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结核分枝杆菌PE/PPE蛋白家族生物学研究进展 被引量：4
1
作者 王璞 蔡玉荣 +3 位作者 张刚 孔云逸 穆爱娟 李勇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期937-944,共8页
结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是引起结核病的病原体,也是单一感染微生物导致死亡的最重要原因。在MTB基因组上有一类特殊的蛋白家族——PE/PPE蛋白家族,该蛋白家族对细菌毒力、抗原变异、宿主细胞命运等至关重要,且在... 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是引起结核病的病原体,也是单一感染微生物导致死亡的最重要原因。在MTB基因组上有一类特殊的蛋白家族——PE/PPE蛋白家族,该蛋白家族对细菌毒力、抗原变异、宿主细胞命运等至关重要,且在特异性诊断试剂和疫苗研制中具有广阔的应用前景。本文将从PE/PPE蛋白家族的结构特征、生物学功能、及其对宿主免疫反应调控等方面的近年来研究进展作一综述。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 pe/ppe TH1 巨噬细胞
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结核分枝杆菌PE/PPE蛋白研究进展 被引量：2
2
作者 孙林 闵晨雨 +1 位作者 钱源 焦新安 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期499-503,共5页
PE/PPE蛋白是分枝杆菌所独有的蛋白家族,因其氨基端分别含有Pro-Glu(PE)和Pro-Pro-Glu(PPE)的基序而得名,其编码基因约占结核分枝杆菌整个基因组的10%。PE/PPE蛋白从被发现开始就引起了人们的广泛兴趣,本文就近年来的研究进展作一综述。
关键词 结核分枝杆菌 pe ppe蛋白
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结核分枝杆菌耐药机制研究进展和PE/PPE蛋白在介导细菌耐药中的作用 被引量：3
3
作者 王晴岚 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2020年第9期1043-1051,共9页
结核病是一种由结核分枝杆菌感染引起的,以空气传播为主的传染病,目前仍是全球公共卫生安全的重大威胁。随着抗结核抗生素的广泛使用,结核病的耐药问题也愈演愈烈,出现了多耐药结核、广泛耐药结核甚至完全耐药结核。对临床用抗结核药物... 结核病是一种由结核分枝杆菌感染引起的,以空气传播为主的传染病,目前仍是全球公共卫生安全的重大威胁。随着抗结核抗生素的广泛使用,结核病的耐药问题也愈演愈烈,出现了多耐药结核、广泛耐药结核甚至完全耐药结核。对临床用抗结核药物作用机制和结核分枝杆菌对应耐药机制的研究,有利于我们开发新的抗结核药物,改造现有抗结核药物和研发新的耐药诊断技术。本文综述了近年来有关抗结核新药的作用机制及细菌耐药机制的研究进展,并特别讨论了最新发现的结核分枝杆菌外膜通道蛋白PE/PPE蛋白可能在结核分枝杆菌耐药中的重要作用,以期为后续的相关研究提供一定的参考。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 药物作用机制 耐药机制 外膜通道蛋白 pe/ppe蛋白
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与结核分枝杆菌PE25/PPE41和PE35/PPE68相互作用的宿主蛋白的筛选 被引量：1
4
作者 李田田 陈利苹 刘思国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期504-507,共4页
为筛选与结核分枝杆菌(MTB)的PE25/PPE41和PE35/PPE68两对异源二聚体相互作用的宿主蛋白,本研究以这两对异源二聚体为诱饵蛋白筛选与其相互作用的宿主蛋白。首先将PCR扩增的PE25/PPE41或PE35/PPE68基因串联克隆于改造的pc DNA3.1(+)中(... 为筛选与结核分枝杆菌(MTB)的PE25/PPE41和PE35/PPE68两对异源二聚体相互作用的宿主蛋白,本研究以这两对异源二聚体为诱饵蛋白筛选与其相互作用的宿主蛋白。首先将PCR扩增的PE25/PPE41或PE35/PPE68基因串联克隆于改造的pc DNA3.1(+)中(在5'端引入了以编码烟草蚀纹病毒蛋白酶切位点的序列连接的ZZ和Flag标签序列),构建诱饵重组质粒pcDNA-PE25-PPE41和pc DNA-PE35-PPE68。分别将构建的诱饵重组质粒转染293T细胞后提取细胞总蛋白,经ZZ和Flag标签蛋白两步串联亲和层析钓取宿主蛋白,SDS-PAGE电泳分离后切取差异蛋白胶条进行质谱分析,结果显示,PE25/PPE41鉴定到15个差异蛋白,PE35/PPE68鉴定到29个差异蛋白,并分别挑选了与PE25/PPE41和PE35/PPE68相互作用的3个和7个差异蛋白,为进一步验证与PE25/PPE41和PE35/PPE68直接作用的宿主蛋白及研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 pe25/ppe41 pe35/ppe68 宿主互作蛋白 串联亲和纯化
