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猪PCSK9单克隆抗体的制备及其在PRRSV感染过程中的应用
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作者 张玉娇 刘长龙 +7 位作者 姜一峰 虞凌雪 周艳君 赵款 李丽薇 曹云雷 童光志 高飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期106-112,共7页
实验室前期shot-gun质谱结果表明PCSK9在PAM空细胞和PRRSV感染组PAM细胞间存在差异表达。为了深入研究PCSK9与PRRSV间的相互作用机制,本实验在体外合成猪PCSK9基因并克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28aPCSK9。利用该... 实验室前期shot-gun质谱结果表明PCSK9在PAM空细胞和PRRSV感染组PAM细胞间存在差异表达。为了深入研究PCSK9与PRRSV间的相互作用机制,本实验在体外合成猪PCSK9基因并克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28aPCSK9。利用该原核表达系统获得了高效表达的重组蛋白PCSK9(约75kDa),进一步通过镍柱亲和层析技术纯化重组蛋白PCSK9作为免疫原,皮下免疫5-6周龄的BALB/c小鼠(100ng/只),获得了1株产生PCSK9特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2A2B12)。应用此单克隆抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染PAM细胞后的内源性PCSK9变化情况进行了检测。Western blot和IFA结果表明本实验制备的PCSK9单克隆抗体具有良好的特异性,抗体针对的表位位于PCSK9的C端结构域(463-705 aa);此外,Western blot结果表明PRRSV感染可抑制PCSK9蛋白的表达,过表达PCSK9对PRRSV的复制有明显的抑制作用。本研究中研制的抗体可为今后猪源PCSK9与PRRSV的相互作用研究提供工具支持。 展开更多
关键词 pcsk9 单克隆抗体 PRRSV
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前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体全球研究趋势及热点分析
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作者 姜宁 孟文爽 +2 位作者 陈丽娜 颜耀东 武明芬 《医药导报》 CAS 北大核心 2024年第4期630-635,共6页
目的分析前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)单克隆抗体的全球研究现状、热点及前沿,为我国相关科研工作的开展及临床合理用药提供参考。方法检索2011年1月—2022年2月Web of Science数据... 目的分析前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)单克隆抗体的全球研究现状、热点及前沿,为我国相关科研工作的开展及临床合理用药提供参考。方法检索2011年1月—2022年2月Web of Science数据库中收录的PCSK9单克隆抗体相关研究文献,通过可视化文献分析软件(CiteSpace)对纳入研究的文献进行分析。结果共纳入文献723篇,年发文量呈总体上升趋势,发文量排名前3位的国家分别为美国、法国和英国,发文量最多的机构是赛诺菲公司,文献篇均被引最高的机构是布莱根妇女医院;研究的热点内容主要有PCSK9单克隆抗体对高胆固醇血症、不耐受他汀类药物的患者、心血管高风险患者、联合他汀类药物降脂治疗的有效性和安全性;近两年研究的前沿为PCSK9单克隆抗体在急性冠脉综合征患者中的应用以及降低脂蛋白(a)水平后的临床获益。结论PCSK9单克隆抗体降血脂的有效性和安全性已经过大量研究证实,但仍缺乏对其经济性及在特殊人群中的应用研究,未来研究应重点关注。 展开更多
关键词 pcsk9单克隆抗体 依洛尤单抗 阿利西尤单抗 可视化文献分析 文献计量学
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禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体的研制和初步应用 被引量:4
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作者 唐应华 张评浒 +2 位作者 薛峰 刘晓文 刘秀梵 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期13-15,19,共4页
