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用PCR-限制性片段长度多态性分析法检测游泳池肉芽肿中海分枝杆菌 被引量：7
1
作者 蔡林 陈雪 +2 位作者 赵亭 丁北川 张建中 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期71-73,共3页
目的:探讨用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)分析法快速检测游泳池肉芽肿组织中海分枝杆菌。方法:对疑诊为游泳池肉芽肿患者5份皮损组织DNA进行PCR扩增,扩增产物分别用BstEⅡ和HaeⅢ两种限制性内切酶进行酶切,再用琼脂糖凝胶电泳进行RFL... 目的:探讨用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)分析法快速检测游泳池肉芽肿组织中海分枝杆菌。方法:对疑诊为游泳池肉芽肿患者5份皮损组织DNA进行PCR扩增,扩增产物分别用BstEⅡ和HaeⅢ两种限制性内切酶进行酶切,再用琼脂糖凝胶电泳进行RFLP分析,并与培养结果进行比较。结果:5份标本中均检测出海分枝杆菌,与培养结果一致。经过3～7个月治疗,4例患者治愈,1例患者好转。结论:用PCR-RFLP可以快速鉴定海分枝杆菌,有利于该类疾病的早期诊断和及时治疗。 展开更多
关键词 海分枝杆菌 感染 皮肤 pcr-限制性片段长度多态性分析
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利用12S rRNA基因的限制性酶切末端片段长度多态性鉴定动物种类 被引量：9
2
作者 汪琦 张昕 +3 位作者 赵大贺 马海萍 陈广全 张惠媛 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期214-219,共6页
目的:建立一种精确可靠的鉴定常见的10种动物(猪、狗、牛、山羊、绵羊、马、鸡、鼠、三文鱼和鹿)的方法。方法:利用12SrRNA基因的限制性酶切末端片段长度多态性(terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)鉴别动物种... 目的:建立一种精确可靠的鉴定常见的10种动物(猪、狗、牛、山羊、绵羊、马、鸡、鼠、三文鱼和鹿)的方法。方法:利用12SrRNA基因的限制性酶切末端片段长度多态性(terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)鉴别动物种类。将线粒体12S rRNA基因通过引物的5'端用FAM荧光标记,从基因组DNA中扩增450bp的目的片段。引物对1(下游引物FAM标记,上游引物不标记)扩增的PCR产物用限制性内切酶AluⅠ酶切。引物对2(上游引物FAM标记,下游引物不标记)扩增的PCR产物用限制性内切酶Tru9Ⅰ酶切。得到的酶切产物分别在遗传分析仪ABI3100上进行毛细管电泳,片段大小用Peak Scanner 1.0软件分析。结果:根据AluⅠ酶切图谱能够区分鸡、马、猪和三文鱼,而鹿和牛、山羊和绵羊、鼠和狗因酶切图谱相同无法分开。根据Tru9Ⅰ酶切图谱,能够进一步将鹿和牛、山羊和绵羊、鼠和狗分开。同一种动物不同个体的酶切图谱完全相同,结果具有可重复性。没有出现物种内多态的现象。大多数情况下,实际得到的末端片段长度与理论值非常接近,只存在2～5bp的差异。结论:该方法操作简单、结果精确,适用于鉴定动物种类。 展开更多
关键词 限制性酶切末端片段长度多态性T—RFLP 种类鉴定 12S RRNA
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沙门菌grOEL基因序列在系统发育分析和PCR-限制性片段多态性分析鉴定中的应用
3
作者 胡玉山 刘俊华 +2 位作者 庞杏林 陈守义 陈晓光 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期2037-2039,2043,共4页
目的探讨grOEL基因序列在沙门菌进化分析和分型鉴定中的应用。方法对8种血清群的沙门菌菌株进行PCR扩增、测序,然后用分子生物学软件Bioedit与DNAstar进行序列分析,同时用PCR-限制性片段多态性分析(RFLP)技术进行分型鉴定。结果8种沙门... 目的探讨grOEL基因序列在沙门菌进化分析和分型鉴定中的应用。方法对8种血清群的沙门菌菌株进行PCR扩增、测序,然后用分子生物学软件Bioedit与DNAstar进行序列分析,同时用PCR-限制性片段多态性分析(RFLP)技术进行分型鉴定。结果8种沙门菌血清群grOEL基因保守序列与变异序列呈锯齿状排列,其grOEL氨基酸系统发育树与grOEL基因系统发育树结果不完全相同,但O8、O9、O10之间亲缘关系最近,PCR-RFLP分析有5种模式图。结论grOEL基因序列在沙门菌系统发育中可作为遗传标记,同时也可作为分型鉴定的靶序列。 展开更多
