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PIWIL1在不同肿瘤细胞中的差异性表达 被引量：10
1
作者 田瑞卿 刘民 +1 位作者 李欣 汤华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1072-1075,共4页
PIWI作为AGO蛋白家族的成员,在睾丸中特异表达,在精子形成过程中扮演着重要角色.已有文献报道,PIWIL2也广泛存在于多种肿瘤中,与肿瘤的发生相关.本文旨在确定PIWL1在不同肿瘤细胞中的表达差异性,进而初步探讨PIWIL1的表达差异与肿瘤发... PIWI作为AGO蛋白家族的成员,在睾丸中特异表达,在精子形成过程中扮演着重要角色.已有文献报道,PIWIL2也广泛存在于多种肿瘤中,与肿瘤的发生相关.本文旨在确定PIWL1在不同肿瘤细胞中的表达差异性,进而初步探讨PIWIL1的表达差异与肿瘤发生发展的关系.半定量RT-PCR和Western印迹检测多种肿瘤细胞中,PIWIL1在mRNA水平及蛋白水平的表达情况,进一步用免疫组化和免疫荧光检测PIWIL1在细胞中的表达及定位.PIWIL1在多种肿瘤细胞中的表达存在差异,其中一些肿瘤细胞中的表达水平较高,包括卵巢癌,前列腺癌,肝癌,胃癌等细胞.对于肿瘤细胞而言,PIWIL1定位于细胞浆中.因此,PIWIL1在多种肿瘤细胞中的表达差异性可能为肿瘤发生发展的研究提供新的线索. 展开更多
关键词 AGO蛋白 piwil1 肿瘤
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鸡不同生精细胞中Piwil1基因启动子区DNA甲基化差异研究 被引量：3
2
作者 陈静 翟飞 +9 位作者 夏明秀 陈蓉 徐琪 常国斌 李建超 马腾 王洪志 徐璐 刘璐 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1404-1409,共6页
旨在通过检测不同类型生精细胞中Piwil1基因的转录水平和启动子区甲基化状态,为深入探讨该基因在鸡精子发生过程中的转录调控机制奠定基础。通过荧光定量PCR技术检测Piwil1基因在不同生精细胞的mRNA表达水平,同时采用Bisulfite sequenci... 旨在通过检测不同类型生精细胞中Piwil1基因的转录水平和启动子区甲基化状态,为深入探讨该基因在鸡精子发生过程中的转录调控机制奠定基础。通过荧光定量PCR技术检测Piwil1基因在不同生精细胞的mRNA表达水平,同时采用Bisulfite sequencing PCR法对启动子区进行甲基化修饰、转化和克隆测序,分析甲基化状态。结果发现,鸡Piwil1基因在精子中几乎不表达,在精原细胞的表达量显著高于PGCs、SSCs和四倍体(P<0.01)。鸡Piwil1基因启动子区-233^+298bp存在1个CpG岛,该岛有56个CpG位点。第1~10个CpG位点(-233^-129bp区域),精子细胞、四倍体细胞、PGCs、SSCs中处于未甲基化状态,而精原细胞中甲基化比例高达0.600;第39~55个CpG位点(+105^+252bp区域),不同细胞中的甲基化水平差异显著,精原细胞中仅为0.212。PGCs、SSCs中DNA高甲基化在一定程度上抑制了Piwil1基因的表达。研究表明:在+105^+252bp非编码区域甲基化可能对Piwil1基因转录调控有一定影响,但还存在其他转录调控机制。 展开更多
关键词 鸡 piwil1基因 甲基化 精子发生
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鸡Piwil1基因启动子区转录调控元件的初步分析 被引量：1
3
作者 夏明秀 常国斌 +8 位作者 陈蓉 翟飞 戴爱琴 马腾 王洪志 徐璐 陈静 刘璐 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1349-1354,共6页
