【目的】确定广东某规模化猪场发病猪是否为猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染,并评估病毒的遗传特性及其在猪群中的流行情况,为疫病的防控提供科学数据支持。【方法】采用实时荧光定量PCR和ELISA方法对猪场病猪的肾...【目的】确定广东某规模化猪场发病猪是否为猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染,并评估病毒的遗传特性及其在猪群中的流行情况,为疫病的防控提供科学数据支持。【方法】采用实时荧光定量PCR和ELISA方法对猪场病猪的肾脏、淋巴结、脾脏等内脏组织及血清样本进行检测分析,并通过PCR扩增PCV2阳性样本的ORF2基因。利用DNAStar软件包中的MegAlign模块对所得ORF2基因序列与GenBank数据库中23株PCV2参考毒株进行相似性比对。运用Mega 7.0软件构建基于ORF2基因序列的遗传进化树,以明确鉴定毒株与参考毒株之间的遗传关系。【结果】流行病学调查、临床症状及病理解剖结果显示,该猪场病猪符合PCV2感染的特征。实时荧光定量PCR检测发现3份样本的Ct值分别为14.42、15.13和16.08,表明病毒载量较高,且PCV2检测结果为阳性。ELISA检测结果显示,不同日龄段猪群中Cap蛋白抗体阳性率介于60%~100%之间,而Rep蛋白抗体阳性率则在0~100%之间,特别是150日龄猪群的2种蛋白抗体阳性率均达到100%,表明PCV2感染强度较高。ORF2基因测序获得了3条序列,分别命名为LZC-2305-1、LZC-2305-2和LZC-2305-3。相似性分析结果显示,这3条序列间具有99.9%~100%的相似性,且与GenBank中的23株PCV2参考毒株序列的相似性为82.3%~99.7%,其中与CZ246序列相似性最高,为99.6%~99.7%。遗传进化树分析进一步证实,本研究获得的3条序列与CZ246序列具有最近的亲缘关系,归属于PCV2的2d分支。【结论】本研究确诊该猪场猪群发生了PCV2d分支的感染。本研究结果不仅为该猪场的PCV2防控提供了科学依据,也为其他规模化猪场的疫病监测与防控提供了参考。展开更多
【目的】了解广东省某猪群中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株的遗传进化情况,丰富PCV2分子流行病学数据,为当地PCV2疫苗候选株的选用和研发提供参考。【方法】使用qPCR方法对疑似PCV2的样品进行检测,发现1株具...【目的】了解广东省某猪群中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株的遗传进化情况,丰富PCV2分子流行病学数据,为当地PCV2疫苗候选株的选用和研发提供参考。【方法】使用qPCR方法对疑似PCV2的样品进行检测,发现1株具有高病毒载量的PCV2毒株,命名为GD222858。通过PCR方法进行全基因组分子克隆及遗传进化分析。使用MegAlign软件将该毒株ORF1、ORF2基因编码的氨基酸序列与PCV2同亚型参考毒株进行比对,分析氨基酸序列的相似性;采用DNAStar预测该毒株的Cap蛋白二级结构及B细胞表位,并与4株疫苗株DBN-SX07-2(HM641752)、LG(HM038034)、SH(HM038027)、ZJ(AY686764)的Cap蛋白抗原指数进行比对分析。【结果】GD222858毒株基因组长度为1767 bp。遗传进化分析表明该毒株属于PCV2d亚型。与国内外82株参考毒株的核苷酸相似性为91.4%~99.6%,与越南毒株Han8(GenBank登录号:JQ181600)的亲缘关系最近。在ORF1编码的Rep蛋白处发现多个特异性突变位点F70Y、F77L、W202R、N256S;ORF2编码的Cap蛋白相对保守。Protean预测Cap蛋白的氨基酸第5~18、24~25、39~41、48~49、57~65、99、101、112~114、139~140、145~150、162~165、175~181、188~189、205~211、227~232位置处均可能存在潜在的B细胞表位。GD222858毒株的Cap蛋白抗原指数与4株疫苗株均有差异,在氨基酸45~57、124~132、223~233位置处抗原指数明显高于4株疫苗株,且与疫苗株HM038034差异最大。【结论】GD222858毒株感染猪群的原因可能是Rep蛋白多个位点发生特异性突变及疫苗株选用不当所致。展开更多
