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微量酶联夹心杂交法定量检测hIL-8 mRNA PCR扩增产物 被引量：1
1
作者 李招云 张黎明 +1 位作者 吴晓宇 王乐见 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期555-557,共3页
目的:建立一种灵敏度高、特异性强、定量、精确、操作简便的微孔板酶联夹心杂交技术,定量检测人IL-8 mR-NA。方法:针对人IL-8 mRNA逆转录聚合酶链反应产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针,其中一条为捕获探针,5′端用活性氨基修饰... 目的:建立一种灵敏度高、特异性强、定量、精确、操作简便的微孔板酶联夹心杂交技术,定量检测人IL-8 mR-NA。方法:针对人IL-8 mRNA逆转录聚合酶链反应产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针,其中一条为捕获探针,5′端用活性氨基修饰,与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合,“竖直”地包被在微孔板内;另一条检测探针的3′端标记生物素,和辣根过氧化物酶结合。提取人外周血单个核细胞总RNA,进行RT-PCR扩增IL-8 mRNA,双链DNA产物经热变性后加入已包被捕获探针的微孔板内进行杂交,加入检测探针与已杂交的产物结合,经亲和素-辣根过氧化物酶系统检测杂交信号。结果:该法灵敏度为检出16个循环的PCR产物、5×103个PBMCs中的IL-8 mRNA、检测PCR终产物的最高稀释倍数为1∶256阳性;特异性试验非目的扩增片段酶联杂交检测未检出阳性杂交信号;精密度试验CV为5.2%。结论:该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点,适合IL-8 mRNA PCR扩增产物的定量检测。 展开更多
关键词 酶联夹心杂交 白细胞介素 定量检测
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鸽疱疹病毒荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用
2
作者 安乐乐 杨宣叶 +4 位作者 周海云 宋晓琛 李彦彤 罗迅 赵永清 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第2期166-171,共6页
为建立可快速、灵敏且特异性检测鸽疱疹病毒(Pi HV)的SYBR Green I荧光定量PCR方法(qPCR),本实验根据GenBank中登录的PiHV DNA聚合酶基因(KJ995972.1)保守区域设计引物,经PCR扩增该基因后连接至pMD19-T载体,构建质粒标准品pMD19-T-PiHV... 为建立可快速、灵敏且特异性检测鸽疱疹病毒(Pi HV)的SYBR Green I荧光定量PCR方法(qPCR),本实验根据GenBank中登录的PiHV DNA聚合酶基因(KJ995972.1)保守区域设计引物,经PCR扩增该基因后连接至pMD19-T载体,构建质粒标准品pMD19-T-PiHV。采用方阵试验对引物终浓度和退火温度优化后,建立检测PiHV的qPCR方法,并用10倍倍比稀释的质粒标准品进行qPCR扩增建立标准曲线。利用建立的该检测方法对鸽圆环病毒(PiCV)、鸽痘病毒(PPV)、鸽腺病毒(PiADV)、鸽轮状病毒(PiRV)、鸽细环病毒(PTTV)核酸和重组质粒pMD19-T-PiHV进行检测,评估该qPCR方法的特异性;利用建立的qPCR和常规PCR分别检测10~0拷贝/μL~10^(8)拷贝/μL的质粒标准品,比较二者的敏感性;以5个浓度质粒标准品作为模板进行组内和组间重复性试验,评估该qPCR方法的重复性;使用该qPCR方法和常规PCR方法对112份疑似Pi HV感染鸽临床组织样品同时检测。标准曲线结果显示,重组质粒标准品在9.47×10^(3)拷贝/μL~9.47×10^(9)拷贝/μL内与其各自的Ct值呈良好的线性关系,相关系数R^(2)=0.9988,扩增效率E=97.7%;特异性试验结果显示,该qPCR方法仅重组质粒pMD19-T-PiHV出现S型扩增曲线,与其他病原核酸均未出现交叉反应,特异性强;敏感性试验结果显示,该qPCR方法对质粒标准品的检测限为9.47拷贝/μL,敏感性是常规PCR方法的100倍;重复性试验结果显示,该qPCR方法组内和组间重复性试验的变异系数均小于1%,重复性好。临床样品检测结果显示,qPCR方法阳性检出率45.54%(51/112),高于常规PCR方法的阳性检出率35.71%(40/112),二者阳性符合率为100%,总符合率为90.18%。本实验在国内首次建立的PiHV qPCR检测方法特异性强、敏感性高和重复性好,可快速高效检测临床样品中的PiHV,为鸽疱疹病毒的临床检测及流行病学调查提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 鸽疱疹病毒 DNA聚合酶基因 荧光定量pcr 临床检测 流行病学调查