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结核分枝杆菌PE22/PPE36融合蛋白对耻垢分枝杆菌表型及巨噬细胞功能影响的研究
5
作者 杨雨婷 李玉洁 +1 位作者 余海燕 杨国平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期523-532,共10页
目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达... 目的将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族重组融合蛋白PE22/PPE36异源表达于耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)后,探讨其对Ms表型及巨噬细胞功能的影响,分析其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法原核表达获取融合蛋白PE22/PPE36,纯化后免疫6~8周龄小鼠制备多克隆抗体;电击法构建重组菌Ms_PE22/PPE36及Ms_vec,并用所制备的多克隆抗体验证重组融合蛋白在Ms中的表达。将重组菌接种于2×YT培养基中观察其菌落形态及生长曲线;点板法及菌落计数法检测重组菌在H_(2)O_(2)、SDS、溶菌酶、NaNO_(2)、低pH、饥饿等压力条件下的存活情况,以分析PE22/PPE36融合蛋白对Ms表型的影响;重组菌侵染巨噬细胞ANA-1及RAW 264.7后,流式细胞术检测ANA-1细胞凋亡率,ELISA法检测ANA-1细胞TNF-α及IL-6分泌量,Griess法检测ANA-1及RAW 264.7细胞NO分泌量并用通道抑制剂检测所涉及的通路,菌落计数法检测重组菌在ANA-1及RAW 264.7细胞内的存活情况。结果与Ms_vec组相比,Ms_PE22/PPE36的菌落形态、生物膜形成及在溶菌酶、NaNO_(2)、低pH等压力条件下的存活率差异无统计学意义(溶菌酶:t 3 h=0.082,t 6 h=0.174,t 9 h=0.355;NaNO_(2):t 3 h=0.950,t 6 h=1.274;低pH:t 3 h=1.869,t 6 h=1.119,t 9 h=0.091;均P>0.05);在H_(2)O_(2)、SDS压力条件下存活率明显降低(H_(2)O_(2):t 6 h=4.35,t 8 h=4.80;SDS:t 4 h=10.43,t 6 h=2.793;均P<0.05);而稳定期生长速率及在饥饿压力条件下的存活率明显增高(生长速率:t 30 h=5.39,t 36 h=2.55,t 42 h=3.48;饥饿:t=3.323;均P<0.05);与Ms_vec感染组相比,Ms_PE22/PPE36组ANA-1细胞的早期凋亡率及TNF-α分泌量明显增加(早期凋亡:F=4.765;TNF-α:t 24 h=26.642,t_(48)h=7.634;均P<0.05),IL-6分泌量明显减少(t 24 h=5.888,t_(48)h=3.001;均P<0.05),ANA-1及RAW264.7细胞NO分泌量明显增加(ANA-1:F_(12)h=163.267,F_(24)h=111.530,F 48 h=500.328;RAW 264.7:F_(12)h=133.202,F_(24)h=718.436,F 48 h=1434.9;均P<0.05),且可被通道抑制剂Bay 11-7082、U0126及SB203580明显抑制(ANA-1:t NF-κB=32.074;t ERK=11.679;t p38=16.840;RAW 264.7:t NF-κB=119.112;均P<0.001);与Ms_vec相比,Ms_PE22/PPE36在ANA-1细胞内的存活率无明显变化(t_(48)h=0.327,t_(72)h=1.933,均P>0.05),在RAW 264.7细胞内的存活率明显降低(t_(48)h=5.509,t_(72)h=5.417;均P<0.05)。结论重组融合蛋白PE22/PPE36可改变Ms的表型并调控巨噬细胞的免疫应答。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耻垢分枝杆菌 pe22/ppe36融合蛋白 巨噬细胞
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结核分枝杆菌PE26蛋白调节巨噬细胞免疫反应进而促进分枝杆菌胞内定殖 被引量：11
6
作者 陈凡若 党光辉 +5 位作者 张嘉俊 鹿萍 崔宁 崔莹莹 崔子寅 刘思国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期502-509,共8页