目的:获得特异针对禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体。方法:以H9N2亚型病毒制成疫苗免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,取细胞上清用HI筛选。结果:共获得9株稳定分泌针对血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞;经广谱性和特异性鉴定,所有单抗... 目的:获得特异针对禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体。方法:以H9N2亚型病毒制成疫苗免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,取细胞上清用HI筛选。结果:共获得9株稳定分泌针对血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞;经广谱性和特异性鉴定,所有单抗株均能与所有检测的82株不同年代不同地方不同禽源H9亚型流感病毒大部分分离株反应,且所有单抗株均不与非AⅣ-H9病毒反应,而其中一株(8E6)能与所有检测的H9亚型病毒株反应。进行Western blot分析显示, 其中8株单抗能与AⅣ的Mr为75 000处反应,表明是针对AⅣ H9 HA的单抗。结论:本试验获得9株广谱性特异性很好的单抗,特别是8E6株;这些单抗株为以后作病毒抗原性位点分析、临床检测和流行病学调查提供了良好试剂。 展开更多
关键词 H9亚型禽流感 血凝素 单克隆抗体 WESTERN BLOT
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白单克隆抗体制备与鉴定 被引量:3
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作者 赵孟孟 张二芹 +5 位作者 冯松林 郭依嘉 阮海宇 王文佳 邢星 张桂红 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期63-69,共7页
根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂... 根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂交瘤细胞阳性克隆筛选,2次亚克隆后共获得3株抗PRRSV NSP9单克隆抗体,命名为3B17、3J13、3F19。这3株单抗可与大肠杆菌表达的蛋白产物和PRRSV感染的Marc-145细胞发生特异性反应。在PRRSV感染的Marc-145细胞中,NSP9蛋白表达水平接毒后不断升高,48 h达最高,为深入研究NSP9功能奠定基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP9 单克隆抗体 杂交瘤
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H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体制备及鉴定 被引量:2
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作者 邓显文 谢芝勋 +9 位作者 谢志勤 刘加波 庞耀珊 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 张艳芳 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期679-683,共5页
【目的】制备H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)单克隆抗体,为检测诊断AIV提供技术支持。【方法】以灭活H9亚型AIV广西分离株为免疫原,免疫6~8周BALB/c雌性小鼠,然后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经血凝抑制试验(HI)及间接... 【目的】制备H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)单克隆抗体,为检测诊断AIV提供技术支持。【方法】以灭活H9亚型AIV广西分离株为免疫原,免疫6~8周BALB/c雌性小鼠,然后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经血凝抑制试验(HI)及间接免疫荧光试验(IFA)筛选H9亚型AIV血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞。【结果】经过4次亚克隆,获得3株稳定的H9单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为8A4、1B11和7F1细胞株,其细胞株培养上清液HI效价为2~7~2^(10),腹水HI效价为2^(16)~2^(19);单克隆抗体亚类鉴定结果表明,3株H9单克隆抗体均属于Ig G1亚类,其轻链均为K链。3株H9单克隆抗体只与H9亚型AIV发生特异性HI反应,而与其他HA亚型AIV及新城疫病毒(NDV)、减蛋综合症病毒(EDS)、传染性支气管炎病毒(IBV)无交叉反应。3株H9单克隆抗体细胞株的抗体分泌能力稳定性良好。【结论】用灭活H9亚型AIV为免疫原能成功制备针对H9亚型AIV血凝素的单克隆抗体,且具有良好的亚型广谱性和特异性。 展开更多
关键词 禽流感病毒(AIV) H9亚型 血凝素 单克隆抗体 HI效价 亚型广谱性
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H9N2亚型禽流感病毒中和单克隆抗体的制备与应用 被引量:4
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作者 李青梅 郭军庆 +8 位作者 孟泽锟 李艳华 刘肖 石建州 李鸽 柴书军 罗俊 邓瑞广 张改平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第10期3761-3769,共9页