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细菌培养液中卡那霉素的酶联免疫试剂盒检测法
3
作者 邓兴朝 曾祥富 +2 位作者 林金昌 冯滨 金洪伟 《化学与生物工程》 北大核心 2025年第2期66-68,共3页
采用自制酶联免疫试剂盒检测细菌培养液中的卡那霉素含量。方法学验证结果表明,酶联免疫试剂盒能够准确检测细菌培养液中的卡那霉素含量,标准品浓度在0.0~16.2μg·L^(-1)范围内与吸光度线性关系良好,线性系数为0.9959,加标回收率为... 采用自制酶联免疫试剂盒检测细菌培养液中的卡那霉素含量。方法学验证结果表明,酶联免疫试剂盒能够准确检测细菌培养液中的卡那霉素含量,标准品浓度在0.0~16.2μg·L^(-1)范围内与吸光度线性关系良好,线性系数为0.9959,加标回收率为97.0%~102.8%,批内变异系数为3.66%,批间变异系数为5.05%,满足酶联免疫试剂盒要求。 展开更多
关键词 细菌培养液 卡那霉素 酶联免疫 定量检测
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实时荧光定量PCR与酶联定量PCR技术在HBV-DNA载量检测中的比较研究 被引量：19
4
作者 马力 赵桂珍 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期341-343,共3页
目的:比较实时荧光定量PCR(RQ-PCR)与酶联定量PCR(ELQ-PCR)技术在检测HBV感染血清HBV-DNA载量的灵敏度,精确性。为乙型肝炎临床抗病毒治疗和评价药物疗效提供可靠的依据。方法:应用RQ-PCR方法检测212例(4组)HBV感染者血清,ELQ-PCR方法检... 目的:比较实时荧光定量PCR(RQ-PCR)与酶联定量PCR(ELQ-PCR)技术在检测HBV感染血清HBV-DNA载量的灵敏度,精确性。为乙型肝炎临床抗病毒治疗和评价药物疗效提供可靠的依据。方法:应用RQ-PCR方法检测212例(4组)HBV感染者血清,ELQ-PCR方法检测228例(4组)HBV感染者血清。结果:RQ-PCR和ELQ-PCR方法检测HBV-DNA,其阳性检出率分别为HBsAg,HBeAg,HBcAb-IgG(+)组100%和82.61%;HBsAg,HBeAb,HBcAb-IgG(+)组90.63%和73.21%;HBsAg,HBcIgG,HBcAb-IgM(+)组80.00%和57.58%;HBsAg,HB-cAb-IgG(+)组70.15%和51.43%。HBV-DNA载量的阳性检出率,经统计学处理有显著性差异(P<0.05)。结论:RQ-PCR方法检测HBV-DNA载量在实时监测,节时快速,高灵敏,高精确度等方面都更优于ELQ-PCR。 展开更多
关键词 实时定量pcr 酶联定量pcr 乙型肝炎病毒核酸
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微板酶联夹心杂交法定量检测人IL-18 mRNA
5
作者 金晶 彭颖 吕建新 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期499-501,共3页
目的 :建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术 ,定量检测人IL 18mRNA。方法 :针对人IL 18mRNART PCR产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针 ,其中一条为捕获探针 ,5’端为氨基修饰 ,可以与微量DNA结合板... 目的 :建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术 ,定量检测人IL 18mRNA。方法 :针对人IL 18mRNART PCR产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针 ,其中一条为捕获探针 ,5’端为氨基修饰 ,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合 ,“竖直”地包被在微孔板内 ;另一条为检测探针 ,3’端标记生物素。提取人外周血单个核细胞中总RNA ,进行RT PCR扩增IL 18mRNA ,产物热变性后加入已包被捕获探针的微孔板内进行杂交 ,再加入检测探针与已杂交的产物结合 ,最后经亲和素 辣根过氧化物酶 (SAV HRP)系统检测杂交信号。结果 :该法检测IL 18mRNART PCR产物的灵敏度明显高于琼脂糖凝胶电泳 ,重复性良好 ,且结果数据化。结论 :该方法具有操作简单、灵敏度高、特异性强等优点 ,适合于PCR扩增产物的定量检测。 展开更多