关键词 GROEL 系统发育 pcr-限制性片段多态性分析
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广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒的限制性片段长度多态性分析
4
作者 周丽萍 罗满林 +1 位作者 刘镇明 贺东生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第11期13-15,共3页
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 限制性片段长度多态性分析 广东省 RNA病毒 结构蛋白 ORF5 开放阅读框 核衣壳蛋白
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用M13噬菌体作探针进行人的DNA限制性片段长度多态性分析 被引量：2
5
作者 张小为 蓝翎 +2 位作者 段秉章 霍振义 黄英 《法医学杂志》 CAS CSCD 1991年第4期169-172,F002,共5页
用M13噬菌体作为探针,可以检测人和动物基因组DNA中高度可变的小卫星区域,其有效顺序是该噬菌体基因Ⅲ中的两组15bp的串联重复。本文介绍的是采用随机引物与PCR过程相结合的方法标记M13噬菌体,得到高比活性的探针,与经HinfⅠ消化的人DN... 用M13噬菌体作为探针,可以检测人和动物基因组DNA中高度可变的小卫星区域,其有效顺序是该噬菌体基因Ⅲ中的两组15bp的串联重复。本文介绍的是采用随机引物与PCR过程相结合的方法标记M13噬菌体,得到高比活性的探针,与经HinfⅠ消化的人DNA杂交,产生具有高度多态性的DNA图谱,并与33.15探针杂交的DNA图谱进行了比较,证明M13噬菌体是进行DNA多态性分析的一种非常有用的探针。 展开更多
关键词 M13噬菌体 限制性片段长度多态性分析 DNA图谱 行人 基因组DNA PCR过程 DNA杂交 小卫星区 随机引物 探针杂交 比活性 高度
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DNA多态性分析技术及其在蚕业上的应用 被引量：1
6
作者 周泽扬 鲁成 +1 位作者 夏庆友 向仲怀 《蚕学通讯》 1996年第4期16-20,共5页
现代分子生物学的迅猛发展,使整个生命科学研究发生了深刻的革命.由之而孕育出的以基因组DNA多态性分析为核心的分子标记(molecular marker)技术,使人们对于生物遗传差异的认识,由表型(产物)特征深入到了分子水平,产生了由现象到本质的... 现代分子生物学的迅猛发展,使整个生命科学研究发生了深刻的革命.由之而孕育出的以基因组DNA多态性分析为核心的分子标记(molecular marker)技术,使人们对于生物遗传差异的认识,由表型(产物)特征深入到了分子水平,产生了由现象到本质的飞跃.DNA多态性是指基因组DNA在漫长的生命繁演历程中所发生的自然突变(DNA片断的插入、缺失、重排或碱基置换)状况的差异性.这种差异反映了基因组的本质特征。 展开更多
关键词 DNA多态性 分析技术 基因组DNA 分子标记 多态性分析 限制性片段长度多态性(RFLP) 模板DNA 蚕业 限制性内切酶 遗传标记
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中国汉族人群N-乙酰基转移酶1基因多态性的检测分析
7
作者 徐张巍 梅俏 +2 位作者 许建明 胡乃中 胡咏梅 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第2期153-156,共4页