为建立H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)免疫层析快速检测技术,本研究以差速离心法纯化H9N2亚型AIV免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合和HAT选择性培养;以H9N2亚型AIV感染MDCK细胞建立异源免... 为建立H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)免疫层析快速检测技术,本研究以差速离心法纯化H9N2亚型AIV免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合和HAT选择性培养;以H9N2亚型AIV感染MDCK细胞建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法,通过对杂交瘤细胞的IPMA筛选和连续克隆化筛选鉴定抗H9N2亚型AIV中和性单克隆抗体;以胶体金标记HA单克隆抗体,配对HA单克隆抗体和羊抗小鼠IgG为检测线和质控线,制备H9N2亚型AIV快速检测试纸条,测定其特异性和敏感性。结果显示,获得了11株稳定分泌抗H9N2亚型AIV单克隆抗体的杂交瘤细胞,其单克隆抗体腹水IPMA效价在1.28×10^(-4)至2.56×10^(-5)之间。单克隆抗体3A2、5H6、6B8、7E10和9G12血凝抑制试验(HI)显示血凝抑制活性,其(HI)效价在6log2~9log2之间。单克隆抗体3A2、6B8和9G12在病毒中和试验中对H9N2亚型AIV有显著病毒中和活性,中和效价分别1∶6400、1∶25600和1∶25600。Western blotting结果提示,该中和单克隆抗体识别HA蛋白线性抗原表位。利用配对单克隆抗体3A2和9G12研制的H9N2亚型AIV检测试纸条检测H9N2亚型AIV尿囊液的效价为9log2,灵敏度与经典血凝试验(HA)相当,与其他亚型AIV(H1、H3、H5、H7),以及新城疫病毒和鸡传染性法氏囊病病毒等相关病毒均无交叉反应。本研究制备了具有病毒中和活性的抗H9N2亚型AIV单克隆抗体,并初步研制了H9N2亚型AIV检测试纸条,为H9N2亚型AIV新型疫苗研制和快速检测奠定良好的研究基础。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 单克隆抗体 血凝抑制 病毒中和 免疫层析试纸条
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用基因疫苗制备H9亚型禽流感病毒单克隆抗体 被引量:2
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作者 詹爱军 王新卫 +3 位作者 王敬师 李少璃 于康震 毕英佐 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期117-120,共4页
用H9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因反转录cDNA第一链PCR扩增其HA基因,PCR产物与pcDNA3.1(+)质粒构建重组质粒作为基因疫苗免疫8周龄Balb/C小鼠,细胞融合后用血凝抑制试验(HI)和ELISA试验检测细胞培养上清,各获得一株阳性细胞株,经3次亚克... 用H9亚型禽流感病毒(AIV)HA基因反转录cDNA第一链PCR扩增其HA基因,PCR产物与pcDNA3.1(+)质粒构建重组质粒作为基因疫苗免疫8周龄Balb/C小鼠,细胞融合后用血凝抑制试验(HI)和ELISA试验检测细胞培养上清,各获得一株阳性细胞株,经3次亚克隆后都能稳定分泌H9AIV特异性抗体。特异性检测与NDV、H5亚型AIV、产蛋下降综合症(EDS76)病毒毒株没有反应,2株单抗经亚型鉴定均为IgG2b,轻链的亚型为kappa链。所获得的单克隆抗体将在禽流感快速诊断和疾病预警监控中发挥重要作用。 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 血凝素 单克隆抗体 基因免疫
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H9亚型禽流感病毒基质蛋白M1单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:6
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作者 戴晓光 滕巧泱 +6 位作者 黄海碧 王朝霞 张树梅 张旭 徐大伟 申之义 李泽君 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第3期8-12,共5页
本研究用纯化的H9N2亚型禽流感病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,成功获得3株能稳定传代并分泌抗H9亚型禽流感病毒基质蛋白M1单克隆抗体的杂交瘤细胞:3G8、2F6、5F... 本研究用纯化的H9N2亚型禽流感病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,成功获得3株能稳定传代并分泌抗H9亚型禽流感病毒基质蛋白M1单克隆抗体的杂交瘤细胞:3G8、2F6、5F2。间接ELISA方法检测,3株单克隆抗体的腹水间接ELISA效价达106以上。构建了真核表达载体pCAGGS-M1并转染于MDCK细胞,以用于腹水的Western blot和间接免疫荧光鉴定。间接免疫荧光结果表明,3株单克隆抗体皆与真核表达蛋白M1反应。这些单克隆抗体的制备为后期研究M1蛋白在流感病毒复制与出芽过程中的重要生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 基质蛋白M1 单克隆抗体 间接免疫荧光 蛋白免疫印迹法