旨在确定Piwil1基因核心启动子活性调控区,预测转录因子结合位点,并探讨转录因子对家禽Piwil1基因核心启动子活性的影响。通过将Piwil1基因启动子系列缺失片段插入到pGL3-basic载体,构建重组体质粒,将重组体分别转染COS-7和GC-1细胞系,... 旨在确定Piwil1基因核心启动子活性调控区,预测转录因子结合位点,并探讨转录因子对家禽Piwil1基因核心启动子活性的影响。通过将Piwil1基因启动子系列缺失片段插入到pGL3-basic载体,构建重组体质粒,将重组体分别转染COS-7和GC-1细胞系,使用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定Piwil1基因核心启动子活性调控区,并对调控区进行转录因子结合位点预测;对预测的转录因子NF-Y结合位点进行定点突变,构建重组体质粒,并通过双荧光素酶报告基因检测系统分析其对启动子活性的影响。狼山鸡Piwil1基因的-1 377^-268bp区域在COS-7和GC-1细胞中都有不同程度的启动活性,-221^+1bp启动子活性几乎完全丧失,在-268^-221bp区域有转录因子NF-Y结合位点,定点突变后启动子活性显著下降,认为转录因子NF-Y对启动子活性可能起着重要的调控作用。转录因子NF-Y为Piwil1基因核心启动子区的重要调控元件,为进一步研究Piwil1基因的转录调控机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 piwil1基因 核心启动子 定点突变 双荧光素酶活性检测系统 NF-Y
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Piwil1基因在鸡生殖系干细胞中的表达研究 被引量：1
4
作者 徐璐 陈蓉 +5 位作者 徐琪 翟飞 陈静 王洪志 常国斌 陈国宏 《中国家禽》 北大核心 2014年第7期13-16,共4页
为了探讨Piwil1基因在鸡生殖系干细胞中的生物学功能,本研究以原始生殖细胞和精原干细胞为细胞模型,利用Real-time qPCR技术检测了Piwil1基因在如皋黄鸡生殖系干细胞中的相对表达量。结果表明,Piwil1基因在生殖系细胞中特异性表达,且Piw... 为了探讨Piwil1基因在鸡生殖系干细胞中的生物学功能,本研究以原始生殖细胞和精原干细胞为细胞模型,利用Real-time qPCR技术检测了Piwil1基因在如皋黄鸡生殖系干细胞中的相对表达量。结果表明,Piwil1基因在生殖系细胞中特异性表达,且Piwil1基因在精原干细胞中的表达量显著高于原始生殖细胞,这表明Piwil1基因可能在精原干细胞的"DNA重新甲基化"以及自我更新过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 鸡 piwil1基因 原始生殖细胞 精原干细胞
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PIWIL1基因启动子调控的特异表达Cre重组酶的转基因猪的构建
5
作者 段新平 高飞 +4 位作者 武蓉 宋奇 韩杨 姚潮刚 纪元 《安徽农业科学》 CAS 2012年第9期5231-5233,共3页
[目的]建立PIWIL1基因启动子调控的特异性表达Cre重组酶的转基因猪,为研究piRNA及其相关基因的功能和机制奠定基础。[方法]通过PCR扩增,从猪的全基因组上扩增出PIWIL1基因的启动子。切除猪源Cre重组酶的表达载体pET28a-MHC-Cre-BGHpo1yA... [目的]建立PIWIL1基因启动子调控的特异性表达Cre重组酶的转基因猪,为研究piRNA及其相关基因的功能和机制奠定基础。[方法]通过PCR扩增,从猪的全基因组上扩增出PIWIL1基因的启动子。切除猪源Cre重组酶的表达载体pET28a-MHC-Cre-BGHpo1yA-FRT2neor的启动子MHC,将其与PIWIL1基因启动子连接,构建成特异性表达Cre重组酶的pPIWIL1-Cre载体。将该载体转染小型猪胎儿成纤维细胞,通过G418筛选,获得阳性克隆进行核移植。[结果]获得2头PIWIL1基因启动子调控的特异表达Cre酶的转基因猪。[结论]成功构建了PIWIL1基因启动子调控的特异表达Cre重组酶的转基因猪,为研究piRNA及其相关基因的功能和机制提供了工具猪。 展开更多
关键词 PIRNA piwil1 Cre酶 转基因猪
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EBV相关性胃癌中PIWIL1和PIWIL4表达及与预后的相关性 被引量：2
6
作者 林华妹 邹长棪 +6 位作者 胡丹 苏颖 廖锦容 林可焴 相智声 郑雄伟 林贤东 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期637-642,649,共7页