目的　探讨N 乙酰基转移酶1(NAT1)基因型检测方法及其基因多态性的分布。方法　在140名汉族健康人的外周血中,应用聚合酶链反应(PCR)限制性片段长度多态性分析(RFLP)及多重PCR技术,进行NAT1等位基因分型研究。结果　应用PCR- RFLP+多重... 目的　探讨N 乙酰基转移酶1(NAT1)基因型检测方法及其基因多态性的分布。方法　在140名汉族健康人的外周血中,应用聚合酶链反应(PCR)限制性片段长度多态性分析(RFLP)及多重PCR技术,进行NAT1等位基因分型研究。结果　应用PCR- RFLP+多重PCR方法避免了多种限制性内切酶之间相互干扰,可准确区分NAT1基因型。在140名检测标本中,NAT1* 3,NAT1* 4,NAT1* 10和NAT1* 11的发生频率分别是8 .2%、49. 6%、40%和2 2%。NAT1* 4发生率明显低于欧美人群,但高于东南亚人群;而NAT1* 10的发生率高于欧美人群,NAT1* 3和NAT1* 11的发生率较低,与大多数亚洲人群基本一致。结论　PCR RFLP+多重PCR方法检测NAT1基因型特异性高;NAT1基因型分布与其他国家检测情况有所差异。 展开更多
关键词 N-乙酰基转移酶 基因多态性 中国汉族人群 检测分析 限制性片段长度多态性分析 聚合酶链反应(PCR) 多重PCR技术 NAT1 PCR方法 限制性内切酶 基因型分布 发生率 检测方法 分型研究 等位基因 相互干扰 检测标本 发生频率
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GRB7基因在5个猪群体内的多态性分析
8
作者 吴华莉 张莺莺 +5 位作者 黄济 王洪洋 曹建国 涂尾龙 范春 谈永松 《上海农业学报》 2023年第2期71-75,共5页
采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析GRB7基因在杜洛克猪、长白猪、大白猪、梅山猪和申农猪群体内的多态性。结果表明:猪GRB7基因片段长度为626 bp,检测发现该片段的163 bp和243 bp处存在突变位点。163位点突变在杜... 采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析GRB7基因在杜洛克猪、长白猪、大白猪、梅山猪和申农猪群体内的多态性。结果表明:猪GRB7基因片段长度为626 bp,检测发现该片段的163 bp和243 bp处存在突变位点。163位点突变在杜洛克猪群体内CC基因型较多,在长白猪、大白猪和申农猪群体内CT基因型较多,在梅山猪群体内TT基因型较多。243位点突变在杜洛克猪、长白猪和大白猪群体内CT基因型较多,在申农猪和梅山猪群体内TT基因型较多。GRB7基因TTTT合并基因型在申农猪和梅山猪群体内为优势基因型,在杜洛克猪和长白猪群体内CCTC合并基因型频率较高,在大白猪群体内CTCT合并基因型频率较高。 展开更多
关键词 生长因子受体结合蛋白7 限制性片段长度多态性 多态性分析
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沙冬青根瘤菌固氮酶基因nifH PCR-RFLP分析 被引量：2
9
作者 毕江涛 贺达汉 +2 位作者 谢瑞梅 位秀丽 韦革宏 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期315-321,共7页
利用固氮基因nifH PCR扩增，nifH PCR-RFLP及扩增产物序列分析方法对分离自宁夏和内蒙古部分地区的沙冬青根瘤菌代表菌株的nifH进行了遗传多样性和系统发育分析。结果表明，在80％相似水平上42株根瘤菌nifH PCR-RFLP基因图谱中有5个基... 利用固氮基因nifH PCR扩增，nifH PCR-RFLP及扩增产物序列分析方法对分离自宁夏和内蒙古部分地区的沙冬青根瘤菌代表菌株的nifH进行了遗传多样性和系统发育分析。结果表明，在80％相似水平上42株根瘤菌nifH PCR-RFLP基因图谱中有5个基因型聚类群。对不同基因型代表菌株的nifH PCR产物进行序列测定和系统发育关系分析，测试菌株在系统发育地位上与中慢生根瘤菌和中华根瘤菌相近，测试菌株与温带中慢生根瘤菌（Mesorhizobium temperatum isolate HAMBI 2583）序列相似性范围为95．6％-96．9％，与草木樨中华根瘤菌（Sinorhizobium meliloti strain CCBAU10062）基因序列相似性范围为99．8％-100％，基因序列同源性较高。本研究中nifH基因所揭示的沙冬青根瘤菌遗传多样性和系统发育关系说明沙冬青根瘤菌受染色体基因背景、地理环境以及菌株个体的进化而存在一定的差异。 展开更多
关键词 沙冬青 根瘤菌 固氮酶基因 限制性片段长度多态性分析 遗传多样性 序列分析 系统发育关系