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抗H9N2 AIV HA单克隆抗体的制备及其在胶体金层析检测中的初步应用 被引量:3
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作者 詹爱军 王新卫 +2 位作者 陈枝楠 卢体康 花群义 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第9期123-126,共4页
用基因疫苗pcDNA-H9和纯化H9N2亚型AIV免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6),H9-02(3B1),H9-03(3H11),H9-04(1A4),H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结果为H9-01,H9-02和H9-05均... 用基因疫苗pcDNA-H9和纯化H9N2亚型AIV免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6),H9-02(3B1),H9-03(3H11),H9-04(1A4),H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结果为H9-01,H9-02和H9-05均为IgG2b,H9-03为IgG1,H9-04为IgG2a,轻链的亚型均为kappa链。经特异性和与同型病毒的反应谱检测,它们均是HA特异性单克隆抗体。用制备的抗H9亚型AIV HA的单克隆抗体做成胶体金层析检测试纸条,可以检测到200个EID50的H9亚型AIV,为监测该亚型AIV试剂盒的进一步商品化奠定了基础。 展开更多
关键词 H9N2亚型AIV 单克隆抗体 胶体金层析检测
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抗人CA19-9单克隆抗体的制备和鉴定及化学发光检测体系的建立 被引量:3
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作者 蓝兴国 曹领改 +2 位作者 魏德强 赵洪梅 李玉花 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1282-1286,共5页
目的制备抗人糖抗原19-9(CA19-9)单克隆抗体(mAb),建立双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。方法 CA19-9免疫小鼠后,通过细胞融合技术,获得抗CA19-9的mAb。鉴定其抗体的纯度、效价、特异性和配对,建立双抗体夹心化学发光体系。在包... 目的制备抗人糖抗原19-9(CA19-9)单克隆抗体(mAb),建立双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。方法 CA19-9免疫小鼠后,通过细胞融合技术,获得抗CA19-9的mAb。鉴定其抗体的纯度、效价、特异性和配对,建立双抗体夹心化学发光体系。在包被缓冲液、包被浓度及加样模式上优化化学发光体系,对该体系进行准确度、最低检测限、线性、重复性评估以及血清样本的检测。结果获得4株名称为#1-1、#2-1、#3-1和#4-1的mAb。抗体效价均大于10^-8,与CA125、CA15-3、CA72-4均无交叉反应。其中#3-1 mAb与#2-1-HRP建立的双抗体夹心体系经优化后,其检测范围为0~1 000 U/mL;最低检测限为2.0 U/mL;线性相关系数为0.9999。与罗氏试剂检测结果对比,Kappa系数大于0.75;相关系数大于0.9。结论成功制备了抗人CA19-9 mAb,建立了双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。 展开更多
关键词 CA19-9 单克隆抗体 酶联免疫吸附分析 化学发光免疫分析
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禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:2
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作者 贾强 张立怀 +4 位作者 秦卓明 赵继勋 苏敬良 王建新 张国中 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第9期3-5,共3页