目的探讨PIWIL1和PIWIL4表达与EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric cancer,EBVaGC)临床病理学特征及预后的关系。方法收集胃腺癌111例,采用原位杂交技术鉴定EBVaGC,应用qRT-PCR检测正常胃黏膜上皮细胞株GES-1、EBV阴性胃癌细胞株MKN... 目的探讨PIWIL1和PIWIL4表达与EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric cancer,EBVaGC)临床病理学特征及预后的关系。方法收集胃腺癌111例,采用原位杂交技术鉴定EBVaGC,应用qRT-PCR检测正常胃黏膜上皮细胞株GES-1、EBV阴性胃癌细胞株MKN-28、EBV感染的胃癌细胞株AGS-BX1、胃腺癌组织及癌旁组织中PIWIL1和PIWIL4的表达,并分析其与临床病理特征的相关性;Kaplan-Meier和Logistic以及Cox分析PIWIL1和PIWIL4表达与EBVaGC预后的相关性。结果PIWIL1与PIWIL4在EBVaGC组中的表达均高于非EBV相关性胃癌(non-EBV-associated gastric cancer,EBVnGC)组(P<0.05)。PIWIL1和PIWIL4在EBVaGC中的表达量分别为0.556±0.096、0.778±0.440,在癌旁组织中的表达量为0.240±0.121、0.501±0.431,分别上调2.31倍及1.55倍(P=0.033,P=0.029)。AGS-BX1中PIWIL1与PIWIL4表达水平高于GES-1和MKN-28(P<0.01)。PIWIL1和PIWIL4表达与胃腺癌TNM分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示,PIWIL4高表达组患者的总生存期较低表达组差(P=0.007)。Logistic及Cox分析显示PIWIL4表达与EBVaGC的预后相关(P<0.05),是EBVaGC预后独立危险因素。结论EBVaGC中PIWIL1和PIWIL4过表达,并与TNM分期和淋巴结转移密切相关,且PIWIL4与患者总生存期相关,是EBVaGC预后的独立危险因素,PIWIL4可能是判断EBVaGC预后的分子标志物。 展开更多
关键词 胃肿瘤 EBV piwil1 PIWIL4 预后
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RNA干扰敲减PIWIL1表达对人结肠癌细胞SW620增殖,粘附及侵袭能力影响 被引量：1
7
作者 任超逸 吴海东 +4 位作者 浦永 汤石明 李欣 刘民 汤华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期55-61,共7页
PIWIL1为AGO蛋白(Argonaute proteins)PIWI亚家族的成员之一,在睾丸中特异表达.其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4在人结肠癌SW620细胞中m... PIWIL1为AGO蛋白(Argonaute proteins)PIWI亚家族的成员之一,在睾丸中特异表达.其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4在人结肠癌SW620细胞中mRNA表达水平,首次证实了在SW620细胞中,PIWIL1相对PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4,其表达水平最高(P(0.05).构建表达针对PIWIL1的小发卡结构干扰RNA的重组质粒,并用Western印迹验证其达到较高的干扰效率.用脂质体将重组质粒转染入SW620细胞中,通过MTT实验、集落形成实验、细胞聚集实验及细胞侵袭转移实验,分别观察到其可抑制SW620细胞的生长、增殖、侵袭转移能力,增强了SW620细胞的粘附能力.提示PIWIL1可能在结肠癌发生、发展过程中发挥作用. 展开更多
关键词 结肠癌 SW620细胞 piwil1 RNA干扰
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胃癌中Piwil1基因启动子区rs28416520位点单核苷酸多态性及其临床意义 被引量：2
8