文摘【目的】确定广东某规模化猪场发病猪是否为猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染,并评估病毒的遗传特性及其在猪群中的流行情况,为疫病的防控提供科学数据支持。【方法】采用实时荧光定量PCR和ELISA方法对猪场病猪的肾脏、淋巴结、脾脏等内脏组织及血清样本进行检测分析,并通过PCR扩增PCV2阳性样本的ORF2基因。利用DNAStar软件包中的MegAlign模块对所得ORF2基因序列与GenBank数据库中23株PCV2参考毒株进行相似性比对。运用Mega 7.0软件构建基于ORF2基因序列的遗传进化树,以明确鉴定毒株与参考毒株之间的遗传关系。【结果】流行病学调查、临床症状及病理解剖结果显示,该猪场病猪符合PCV2感染的特征。实时荧光定量PCR检测发现3份样本的Ct值分别为14.42、15.13和16.08,表明病毒载量较高,且PCV2检测结果为阳性。ELISA检测结果显示,不同日龄段猪群中Cap蛋白抗体阳性率介于60%~100%之间,而Rep蛋白抗体阳性率则在0~100%之间,特别是150日龄猪群的2种蛋白抗体阳性率均达到100%,表明PCV2感染强度较高。ORF2基因测序获得了3条序列,分别命名为LZC-2305-1、LZC-2305-2和LZC-2305-3。相似性分析结果显示,这3条序列间具有99.9%~100%的相似性,且与GenBank中的23株PCV2参考毒株序列的相似性为82.3%~99.7%,其中与CZ246序列相似性最高,为99.6%~99.7%。遗传进化树分析进一步证实,本研究获得的3条序列与CZ246序列具有最近的亲缘关系,归属于PCV2的2d分支。【结论】本研究确诊该猪场猪群发生了PCV2d分支的感染。本研究结果不仅为该猪场的PCV2防控提供了科学依据,也为其他规模化猪场的疫病监测与防控提供了参考。
文摘【目的】了解广东省某猪群中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株的遗传进化情况,丰富PCV2分子流行病学数据,为当地PCV2疫苗候选株的选用和研发提供参考。【方法】使用qPCR方法对疑似PCV2的样品进行检测,发现1株具有高病毒载量的PCV2毒株,命名为GD222858。通过PCR方法进行全基因组分子克隆及遗传进化分析。使用MegAlign软件将该毒株ORF1、ORF2基因编码的氨基酸序列与PCV2同亚型参考毒株进行比对,分析氨基酸序列的相似性;采用DNAStar预测该毒株的Cap蛋白二级结构及B细胞表位,并与4株疫苗株DBN-SX07-2(HM641752)、LG(HM038034)、SH(HM038027)、ZJ(AY686764)的Cap蛋白抗原指数进行比对分析。【结果】GD222858毒株基因组长度为1767 bp。遗传进化分析表明该毒株属于PCV2d亚型。与国内外82株参考毒株的核苷酸相似性为91.4%~99.6%,与越南毒株Han8(GenBank登录号:JQ181600)的亲缘关系最近。在ORF1编码的Rep蛋白处发现多个特异性突变位点F70Y、F77L、W202R、N256S;ORF2编码的Cap蛋白相对保守。Protean预测Cap蛋白的氨基酸第5~18、24~25、39~41、48~49、57~65、99、101、112~114、139~140、145~150、162~165、175~181、188~189、205~211、227~232位置处均可能存在潜在的B细胞表位。GD222858毒株的Cap蛋白抗原指数与4株疫苗株均有差异,在氨基酸45~57、124~132、223~233位置处抗原指数明显高于4株疫苗株,且与疫苗株HM038034差异最大。【结论】GD222858毒株感染猪群的原因可能是Rep蛋白多个位点发生特异性突变及疫苗株选用不当所致。