以常规方法纯化H 9亚型禽流感病毒,制备了两株分泌抗禽流感病毒H 9亚型血凝素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞11A 5和11B 2,其上清EL ISA效价均为1∶104,腹水效价为1∶107和1∶106,H I效价上清分别为8、7 log2,腹水效价均为15log2。采用H ... 以常规方法纯化H 9亚型禽流感病毒,制备了两株分泌抗禽流感病毒H 9亚型血凝素特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞11A 5和11B 2,其上清EL ISA效价均为1∶104,腹水效价为1∶107和1∶106,H I效价上清分别为8、7 log2,腹水效价均为15log2。采用H I方法证明其对禽流感病毒H 9亚型的特异性,通过W estern b lot方法证明两株单抗都针对H 9亚型禽流感病毒HA 1蛋白。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9 单克隆抗体
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H_9亚型禽流感病毒分型单克隆抗体的研制及初步应用 被引量:1
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作者 王海燕 刘文博 +7 位作者 胡顺林 孔晶 吴艳涛 文其乙 张评浒 高崧 张如宽 刘秀梵 《中国家禽》 北大核心 2004年第10期21-22,27,共3页
禽流感分型单克隆抗体在禽流感的检疫、监测、预警预报工作中发挥重要作用。作者以 H_9 N_2 亚型禽流感病毒 F株为免疫原获得了特异性优、 血凝抑制效价高的单克隆抗体,为 H_9 亚型禽流感病毒的分型提供了良好的诊断试剂。
关键词 H9亚型禽流感病毒 单克隆抗体 宿主谱 传染源 诊断
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抗GPⅡb/Ⅲa和抗CD9单克隆抗体对人血小板Ca对流的影响 被引量:1
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作者 王美健 李家增 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第5期339-342,共4页
采用Ca^(2+)敏感光蛋白Aequorin法测定结合位点在GPⅡb/Ⅲa的单克隆抗体(Mc-Ab)Apt_4及在CD9抗原的McAb XW-1和SJ-9A_4对人血小板胞浆Ca^(2+)的影响,发现Ap-t_4和XW-1可引起载有Aequorin的血小板Ca^(2+)内流,SJ-9A_4可引起载有Aequorin... 采用Ca^(2+)敏感光蛋白Aequorin法测定结合位点在GPⅡb/Ⅲa的单克隆抗体(Mc-Ab)Apt_4及在CD9抗原的McAb XW-1和SJ-9A_4对人血小板胞浆Ca^(2+)的影响,发现Ap-t_4和XW-1可引起载有Aequorin的血小板Ca^(2+)内流,SJ-9A_4可引起载有Aequorin的血小板Ca^(2+)内流和释放。钙通道阻滞剂异搏定可完全抑制Apt_4引起的血小板Ca^(2+)内流和聚集,部分抑制XW-1和SJ-9A_4引起的血小板胞浆Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]i)升高和聚集。ADP抑制剂CP/CPK和钙调蛋宜抑制剂EBB部分抑制3种McAb的作用,环氧酶抑制剂ASA只有轻度抑制作用。实验结果提示3种McAb引起的血小板[Ca^(2+)]i升高和活化的途径不同。 展开更多
关键词 CD9 AEQUORIN 钙离子 单克隆抗体
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抗禽流感H_9亚型血凝素单克隆抗体的病毒中和作用 被引量:1
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作者 贾强 秦卓明 +3 位作者 李莉 赵继勋 张国中 苏敬良 《家禽科学》 2005年第4期12-14,共3页
通过血凝抑制(H I)和鸡胚中和试验(V N)证实,本实验室制备的抗禽流感H9N2单抗11A5和11B2株可特异性地抑制H9亚型禽流感病毒的血凝特性,而与禽流感H5和H7亚型以及其他具有血凝性感染禽类的病毒(如新城疫等)不反应。两株单抗腹水H I效价... 通过血凝抑制(H I)和鸡胚中和试验(V N)证实,本实验室制备的抗禽流感H9N2单抗11A5和11B2株可特异性地抑制H9亚型禽流感病毒的血凝特性,而与禽流感H5和H7亚型以及其他具有血凝性感染禽类的病毒(如新城疫等)不反应。两株单抗腹水H I效价均达到15Log2。中和试验表明:上述两株单抗均可有效抑制H9N2病毒在SPF鸡胚中的增殖,使病毒失去血凝活性,测得11A5和11B2株腹水对H9N2禽流感病毒的半数保护量分别为10-3.35和10-4.58。该单抗的研制成功对于进一步建立快速鉴别诊断禽流感H9亚型病毒具有重要意义。 展开更多
关键词 禽流感 H9亚型病毒 血凝素单克隆抗体 病毒中和作用 鸡胚半数感染量 特异性
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小鼠抗人S100A9单克隆抗体可变区基因克隆及其序列分析
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作者 闫敏 米丹阳 +3 位作者 孙向东 张振强 曾华辉 刘文第 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期252-255,共4页