作者 李珍珍 周兰庭 +2 位作者 翟立红 肖娟 程正江 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1373-1379,共7页
目的分析Piwil1基因启动子区域的单核苷酸多态性(SNP)和胃癌的相关性。方法利用实时定量PCR检测3例胃癌患者肿瘤组织中Piwil1 mRNA的表达,并通过肿瘤转录组测序数据库分析胃癌组织中Piwil1 mRNA的表达水平。采用PCR克隆出Piwil1基因启... 目的分析Piwil1基因启动子区域的单核苷酸多态性(SNP)和胃癌的相关性。方法利用实时定量PCR检测3例胃癌患者肿瘤组织中Piwil1 mRNA的表达,并通过肿瘤转录组测序数据库分析胃癌组织中Piwil1 mRNA的表达水平。采用PCR克隆出Piwil1基因启动子区的序列,直接测序法测定24例胃癌患者和29例健康对照者的基因多态性,并使用SnapGene软件对测序结果进行分析。结果对Cancer RNA-Seq Nexus数据库查询结果和3例胃癌患者肿瘤组织和癌旁组织的实时定量PCR检测结果进行分析,发现胃癌组织中Piwil1基因表达量较癌旁组织高。检测到Piwil1基因启动子两个CpG区域的7个SNP位点,发现仅有一个SNP位点和胃癌有相关性。CpG 67区域rs28416520位点基因型GG、GA、AA在胃癌组中的频率分别为79.2%、16.7%、4.1%,在健康对照组中分别为37.9%、55.2%、6.9%,胃癌组GG基因型频率显著高于对照组(OR=0.144,95%CI:0.045~0564,χ2=9.071,P<0.01)。胃癌组rs28416520等位基因G的频率显著高于对照组(87.5%vs 65.5%;OR=0.271,95%CI:0.099~0.766,χ2=6.856,P<0.01)。其它6个SNP位点在胃癌组和正常组之间没有显著差异。结论Piwil1基因启动子CpG 67区域rs28416520位点基因型GG和等位基因G与胃癌发病风险升高相关,且Piwil1基因在胃癌肿瘤组织中表达升高。 展开更多
关键词 胃癌 piwil1基因 单核苷酸多态性 CPG
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多花黄精对少弱精子症大鼠生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础研究
9
作者 葛晰宇 林启焰 +3 位作者 李霞 韩邦兴 刘东 陈存武 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期3843-3850,共8页
目的阐明多花黄精对少弱精子症大鼠模型生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础。方法采用UHPLC-Q Exactive Focus HRMS技术鉴定多花黄精化学成分,及其提取物灌胃给予大鼠后在血清和睾丸组织中的化学成分。设置空白组、模型组、阳性药组... 目的阐明多花黄精对少弱精子症大鼠模型生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础。方法采用UHPLC-Q Exactive Focus HRMS技术鉴定多花黄精化学成分,及其提取物灌胃给予大鼠后在血清和睾丸组织中的化学成分。设置空白组、模型组、阳性药组(左卡尼汀300 mg/kg)及多花黄精高、中、低剂量组(10、5和2.5 g/kg),考察其改善少弱精子症的药理作用,每组6只大鼠。通过HE染色观察大鼠睾丸组织病理形态,TUNEL染色观察大鼠睾丸生精细胞的凋亡情况,免疫荧光法检测DNMT3A和PIWIL1蛋白表达。结果从多花黄精提取物、大鼠血清、大鼠睾丸中分别鉴定出138种、23种、30种化学成分。模型组大鼠睾丸曲细精管中大量生精细胞凋亡,DNMT3A和PIWIL1蛋白低表达,而多花黄精高、中剂量组大鼠睾丸曲细精管中TUNEL阳性生精细胞数量减少,DNMT3A和PIWIL1蛋白表达显著升高。结论多花黄精对少弱精子症大鼠具有保护作用,其可能是通过上调大鼠睾丸中DNMT3A和PIWIL1的表达,逆转生精细胞的凋亡。 展开更多
关键词 多花黄精 少弱精子症 UHPLC-Q Exactive Focus HRMS 生精细胞 DNMT3A piwil1
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