结核分枝杆菌(MTB)PE/PPE家族蛋白介导MTB与宿主间的相互作用,调节宿主炎症反应,有助于其的存活和疾病发展。为研究PE/PPE家族中PE26蛋白的作用,本实验利用PCR扩增pe26基因片段,构建重组载体p AIN-PE26,转化耻垢分枝杆菌(Ms)构建重组菌p... 结核分枝杆菌(MTB)PE/PPE家族蛋白介导MTB与宿主间的相互作用,调节宿主炎症反应,有助于其的存活和疾病发展。为研究PE/PPE家族中PE26蛋白的作用,本实验利用PCR扩增pe26基因片段,构建重组载体p AIN-PE26,转化耻垢分枝杆菌(Ms)构建重组菌p AIN-PE26/Ms,经western blot鉴定结果显示,p AIN-PE26/Ms正确表达重组PE26蛋白(rPE26)。利用差速离心分离p AIN-PE26/Ms亚细胞组分,经western blot鉴定结果显示,r PE26定位于p AIN-PE26/Ms细胞壁。通过p AIN-PE26/Ms的菌落形态观察和生长曲线测定,结果显示,p AIN-PE26/Ms菌体表面较p AIN/Ms对照组更粗糙,脊不规则且相对较高,褶皱不明显;p AIN-PE26/Ms生长速度较对照组极显著增加(P<0.001)。利用H37Ra感染巨噬细胞,通过q RT-PCR检测pe26转录水平,结果显示,H37Ra感染巨噬细胞后pe26转录水平极显著增加(P<0.001)。利用p AIN-PE26/Ms感染巨噬细胞,分别通过q RT-PCR、ELISA检测细胞因子转录和表达水平,采用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验、流式细胞术和胞内定殖的方法检测细胞毒性,结果显示,p AIN-PE26/Ms促进宿主细胞炎性细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α)的转录和表达(P<0.05);r PE26促进巨噬细胞死亡,且在感染48 h时促进细胞早期凋亡(P<0.05);r PE26促进p AIN-PE26/Ms在巨噬细胞内的定殖(P<0.01)。上述结果首次表明,定位于细胞壁的r PE26在感染巨噬细胞过程中促进p AIN-PE26/Ms的生长、炎性细胞因子的转录和表达、巨噬细胞凋亡和胞内定殖。本实验为解析PE26参与分枝杆菌的致病机制和MTB调节宿主免疫反应的机制提供一定参考依据。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 巨噬细胞 pe/ppe家族蛋白 pe26
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PE_PGRS37蛋白通过抑制巨噬细胞自噬流促进结核分枝杆菌的胞内定殖
7
作者 李梦雨 张镇钧 +9 位作者 冯婷婷 王慧 聂蝉蝉 陈春文 高云洁 段祎凡 郭若男 崔莹莹 党光辉 刘思国 《中国人兽共患病学报》 2025年第10期1005-1010,1015,共7页
目的研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族蛋白PE_PGRS37对耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)生长及巨噬细胞自噬的影响,探讨其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法通过PCR从Mtb基因组中扩增pe_pgrs37基因... 目的研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)PE/PPE家族蛋白PE_PGRS37对耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)生长及巨噬细胞自噬的影响,探讨其在Mtb感染过程中发挥的作用。方法通过PCR从Mtb基因组中扩增pe_pgrs37基因,利用同源重组法构建重组载体pAIN-PE_PGRS37。电击法将pAIN-PE_PGRS37和pAIN分别整合入Ms中,构建重组菌pAIN-PE_PGRS37/Ms和pAIN/Ms,应用Western blot方法鉴定PE_PGRS37蛋白在Ms中的表达情况。将重组菌接种于7H9/7H10培养基中观察其菌落形态及生长曲线。利用pAIN-PE_PGRS37/Ms及pAIN/Ms感染U937细胞,通过Western blot和免疫荧光检测巨噬细胞自噬流水平,菌落计数法检测重组菌的胞内存活情况。结果成功构建重组载体pAINPE_PGRS37。Western blot鉴定结果显示,pAIN-PE_PGRS37/Ms中正确表达PE_PGRS37蛋白。与pAIN/Ms相比,pAINPE_PGRS37/Ms的菌落形态无明显差异,生长速度在10~16 h显著增加,26 h时共同到达平台期。与pAIN/Ms感染组相比,pAIN-PE_PGRS37/Ms感染U937细胞24 h后,巨噬细胞LC3-Ⅱ和p62蛋白的表达量显著上调(P<0.001),并抑制自噬体和溶酶体融合。与pAIN/Ms相比,pAIN-PE_PGRS37/Ms可以在12 h,24 h和48 h时显著增加其在巨噬细胞中的存活(P<0.05)。结论PE_PGRS37蛋白通过阻断巨噬细胞自噬流从而抑制巨噬细胞自噬,促进分枝杆菌在巨噬细胞中存活。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 自噬 pe/ppe家族蛋白 pe_PGRS37蛋白
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