目的克隆小鼠抗人S100A9单克隆抗体(mAb)可变区基因并对其序列进行分析。方法从分泌小鼠抗人S100A9mAb的杂交瘤细胞株(ⅡD4B10)中提取RNA,采用逆转录PCR扩增出轻链可变区基因VL和重链可变区基因VH,并对VL和VH进行克隆测序与BLAST同源性... 目的克隆小鼠抗人S100A9单克隆抗体(mAb)可变区基因并对其序列进行分析。方法从分泌小鼠抗人S100A9mAb的杂交瘤细胞株(ⅡD4B10)中提取RNA,采用逆转录PCR扩增出轻链可变区基因VL和重链可变区基因VH,并对VL和VH进行克隆测序与BLAST同源性比较分析。结果小鼠抗人S100A9 mAb VL基因编码区291 bp,编码97个氨基酸,属于IGKV14-111*01家族;VH基因编码区324 bp,编码108个氨基酸,属于IGHV1-80*01家族。所获取的VH和VL序列有明显抗体可变区特征,具有骨架区和互补决定区。结论获得鼠抗人S100A9 mAb的重链和轻链可变区基因,为构建基因工程抗体奠定基础。 展开更多
关键词 S100A9 单克隆抗体 可变区基因 克隆
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抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及其生物学特性
16
作者 李银 刘宇卓 +2 位作者 张敬峰 沈永林 朱源励 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2006年第2期127-130,共4页
以灭活的H9亚型禽流感NJ01病毒株作为抗原,按常规方法免疫BALB/c鼠,最后一次免疫后第3d取脾细胞与SP2/0细胞进行融合,采用HI进行筛选,检出18个阳性孔,阳性率为4.69%。对其中的3个阳性值较高的孔进行3次克隆,最终获得3株单克... 以灭活的H9亚型禽流感NJ01病毒株作为抗原,按常规方法免疫BALB/c鼠,最后一次免疫后第3d取脾细胞与SP2/0细胞进行融合,采用HI进行筛选,检出18个阳性孔,阳性率为4.69%。对其中的3个阳性值较高的孔进行3次克隆,最终获得3株单克隆细胞,分别命名为1E1、2E10和3G2。通过与新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒、H5亚型禽流感病毒进行HI试验,证明1E1、2E10和3G2分泌的抗体具有特异性。经连续1个月的体外培养和两次冻存复苏仍能稳定地分泌抗H9亚型禽流感Hl抗体,3株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均为IgG1,杂交瘤细胞的染色体数目为92—108条,平均97条。杂交瘤细胞培养上清和腹水对H9亚型禽流感病毒的Hl值分别为2^5~2^8和2^12~2^14.PD50分别10^-2~10^-1.67和10^-4~10^-3.33单克隆抗体的制备为禽流感的快速诊断、预警预报和病毒的抗原性分析等奠定了基础。 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 单克隆抗体 HI 生物学特性
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卵巢癌OC_(4D9)单克隆抗体的鉴定及初步应用
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作者 宫桂兰 刘玉萍 任政华 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期42-44,共3页
目的:提高卵巢癌的诊断,监测治疗指标。方法:采用自制卵巢癌相关抗原CA925经细胞融合方法,制备抗卵巢上皮癌单克隆抗体OC4D9,该抗体呈IgG1型,抗体效价ELISA104,抗体特异性较好。结果:分析一组卵巢上皮癌... 目的:提高卵巢癌的诊断,监测治疗指标。方法:采用自制卵巢癌相关抗原CA925经细胞融合方法,制备抗卵巢上皮癌单克隆抗体OC4D9,该抗体呈IgG1型,抗体效价ELISA104,抗体特异性较好。结果:分析一组卵巢上皮癌、子宫内膜癌、子宫肌瘤、正常人血清中CA925含量。卵巢癌血清中含量最高,其它次之,P<0.01。相关分析,卵巢上皮癌与子宫肌瘤血清中CA925含量不呈相关性,r=0.162,卵巢上皮癌与正常人血清中CA925呈负相关,r=-0.055。结论:McAbOC4D9对卵巢上皮癌相关抗原具有一定特异性。 展开更多
关键词 卵巢上皮癌 单克隆抗体 OC4D9 卵巢肿瘤
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抗H9亚型AIV血凝素单克隆抗体的制备及亚型鉴定
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作者 詹爱军 王新卫 王宪文 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第3期1071-1072,1085,共3页
用基因疫苗pcDNA-H9、纯化H9N2亚型AIV和重组噬菌体T4-H9HA免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6)、H9-02(3B1)、H9-03(3H11)、H9-04(1A4)、H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结... 用基因疫苗pcDNA-H9、纯化H9N2亚型AIV和重组噬菌体T4-H9HA免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6)、H9-02(3B1)、H9-03(3H11)、H9-04(1A4)、H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结果为H9-01、H9-02和H9-05均为IgG2b,H9-03为IgG1,H9-04为IgG2a,轻链的亚型均为kappa链。经特异性和与同型病毒的反应谱检测,它们均是HA特异性单克隆抗体。为进一步分析H9N2亚型AIV的结构与功能以及建立监测该亚型AIV的试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 H9N2亚型AIV 单克隆抗体 亚型 鉴定