关键词 微板酶联夹心杂交法 定量检测 IL-18mRNA RT-pcr
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猪肺炎支原体实时荧光重组酶介导的等温扩增快速检测方法的建立和应用
6
作者 康浩然 黄雨薇 +7 位作者 宋程 高鹏 张永宁 周磊 盖新娜 韩军 郭鑫 杨汉春 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期1-9,共9页
猪肺炎支原体(Mhp)是引起猪支原体肺炎(MPS)的病原,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。早期快速诊断和实时监测对该病的防控至关重要,目前常用的核酸检测方法难以满足临床上即时检测(POCT)的实际需求。本试验针对Mhp细胞膜表面脂蛋白基... 猪肺炎支原体(Mhp)是引起猪支原体肺炎(MPS)的病原,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。早期快速诊断和实时监测对该病的防控至关重要,目前常用的核酸检测方法难以满足临床上即时检测(POCT)的实际需求。本试验针对Mhp细胞膜表面脂蛋白基因p46,通过序列比对和系统性的引物筛选设计了exo探针及其对应的重组酶介导的等温扩增(RAA)技术引物对,建立了Mhp实时荧光(real-time)RAA快速检测方法;随后,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测,并使用该方法和实时荧光定量PCR(qPCR)对比检测临床样本。结果显示,该方法与猪链球菌、肺炎克雷伯氏菌、猪格拉瑟氏菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌均无交叉反应,特异性好;Mhp real-time RAA及其可视化方法的检测敏感性分别为18和29 copies/μL(95%置信区间),敏感性强;组内和组间重复性试验变异系数均小于8.0%,重复性好;对108份猪临床样本的检测结果显示,该方法及其可视化方法与Mhp qPCR方法的符合率分别为98.15%和99.07%。本试验所建立Mhp real-time RAA方法可以通过便捷式蓝光仪器实现结果的可视化,更适用于资源匮乏的诊断实验室和基层现场,为MPS的防控提供了技术手段。 展开更多
关键词 重组酶介导的等温扩增技术 猪肺炎支原体 实时荧光定量pcr 快速检测
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实时定量PCR检测拟南芥和盐芥谷胱甘肽过氧化物酶表达水平 被引量：3
7
作者 赵宝添 孙娜娜 +1 位作者 马志媛 谭伟杰 《现代农业科技》 2009年第14期332-332,共1页
综述了GPX在植物抗氧化胁迫中的功能,并利用实时定量PCR试验证明GPX在盐胁迫下表达水平的改变。
关键词 实时定量pcr 拟南芥 盐芥 谷胱甘肽过氧化物酶 检测
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猪流感病毒神经氨酸酶N2亚型Taq man荧光定量PCR检测方法的建立
8
作者 孙忠晟 尹燕博 +3 位作者 王平 陈正平 胡永钢 许宏伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第12期80-82,I0004,共4页
关键词 猪流感病毒 神经氨酸酶 pcr检测方法 荧光定量 亚型 TAQ N2 RNA片段
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基因扩增产物的固相杂交-酶联显色方法的建立 被引量：4
9
作者 王凤水 王宇 +1 位作者 陈红松 丛旭 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期192-198,共7页