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PCR-RFLP技术及其在隐孢子虫基因分析上的应用 被引量：2
10
作者 周荣琼 李国清 +1 位作者 黄汉成 肖淑敏 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1114-1116,共3页
关键词 pcr-RFLP技术 基因分析 隐孢子虫 限制性片段长度多态性 DNA多态性 人类遗传疾病 DNA遗传标记 聚合酶链式反应 生命科学 CHAIN
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维吾尔族和汉族人群RANTES基因多态性特征及其对HIV-1感染的意义 被引量：2
11
作者 刘雪林 王福生 +2 位作者 金磊 徐德忠 洪卫国 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期489-491,共3页
目的　分析RANTES启动子区等位基因在中国维吾尔族和汉族健康人和HIV 1感染者中的分布特点 ,以期阐明RANTES基因突变型和人类免疫缺陷病毒(HIV 1 )感染在不同民族人群的关系。方法　利用PCR RFLP法对维吾尔族和汉族HIV 1感染者和健康人... 目的　分析RANTES启动子区等位基因在中国维吾尔族和汉族健康人和HIV 1感染者中的分布特点 ,以期阐明RANTES基因突变型和人类免疫缺陷病毒(HIV 1 )感染在不同民族人群的关系。方法　利用PCR RFLP法对维吾尔族和汉族HIV 1感染者和健康人群的 86 5份样品的RANTES 4 0 3、 2 8等位基因进行检测。结果　两个位点在维吾尔族和汉族人群均有较高的等位基因频率 ,分布基本一致 ;RANTES等位基因具有 6个基因表型 ,分别为AC/AC、AC/AG、AC/GC、AG/GC、GC/GC和AG/AG ;从单倍型看 ,汉族和维吾尔族均以GC为最高 ,占 6 2 7% ,AC分别为 2 8 7%和 30 4 % ,AG分别为 8 6 %和 6 8%。但是从单个位点看 ,HIV感染者和健康人、吸毒者差异均无统计学意义(P >0 0 5 ) ;从基因表型分析 ,与AC/AC比较 ,AC/AG、AC/GC、AG/GC、GC/GC的OR值显示都有不同程度的关联(OR =0 33～0 81 )。结论　汉族和维吾尔族中RANTES启动子区 4 0 3/ 2 8均有较高的突变频率 ;与AC/AC比较 ,AC/AG、AC/GC、AG/GC。 展开更多
关键词 RANTES 单核苷酸多态(SNP) 人类免疫缺陷病毒 聚合酶链反应/限制性内切酶片段长度多态性分析
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组织激肽释放酶基因多态性A1789G对高血压患者血浆肌酐水平的影响(英文) 被引量：1
12
作者 洪宗元 张秀清 +2 位作者 黄帼 凌代俊 徐希平 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2005年第6期637-641,共5页
目的:探讨组织激肽释放酶基因多态性对高血压患者血浆肌酐水平的影响。方法:用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法对733例高血压患者的组织激肽释放酶基因A1789G多态位点进行基因分型,用线性回归模型分析基因型与血浆肌... 目的:探讨组织激肽释放酶基因多态性对高血压患者血浆肌酐水平的影响。方法:用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法对733例高血压患者的组织激肽释放酶基因A1789G多态位点进行基因分型,用线性回归模型分析基因型与血浆肌酐水平之间的关系,用方差分析分析基因型和血压对血浆肌酐水平的交互影响。结果:携带突变型等位基因1789G(基因型AG或GG)高血压患者较携带野生型等位基因A1789(基因型AA)患者的血浆肌酐水平明显升高,且血浆肌酐水平随着血压的升高而升高。结论:组织激肽释放酶基因多态性对高血压患者的血浆肌酐水平产生明显影响,A1789G多态位点是高血压患者血浆肌酐清除率下降的一个危险因素。 展开更多
关键词 组织激肽释放酶 基因多态性 血浆肌酐 高血压 pcr-限制性片段长度多态性
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猪ALAS1基因内含子9多态性检测及其对繁殖性能指标的遗传效应 被引量：1
13