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抗H9亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及初步鉴定 被引量:1
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作者 王凤强 姜北宇 +3 位作者 刘明泽 赵玉军 米丰全 刘剑 《中国动物保健》 2005年第8期27-29,共3页
利用纯化的H9N2亚型禽流感尿囊液病毒免疫原免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用间接ELISA方法检测培养上清是否对H5N1亚型AIV及NDV反应,筛选只针对H9N2亚型AIV的阳性细胞株,经克隆获得1株较高... 利用纯化的H9N2亚型禽流感尿囊液病毒免疫原免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用间接ELISA方法检测培养上清是否对H5N1亚型AIV及NDV反应,筛选只针对H9N2亚型AIV的阳性细胞株,经克隆获得1株较高亲和力的杂交瘤细胞株,命名为4E7,用其制备的腹水ELISA效价达到2×105,Western-blotting证明单抗4E7经鉴定为针对75KD血凝素的单抗,HI效价为1:27,且不与新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、传染性脑脊髓炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒、H5N1亚型禽流感病毒发生交叉反应,具有较好的特异性。IgG亚型为IgG1。 展开更多
关键词 禽流感病毒 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验 H9亚型禽流感病毒 初步鉴定 鸡传染性法氏囊病病毒 Balb/c小鼠 间接ELISA方法 制备 鸡传染性支气管炎病毒
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抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及初步鉴定 被引量:8
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作者 曾艳兵 焦新安 +5 位作者 潘志明 黄金林 张评汻 张苏华 孙泉云 刘秀梵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期702-704,共3页
目的 :制备抗禽流感病毒 (AIV)H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以AIVH9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原 ,免疫 8wk龄BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹... 目的 :制备抗禽流感病毒 (AIV)H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以AIVH9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原 ,免疫 8wk龄BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价 ;采用ELISA、HI、免疫荧光染色 (IF)及Westernblot鉴定mAb的特异性。结果 :获得 3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株 2A3、2H1和 1C8,其腹水mAb的ELISA效价依次为 1× 10 7、1× 10 5和 5× 10 6,血凝抑制效价为 1× 2 8~ 1× 2 13 ;3株mAb的Ig亚类均为IgG1。以mAb 2H1进行Westernblot的结果显示 ,该mAb能与AIV的Mr 为 75 0 0 0的蛋白条带起反应 ,表明其是针对AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb。与 32株AIVH9亚型国内分离株进行血凝抑制试验表明 ,mAb 2H1具有良好的广谱性。结论 :成功地制备了抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ,为AIV的抗原性分析、血清学诊断。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9亚型 血凝素 单克隆抗体
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