建立基于基因扩增技术的简便、快速的病毒核酸定量检测方法．将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的病毒基因产物，与通过共价键结合在微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交，然后通过辣根过氧化物酶标记的抗生物素进行酶联显色，读取... 建立基于基因扩增技术的简便、快速的病毒核酸定量检测方法．将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的病毒基因产物，与通过共价键结合在微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交，然后通过辣根过氧化物酶标记的抗生物素进行酶联显色，读取光密度值．应用本方法对血清中乙型、丙型肝炎病毒核酸定量检测，灵敏度分别可达１－５拷贝／反应．此方法简便、快速、特异性好、敏感性高、半定量指标客观，可广泛应用于肝炎病毒感染的临床诊断和疗效评价． 展开更多
关键词 核酸定量 固相杂交 酶联显色 pcr 肝炎病毒
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荧光定量PCR法和ELISA检测儿童呼吸道感染病原体的意义 被引量：7
10
作者 刘来成 张鹏辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期1547-1549,共3页
儿童呼吸道感染是儿童秋冬季节常见的疾病,临床症状以发热、咳嗽、流涕等为主,近年来除了常见的细菌与病毒感染以外,肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）和肺炎衣原体（chlamydiapliel pneumoniae,CP）也逐渐成为急性呼吸道感染的... 儿童呼吸道感染是儿童秋冬季节常见的疾病,临床症状以发热、咳嗽、流涕等为主,近年来除了常见的细菌与病毒感染以外,肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）和肺炎衣原体（chlamydiapliel pneumoniae,CP）也逐渐成为急性呼吸道感染的主要病原体。由于该两类病原体的分离培养方法复杂,所需时间长,不便于临床快速诊断[1],早期检测出病原体而成为临床诊断棘手的问题。目前大多数医院对该两类病原体的检测仍以血清学方法（如ELISA）为主。 展开更多
关键词 肺炎支原体 肺炎衣原体 荧光定量pcr 酶联免疫法 诊断
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夹心酶联免疫吸附试验法与PCR法对检测牛I型疱疹病毒结果的比较研究
11
作者 张光磊 魏田田 +1 位作者 高月 梁云坤 《吉林畜牧兽医》 2021年第2期7-7,共1页
目的:为了建立一套标准的对牛I型疱疹病毒酶联免疫吸附试验体系(Sandwich ELISA)。方法:该试验基于超免疫兔和豚鼠的抗体血清中和纯化后的牛I型疱疹病毒。牛I型疱疹病毒的浓度和纯度采取聚乙二醇沉淀和蔗糖密度梯度离心的方法进行测定... 目的:为了建立一套标准的对牛I型疱疹病毒酶联免疫吸附试验体系(Sandwich ELISA)。方法:该试验基于超免疫兔和豚鼠的抗体血清中和纯化后的牛I型疱疹病毒。牛I型疱疹病毒的浓度和纯度采取聚乙二醇沉淀和蔗糖密度梯度离心的方法进行测定。抗体通过提取高纯度的IgG用弗氏佐剂进行收集。结果:通过滴定法测得最佳抗体稀释浓度为1:4000,与之相反的结合物稀释浓度为1:2000。通过95个临床样本,与传统的PCR检测比较,Sandwich-ELISA检测法展现出91.9%的敏感度和93.1%的特异性并表现出显著的阳性反应。结论:这些结果表明该ELISA法能够有效地检测BHV-1病毒并且可以作为一项重要的检测方法。 展开更多
关键词 夹心酶联免疫吸附试验 pcr法检测 牛I型疱疹病毒
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荧光定量聚合酶链反应检测血清中HBV-DNA
12
作者 许丽艳 敬华 +1 位作者 杨晋德 刘春雷 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期515-516,共2页
