是HBV持续感染的结果。_本组17例抗PreS_2阳性血清中,除1例HBV DNA阴性外,16例全为阳性,有10例S-ALT升高。随访6年,发现抗PreS_2在各型肝病中的临床意义是不同的。对急性和慢性迁延性肝炎,是恢复指标。在慢活肝、肝硬化和肝癌多表示病情恶化。但若抗PreS_2由阳性转阴,则预示病情转好。抗PreS_2的出现与肝细胞破坏有关。 展开更多

关键词 抗pres2 肝炎 肝癌 乙型肝炎

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人乙型肝炎病毒包膜蛋白多态性的生物信息学分析及其意义 被引量：6

12

作者 陈喆 朱悦 +1 位作者 李亦学 闻玉梅 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期711-717,共7页

目的构建乙肝病毒生物数据库(Bio-HBV Database),针对HBV包膜蛋白序列进行多态性分析。方法构建Bio-HBV生物数据库获得国际基因序列库中所有完整的包膜蛋白并进行比对,采用信息熵评价序列位点的保守性,结合BLOSUM90评分系统和PAML(phylo... 目的构建乙肝病毒生物数据库(Bio-HBV Database),针对HBV包膜蛋白序列进行多态性分析。方法构建Bio-HBV生物数据库获得国际基因序列库中所有完整的包膜蛋白并进行比对,采用信息熵评价序列位点的保守性,结合BLOSUM90评分系统和PAML(phylogenetic analyses by maxi mumlikelihood)软件包寻找选择压力下的异常氨基酸替换模式。结果包膜蛋白中ps35,ps132,s49和s127等氨基酸替换具有高度的统计学意义。此外包膜蛋白内有多个重要区段,直接影响HBV生物学功能。我们对这些区段逐一分析了功能与结构的关系。结论通过Bio-HBV生物数据库,用生物信息学方法不仅验证了已知生物学特性的功能域的保守性,更提出了潜在的可以作为研究切入点的新功能域。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 包膜蛋白 多态性分析 前S1区 前S2区 S区

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乙肝前S2抗原决定簇串联体与核心抗原的基因融合与表达 被引量：1

13

作者 朱运峰 石成华 曹诚 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第2期117-121,共5页

乙肝前Ｓ２（ＨＢＶＰｒｅＳ２）肽段由５５个氨基酸组成，其Ｎ端肽段含Ｔｈ和Ｂ细胞抗原决定簇，为增强ＰｒｅＳ２的抗原性，本实验采用将化学合成的ＰｒｅＳ２ｅｐｉｔｏｐｅ（１２０－１４５）基因以串联方式与ＨＢｃＡｇ的基因进行... 乙肝前Ｓ２（ＨＢＶＰｒｅＳ２）肽段由５５个氨基酸组成，其Ｎ端肽段含Ｔｈ和Ｂ细胞抗原决定簇，为增强ＰｒｅＳ２的抗原性，本实验采用将化学合成的ＰｒｅＳ２ｅｐｉｔｏｐｅ（１２０－１４５）基因以串联方式与ＨＢｃＡｇ的基因进行了融合，融合基因在大肠杆菌中获得表达，并通过ＥＬＩＳＡ比较研究了融合蛋白中ＰｒｅＳ_２ｅｐｉｔｏｐｅ单体及串联体的抗原性差异。 展开更多

关键词 乙型肝炎 前S2抗原决定簇 核心抗原 基因融合

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