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PE_PGRS37蛋白通过抑制巨噬细胞自噬流促进结核分枝杆菌的胞内定殖
1
作者
李梦雨
张镇钧
+9 位作者
冯婷婷
王慧
聂蝉蝉
陈春文
高云洁
段祎凡
郭若男
崔莹莹
党光辉
刘思国
《中国人兽共患病学报》
北大核心
2025年第10期1005-1010,1015,共7页
目的研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族蛋白PE_PGRS37对耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)生长及巨噬细胞自噬的影响,探讨其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法通过PCR从Mtb基因组中扩增pe_pgrs37基因...
目的研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族蛋白PE_PGRS37对耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)生长及巨噬细胞自噬的影响,探讨其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法通过PCR从Mtb基因组中扩增pe_pgrs37基因,利用同源重组法构建重组载体pAIN-PE_PGRS37。电击法将pAIN-PE_PGRS37和pAIN分别整合入Ms中,构建重组菌pAIN-PE_PGRS37/Ms和pAIN/Ms,应用Western blot方法鉴定PE_PGRS37蛋白在Ms中的表达情况。将重组菌接种于7H9/7H10培养基中观察其菌落形态及生长曲线。利用pAIN-PE_PGRS37/Ms及pAIN/Ms感染U937细胞,通过Western blot和免疫荧光检测巨噬细胞自噬流水平,菌落计数法检测重组菌的胞内存活情况。结果成功构建重组载体pAINPE_PGRS37。Western blot鉴定结果显示,pAIN-PE_PGRS37/Ms中正确表达PE_PGRS37蛋白。与pAIN/Ms相比,pAINPE_PGRS37/Ms的菌落形态无明显差异,生长速度在10~16 h显著增加,26 h时共同到达平台期。与pAIN/Ms感染组相比,pAIN-PE_PGRS37/Ms感染U937细胞24 h后,巨噬细胞LC3-Ⅱ和p62蛋白的表达量显著上调(P<0.001),并抑制自噬体和溶酶体融合。与pAIN/Ms相比,pAIN-PE_PGRS37/Ms可以在12 h,24 h和48 h时显著增加其在巨噬细胞中的存活(P<0.05)。结论PE_PGRS37蛋白通过阻断巨噬细胞自噬流从而抑制巨噬细胞自噬,促进分枝杆菌在巨噬细胞中存活。
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关键词
结核分枝杆菌
自噬
PE/PPE家族蛋白
pe_pgrs37
蛋白
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题名
PE_PGRS37蛋白通过抑制巨噬细胞自噬流促进结核分枝杆菌的胞内定殖
1
作者
李梦雨
张镇钧
冯婷婷
王慧
聂蝉蝉
陈春文
高云洁
段祎凡
郭若男
崔莹莹
党光辉
刘思国
机构
东北农业大学动物医学学院
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
出处
《中国人兽共患病学报》
北大核心
2025年第10期1005-1010,1015,共7页
基金
十四五国家重点研发计划(No.2021YFD1800403)
国家自然科学基金(No.32273005)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(No.1610302024002)。
文摘
目的研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族蛋白PE_PGRS37对耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)生长及巨噬细胞自噬的影响,探讨其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法通过PCR从Mtb基因组中扩增pe_pgrs37基因,利用同源重组法构建重组载体pAIN-PE_PGRS37。电击法将pAIN-PE_PGRS37和pAIN分别整合入Ms中,构建重组菌pAIN-PE_PGRS37/Ms和pAIN/Ms,应用Western blot方法鉴定PE_PGRS37蛋白在Ms中的表达情况。将重组菌接种于7H9/7H10培养基中观察其菌落形态及生长曲线。利用pAIN-PE_PGRS37/Ms及pAIN/Ms感染U937细胞,通过Western blot和免疫荧光检测巨噬细胞自噬流水平,菌落计数法检测重组菌的胞内存活情况。结果成功构建重组载体pAINPE_PGRS37。Western blot鉴定结果显示,pAIN-PE_PGRS37/Ms中正确表达PE_PGRS37蛋白。与pAIN/Ms相比,pAINPE_PGRS37/Ms的菌落形态无明显差异,生长速度在10~16 h显著增加,26 h时共同到达平台期。与pAIN/Ms感染组相比,pAIN-PE_PGRS37/Ms感染U937细胞24 h后,巨噬细胞LC3-Ⅱ和p62蛋白的表达量显著上调(P<0.001),并抑制自噬体和溶酶体融合。与pAIN/Ms相比,pAIN-PE_PGRS37/Ms可以在12 h,24 h和48 h时显著增加其在巨噬细胞中的存活(P<0.05)。结论PE_PGRS37蛋白通过阻断巨噬细胞自噬流从而抑制巨噬细胞自噬,促进分枝杆菌在巨噬细胞中存活。
关键词
结核分枝杆菌
自噬
PE/PPE家族蛋白
pe_pgrs37
蛋白
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
autophagy
PE/PPE family protein
pe_pgrs37
分类号
R378.91 [医药卫生—病原生物学]
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1
PE_PGRS37蛋白通过抑制巨噬细胞自噬流促进结核分枝杆菌的胞内定殖
李梦雨
张镇钧
冯婷婷
王慧
聂蝉蝉
陈春文
高云洁
段祎凡
郭若男
崔莹莹
党光辉
刘思国
《中国人兽共患病学报》
北大核心
2025
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