目的 :研究荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测HBV DNA对辨别病毒复制的临床意义。方法 :采用FQ PCR和ELISA方法 ,检测 79例患者血清HBV DNA拷贝数和免疫学血清指标。结果 :2 6例HBsAg、HBeAg、抗 HBc均阳性的标本 ,HBV DNA也全部阳性 ... 目的 :研究荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测HBV DNA对辨别病毒复制的临床意义。方法 :采用FQ PCR和ELISA方法 ,检测 79例患者血清HBV DNA拷贝数和免疫学血清指标。结果 :2 6例HBsAg、HBeAg、抗 HBc均阳性的标本 ,HBV DNA也全部阳性 ,平均拷贝数为 2 .7× 10 5/mL。 8例HBsAg、HBeAg阳性的标本 ,HBV DNA也全部阳性 ,平均拷贝数为5 .2× 10 4/mL。 2 1例HBsAg、抗 HBe、抗 HBc均阳性的标本HBV DNA阳性率为 6 6 .7% ,平均拷贝数为 3.1× 10 4/mL。 9例HBsAg阳性的标本HBV DNA阳性率为 11%。平均拷贝数为1.4× 10 3 /mL。结论 :荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA可以更加准确地判断HBV的感染和复制情况。 展开更多
关键词 HBV-DNA pcr ELISA 荧光定量聚合酶链反应 病毒复制 血清检测
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利用ELISA与qRT-PCR技术检测番木瓜PRSV病毒的方法研究 被引量：1
13
作者 谢秀菊 夏启玉 +7 位作者 霍姗姗 杜晓希 麦贤俊 张雨良 郭安平 李峰 孔祥义 赵辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2534-2541,共8页
番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番... 番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番木瓜植株感染PRSV的方法,利用这2种方法检测多株转基因番木瓜与非转基因番木瓜的PRSV含量,并对结果进行比较分析。结果表明:利用PRSV多肽抗原作为标准品制备的抗体建立的标准曲线拟合度较好,可用于ELISA法检测PRSV;qRT-PCR法中选择的内参基因Cpa03g018830在番木瓜的不同生长阶段均稳定表达,可作为PRSV含量测定的内参基因;ELISA法和qRT-PCR法对多株转基因和非转基因番木瓜植株中PRSV含量的检测结果基本一致,表明这2种方法均可用于番木瓜植株中PRSV含量的检测。利用这2种检测手段,可及时发现并铲除感染了PRSV的番木瓜植株,有效预防与控制PRSV传播。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 酶联免疫吸附 荧光定量逆转录pcr
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荧光定量聚合酶链反应检测沙眼衣原体
14
作者 吴年浪 张惠成 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2003年第1期46-46,共1页
沙眼是一种由沙眼衣原体引起的常见病,多发病.目前由于抗生素的应用,临床表现多不典型,易漏诊误诊.
关键词 荧光定量聚合酶链反应 检测 沙眼衣原体 pcr DNA 沙眼
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聚合酶键式反应生物芯片/微装置的实时定量荧光检测
15
作者 章春笋 徐进良 《分析科学学报》 CAS CSCD 2006年第1期102-107,共6页
以微电子机械系统技术而发展起来的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Re-action,PCR)生物芯片/微装置,由于具有所需样品和反应混合物体积少,反应速度快以及集成化程度高等优点而日益引起人们的重视。实时定量PCR是利用能特异标记PCR产... 以微电子机械系统技术而发展起来的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Re-action,PCR)生物芯片/微装置,由于具有所需样品和反应混合物体积少,反应速度快以及集成化程度高等优点而日益引起人们的重视。实时定量PCR是利用能特异标记PCR产物的荧光染料来动态显示PCR产物的累积,从而得到PCR扩增曲线的技术。本文介绍了实时定量检测技术及其在PCR生物芯片/微装置中的应用。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应(pcr) 实时定量检测 生物芯片/微装置 荧光检测
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实时荧光定量PCR技术检测牙周致病菌的研究现状