作者 吴华莉 曹建国 +4 位作者 张莺莺 王洪洋 涂尾龙 黄济 谈永松 《上海农业学报》 2021年第6期123-127,共5页
为考察猪ALAS1基因内含子9多态性及其对繁殖性能指标的遗传效应,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法,分析ALAS1基因内含子9在杜洛克猪、长白猪、大白猪和梅山猪群体内的多态性,并分析该突变位点与长白猪、大白猪繁殖... 为考察猪ALAS1基因内含子9多态性及其对繁殖性能指标的遗传效应,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法,分析ALAS1基因内含子9在杜洛克猪、长白猪、大白猪和梅山猪群体内的多态性,并分析该突变位点与长白猪、大白猪繁殖性状的相关性。结果显示:ALAS1基因内含子9在长白猪群体内的基因型频率为CC(0.01)、CT(0.32)和TT(0.67);在大白猪群体内的基因型频率为CC(0.23)、CT(0.40)和TT(0.38);在梅山猪群体内的基因型频率为CC(0.62)、CT(0.26)和TT(0.11);在杜洛克猪群体内只检测出TT基因型,TT基因型频率为1.00。ALAS1基因在长白猪群体内CT型的总产仔数(TNB)、产活仔数(NBA)比TT型的TNB和NBA分别高0.23头(P>0.05)和0.29头(P>0.05)。ALAS1基因在大白猪群体内的TNB和NBA均表现出CC>CT>TT的趋势。在大白猪群体内CC型的TNB、NBA比CT型的TNB、NBA分别多0.28头(P>0.05)和0.24头(P>0.05);CC型和CT的TNB比TT型的TNB分别多1.63头和1.35头(P<0.01);CC型和CT的NBA比TT型的NBA分别多1.58头和1.34头(P<0.01)。ALAS1基因在大白猪群体中CC型为影响产仔数的优势基因型,CC型和CT型的TNB、NBA均高于TT型的TNB、NBA,差异达到极显著水平。 展开更多
关键词 5-氨基乙酰丙酸合成酶1 限制性片段长度多态性 繁殖性状 多态性分析
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维生素D受体基因BsmⅠ多态性与北方汉族成人慢性肾功能不全骨密度的关系
14
作者 王玉浔 安雅臣 +5 位作者 赵晓晶 刘国荣 高素玲 张江 王艳 史国辉 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期959-963,共5页
目的:探讨维生素D受体(VDR)基因BsmⅠ位点多态性与北方汉族成人慢性肾功能不全骨密度的关系,探讨影响骨密度的遗传易感因素。方法:选取211名河北联合大学附属医院连续收治的汉族成人(年龄≥18岁)慢性肾功能不全患者并根据血肌酐(Scr)水... 目的:探讨维生素D受体(VDR)基因BsmⅠ位点多态性与北方汉族成人慢性肾功能不全骨密度的关系,探讨影响骨密度的遗传易感因素。方法:选取211名河北联合大学附属医院连续收治的汉族成人(年龄≥18岁)慢性肾功能不全患者并根据血肌酐(Scr)水平分为肾功能不全组和肾功能衰竭组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)的方法检测VDR基因BsmⅠ多态性位点,对慢性肾功能不全相关的因素进行问卷调查,同时检测入院24 h内肝肾功能、血钾、钠、氯、钙、磷、甲状腺功能、血甲状旁腺激素水平,及腰椎L2～4、颈椎、Wards三角部位骨密度。用Pearson相关分析进行年龄及体质指数(BMI)与骨密度关系的研究,用协方差分析的方法比较年龄、BMI校正后各部位骨密度与VDR基因型之间的关系。结果:肾功能不全组和肾功能衰竭组VDR基因BsmⅠ多态性分布无统计学意义(χ2=0.088,P=0.591)。年龄、BMI与骨密度的Pearson相关分析发现,年龄与各部位的骨密度呈负相关(P<0.01),BMI与骨密度值呈正相关(P<0.01)。采用协方差分析对年龄与BMI进行校正后,对不同部位的骨密度值与VDR基因型相关性进行分析,发现VDR不同基因型间腰椎的骨密度值差异有统计学意义(P<0.05),aa基因型具有较低骨密度(P<0.05)。结论:VDR基因BsmⅠ位点多态性与慢性肾功能不全患者骨密度存在关联,可能是影响骨密度的遗传易感因素。 展开更多
关键词 慢性肾功能不全 VDR基因多态性 骨密度 聚合酶链反应—限制性片段长度多态性分析
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传染性喉气管炎病毒(ILTV)gI-gE基因的PCR-RFLP分析