16
作者 朱丽芳 郑瑜谦 闫福华 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期380-382,共3页
关键词 pcr技术检测 牙周致病菌 实时荧光定量 细菌培养 聚合酶链反应 微生物群 分子生物学 不良影响
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牛呼吸疾病综合征七病原联合检测多重qPCR方法的建立 被引量：8
17
作者 徐恩红 祁明普 +5 位作者 项志杰 胡长敏 陈颖钰 陈建国 陈曦 郭爱珍 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期38-47,共10页
为了提高牛呼吸疾病综合征多病原混合感染的临床诊断效率,以牛支原体(Mycoplasma bovis,M.b)oppD/F基因、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P.m)ompH基因、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.h)gcp基因、牛传染性鼻气管炎病... 为了提高牛呼吸疾病综合征多病原混合感染的临床诊断效率,以牛支原体(Mycoplasma bovis,M.b)oppD/F基因、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P.m)ompH基因、溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.h)gcp基因、牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gB基因、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)以及牛副流感病毒(bovine parainfluenza virus type,BPIV) 3型a和c基因型(BPIV-3a,-3c)的N基因等为检测靶标,分别设计特异性引物和Taqman探针,通过优化反应条件,采用3管7联的组合方式建立了7种病原体的多联实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法仅对本试验的7种病原有特异性反应,与其他常见病原无交叉反应。对M.b、P.m、M.h、IBRV、BRSV、BPIV-3a和BPIV-3c质粒标准品的最低检测限分别为102、102、101、102、102、102和101拷贝/μL。组内变异系数小于2.5%,组间变异系数小于5.5%。平行应用该方法和常规PCR方法对临床采集的115份有呼吸道症状牛的鼻拭子进行检测,P.m阳性率36.65%,M.b阳性率27.83%,M.h阳性率25.22%,IBRV阳性率11.30%,BPIV-3c阳性率8.57%,BRSV阳性率0.95%;其中混合感染率为26.1%。共检测到11种混合感染模式,主要由M.b与其他病原体的混合感染,占72.7%(8/11);M.b/P.m混合感染的检出率最高,占60%(18/30);M.b、P.m、M.h在混合感染中出现率排前三,其占比分别为73.3%(22/30)、73.3%(22/30)和43.3%(13/30);其次为IBRV,占26.7%(8/30);BPIV-3c占13.3%(4/30)。以上结果表明,该方法具有较高的分析敏感性和特异性,可用于牛呼吸疾病综合征多病原感染的联合检测。 展开更多
关键词 多联实时荧光定量pcr方法 牛呼吸疾病综合征 混合感染 牛支原体 多杀性巴氏杆菌 牛溶血性曼氏杆菌 多病原联合检测
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基于单拷贝核基因的荧光定量PCR技术检测驴奶的含量 被引量：2
18
作者 王之莹 李婷婷 +2 位作者 于文杰 乔璐 陈爱亮 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第21期261-265,共5页
本研究建立了一种基于内参基因的标准化实时聚合酶链式反应(real-time PCR)方法,能够定量检测混合掺假的灭菌乳中驴奶的含量。使用单拷贝核基因代替多拷贝线粒体基因,基于Ct值(驴特异性引物/内参引物)与驴奶含量的线性关系,对含量为5%~1... 本研究建立了一种基于内参基因的标准化实时聚合酶链式反应(real-time PCR)方法,能够定量检测混合掺假的灭菌乳中驴奶的含量。使用单拷贝核基因代替多拷贝线粒体基因,基于Ct值(驴特异性引物/内参引物)与驴奶含量的线性关系,对含量为5%~100%的驴奶建立了标准曲线。该方法具有良好的线性相关(R^2=0.9650)和较高的准确度,对含有20%、50%和80%驴奶的模拟掺假样品进行定量分析,平均回收率为109.16%,平均CV值为4.68%。因此,该方法可以快速、准确地对驴奶进行定量,从而确定驴奶是否掺假以及掺假比例。 展开更多