15
作者 何召庆 王云峰 +3 位作者 张绍杰 孟松树 童光志 黄骏明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期52-54,共3页
根据 ＵＳＤＡ（美国农业部）标准攻毒株 ＩＬＴＶ ｇＩ－ｇＥ基因的序列，在 ＩＬＴＶ ｇＩ基因、ｇＥ基因及 ｇＩ－ｇＥ基因连接部的上下游分别设计了一对引物。以 ＳＤＳ－蛋白酶 Ｋ法提取的 ８株 ＩＬＴＶ ＤＮＡ为模板，分别用这 ... 根据 ＵＳＤＡ（美国农业部）标准攻毒株 ＩＬＴＶ ｇＩ－ｇＥ基因的序列，在 ＩＬＴＶ ｇＩ基因、ｇＥ基因及 ｇＩ－ｇＥ基因连接部的上下游分别设计了一对引物。以 ＳＤＳ－蛋白酶 Ｋ法提取的 ８株 ＩＬＴＶ ＤＮＡ为模板，分别用这 ３对引物进行 ＰＣＲ扩增，均获得了与预期片段大小一致的ＤＮＡ片段。然后，用４种限制性内切酶（Ａｖａ Ⅱ、ＨｉｎｆⅠ、ＤｄｅⅠ和ＨａｅⅢ）对所有ＰＣＲ产物进行ＲＦＬＰ分析。结果发现， ＨｉｎｆⅠ和 ＤｄｅｌⅠ可以分别将 ８株 ＩＬＴＶ ｇＥ基因的酶切图谱分为两类， ＨａｅⅢ可将 ８株 ＩＬＴＶ的ｇＩ－ｇＥ基因连接部的酶切图谱分为两类。这表明不同的ＩＬＴＶ毒株的ｇＥ基因变异较大，而ｇＩ基因则相对比较保守。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 gI-gE基因 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析
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X-连锁遗传病家系PCR-RFLP连锁分析策略
16
作者 张学 孙开来 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 1992年第S1期50-52,共3页
RFLP连锁分析作为间接方法是致病基因尚未分离成功或致病基因突变未知的遗传病DNA诊断的有效途径。尽管各种DNA分析技术相继引入遗传病基因诊断领域,RFLP连锁分析法却沿用至今。
关键词 聚合酶涟式反应-限制性片段长度多态性 连锁分析 X-连锁遗传病
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PRRSV广东及周边地区分离株ORF5基因PCR-RFLP分析 被引量：3
17
作者 宋延华 邓雨修 +2 位作者 苏润环 李春梅 徐贵娟 《动物医学进展》 CSCD 2008年第9期9-12,共4页
用RT-PCR方法对分离自广东及周边地区包括43株高致病性PRRSV(HP-PRRSV)在内的共56株PRRSV ORF5基因进行了扩增,应用MluⅠ、HincⅡ和SacⅡ3种限制性内切酶对PCR扩增片段进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果56株分离株中共获得8种... 用RT-PCR方法对分离自广东及周边地区包括43株高致病性PRRSV(HP-PRRSV)在内的共56株PRRSV ORF5基因进行了扩增,应用MluⅠ、HincⅡ和SacⅡ3种限制性内切酶对PCR扩增片段进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果56株分离株中共获得8种不同的RFLP模式,其中有6株分离株(10.7%)模式与美洲型PRRSV弱毒疫苗株一致,为2-5-2模式;其余50株分离株表现为7种不同的RFLP模式,均为野毒株。43株HP-PRRSV表现为除2-5-2模式外的其余7种模式;13株经典PRRSV也表现了4种模式。结果表明广东及周边地区的PRRSV发生了较大的变异。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 RT—PCR 限制性片段长度多态性分析
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PCR-TRFLP研究托盘包装冷却猪肉冷藏过程中的菌相变化 被引量：5
18
作者 江芸 高峰 +2 位作者 徐幸莲 叶可萍 周光宏 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期565-572,共8页
应用PCR-末端限制性片段长度多态性分析(PCR-TRFLP),结合16S rRNA基因克隆文库和序列分析,研究托盘包装冷却猪肉在4℃贮藏过程中的菌相变化.结果表明:在整个贮藏过程的肉样TRFLP图谱中共产生35种谱带,表明冷却肉中微生物组成十分复杂;... 应用PCR-末端限制性片段长度多态性分析(PCR-TRFLP),结合16S rRNA基因克隆文库和序列分析,研究托盘包装冷却猪肉在4℃贮藏过程中的菌相变化.结果表明:在整个贮藏过程的肉样TRFLP图谱中共产生35种谱带,表明冷却肉中微生物组成十分复杂;对应于假单胞菌(Pseudomonas)的谱带峰在贮藏过程中变化明显,其相对峰面积由0 d的5.7%至贮藏末期达到83.4%,表明贮藏末期主要优势腐败菌为假单胞菌. 展开更多
关键词 冷却猪肉 托盘包装 菌相组成 pcr-末端限制性片段长度多态性分析
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不同连作年限野生地黄根际土壤微生物群落多样性分析 被引量：62
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作者 吴林坤 黄伟民 +5 位作者 王娟英 吴红淼 陈军 秦贤金 张重义 林文雄 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期308-317,共10页
以野生地黄为试验材料,设置野生地黄头茬土壤、重茬土壤和原茬土壤处理,未种植任何作物为对照,于块根膨大中期采集土样,通过磷脂脂肪酸法(PLFA)和末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)技术,分析不同连作年限野生地黄的根际微生物生物量和... 以野生地黄为试验材料,设置野生地黄头茬土壤、重茬土壤和原茬土壤处理,未种植任何作物为对照,于块根膨大中期采集土样,通过磷脂脂肪酸法(PLFA)和末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)技术,分析不同连作年限野生地黄的根际微生物生物量和群落结构变化。PLFA分析结果表明,不同处理情况下地黄根际土壤微生物群落结构存在明显差异,与头茬地黄根际土壤相比,重茬地黄土壤微生物总量显著下降,并且细菌/真菌比例下降。T-RFLP分析结果表明,不同连作年限地黄根际土壤细菌群落结构存在一定差异,野生状态地黄土壤和头茬土壤菌群较为相似,变形菌门和厚壁菌门占据优势地位。野生状态地黄和头茬地黄根际富含Bacillus、Pseudomonas等有益生防菌,而重茬地黄根际土壤滋生大量病原菌如Clostridium sp.、Flexibacter polymorphus和Clostridium ghoni,有益菌群和纤维素降解菌群减少,q RT-PCR定量分析也显示,野生状态地黄和头茬地黄土壤中假单胞菌数量都显著高于重茬地黄土壤。总之,野生地黄存在连作障碍问题,导致野生地黄根际有益菌数量减少而病原菌大量滋生,从而降低了野生地黄抵御病害的能力,使重茬野生地黄生长发育差,产量大幅降低。 展开更多
关键词 地黄 磷脂脂肪酸 末端限制性片段长度多态性 微生物多样性 植物根际
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TRFLP在微生物群落结构与动态分析中的应用 被引量：23
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作者 任南琪 赵阳国 +1 位作者 高崇洋 王爱杰 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第4期552-556,共5页
介绍了末端限制性片段长度多态性技术(TRFLP)的基本原理和操作要点,综述了该技术在土壤、肠道、受污染环境以及污染物处理工艺微生物群落结构、动态分析中的应用.由于技术整合了自动测序仪的高分辨率和高通量特征,对分析复杂群落的结构... 介绍了末端限制性片段长度多态性技术(TRFLP)的基本原理和操作要点,综述了该技术在土壤、肠道、受污染环境以及污染物处理工艺微生物群落结构、动态分析中的应用.由于技术整合了自动测序仪的高分辨率和高通量特征,对分析复杂群落的结构较其它指纹技术更具有明显优势和广阔的应用前景.对于无法将特异条带进行测序分析及原位杂交的缺点,可通过与克隆文库序列进行比较,并采用软件将多酶切的末端限制性片段(TRFs)与现有数据库进行叠加比较的方式加以弥补. 展开更多
关键词 微生物群落 群落动态 末端限制性片段长度多态性 rDNA克隆文库 末端限制性片段图谱
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