关键词 实时聚合酶链式反应(pcr) 定量检测 驴奶掺假 单拷贝核基因
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猪肺炎支原体p46蛋白定量检测双抗夹心ELISA方法的建立 被引量：2
19
作者 张飞雁 秦涛 +4 位作者 谢红玲 朱薇 李建 郑佳 冯钊 《动物医学进展》 北大核心 2024年第11期64-69,共6页
为建立快速检测猪肺炎支原体灭活疫苗抗原含量的双抗夹心ELISA方法,以抗猪肺炎支原体p46蛋白多抗为包被抗体,HRP标记的抗猪肺炎支原体p46蛋白单抗(HRP-P46单抗)为检测抗体,进行反应条件优化,建立了猪肺炎支原体定量检测双抗夹心ELISA方... 为建立快速检测猪肺炎支原体灭活疫苗抗原含量的双抗夹心ELISA方法,以抗猪肺炎支原体p46蛋白多抗为包被抗体,HRP标记的抗猪肺炎支原体p46蛋白单抗(HRP-P46单抗)为检测抗体,进行反应条件优化,建立了猪肺炎支原体定量检测双抗夹心ELISA方法。结果表明,抗猪肺炎支原体p46蛋白多抗包被浓度为4000 ng/mL,HRP-P46单抗浓度为50 ng/mL,封闭液为5%脱脂牛奶粉条件最优,该方法在检测范围为5.69~7.80(Log 10 CCU/mL)时,R 2为0.9879。该方法特异性好,与6种猪源病原均无交叉反应,且该ELISA方法批内重复变异系数和批间重复变异系数均小于5%。使用该ELISA方法和活菌计数方法同时测定20批抗原活菌数,两种方法差值小于101.0 CCU/mL,猪肺炎支原体JM株和RM48株均可用此方法进行检测。该方法具有良好的敏感性、精确性、特异性,可用于猪肺炎支原体灭活疫苗的抗原检测。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 酶联免疫吸附试验 定量检测 疫苗
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6种不同J亚群禽白血病病毒检测试剂盒的比较
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作者 赵方钰 崔慧珍 +4 位作者 王一新 常爽 任志浩 崔文平 赵鹏 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第4期62-69,共8页
为了比较6种不同J亚群禽白血病病毒(ALV-J)检测试剂盒的检测结果,以更好地实施禽白血病净化和鸡苗洁净度评估。本试验首先将ALV-J参考株以卵黄囊接种感染无特定病原体(SPF)鸡胚构建雏鸡携带ALV-J模型,对出壳雏鸡逐一采集胎粪和抗凝血,... 为了比较6种不同J亚群禽白血病病毒(ALV-J)检测试剂盒的检测结果,以更好地实施禽白血病净化和鸡苗洁净度评估。本试验首先将ALV-J参考株以卵黄囊接种感染无特定病原体(SPF)鸡胚构建雏鸡携带ALV-J模型,对出壳雏鸡逐一采集胎粪和抗凝血,随后分别将胎粪滤液和血浆接种鸡胚成纤维传代(DF-1)细胞进行病毒培养,维持7 d时收取细胞上清,以A、B、C三家公司的ALV p27抗原酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒以及商品化的磁微粒化学发光检测试剂盒、胶体金试纸条和实时荧光定量PCR检测试剂盒分别对胎粪、不同稀释度胎粪样品、胎粪病毒分离细胞上清和血浆病毒分离细胞上清进行检测。结果显示,6种不同试剂盒对胎粪、胎粪病毒分离细胞上清和血浆病毒分离细胞上清的检测结果判定总体一致,其中以磁微粒化学发光检测试剂盒读数判定最为直观,其阳性样品与阴性样品的读值区分明显、易于判断。对不同稀释度胎粪样品的检测结果显示,以A公司ALV p27抗原ELISA试剂盒、磁微粒化学发光检测试剂盒和实时荧光定量PCR检测试剂盒相对灵敏,可检出低滴度病原。结果表明,不同检测方法对ALV-J检测的整体判定差异不显著,但针对低滴度样品检测时不同方法的检出率有差异,需要根据情况选择方法。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒(ALV-J) P27抗原 酶联免疫吸附测定(ELISA) 磁微粒化学发光检测试剂盒 胶体金试纸条 实时荧光定量pcr
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