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基于地高辛标记对小麦进行Southern杂交分析主要影响因素的优化和验证
被引量：
7
1
作者
刘禄
牛焱焱
+4 位作者
雷昊
林志珊
赵翔宇
叶兴国
张宪省
《植物遗传资源学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期182-188,共7页
以转基因小麦和野生型小麦DNA为材料,对利用地高辛标记对小麦基因组DNA进行Southern杂交分析的影响因素进行了优化研究,包括探针制备与纯化、样品DNA量、酶切体系、真空转印条件、杂交条件、免疫检测方法等。结果表明,对随机引物标记的...
以转基因小麦和野生型小麦DNA为材料,对利用地高辛标记对小麦基因组DNA进行Southern杂交分析的影响因素进行了优化研究,包括探针制备与纯化、样品DNA量、酶切体系、真空转印条件、杂交条件、免疫检测方法等。结果表明,对随机引物标记的模板和标记后的探针进行纯化可明显提高探针的标记效率,10μg高质量的DNA样品在80μl的体系中,酶切8～12h可获得良好的效果;真空转膜时使用碱性液比中性液获得的转膜效果更干净;试剂纯度、杂交温度及杂交炉转速等均对杂交效果产生重要影响;配合改进的CSPD涂布方法,使用化学发光检测系统比单纯使用X光片显像更易操作,背景更干净;本研究所优化的地高辛标记的小麦Southern杂交分析显示出较高的灵敏度和信噪比,结果稳定,可克服同位素标记对实验条件、设备及实验人员身体状况等限制,在普通实验室推广应用。
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关键词
小麦
地高辛
标记
随机引物
pcr法标记探针
免疫检测
SOUTHERN杂交
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职称材料
转基因甘蔗植株Southern杂交体系的优化
被引量：
7
2
作者
崔学强
张树珍
+1 位作者
沈林波
冯翠莲
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期105-109,共5页
对甘蔗Southern杂交体系的优化,旨为转基因甘蔗Southern杂交鉴定分析提供参考。以转基因甘蔗为材料,就探针不同标记方法的比较、甘蔗基因组DNA的提取、基因组DNA酶切量、酶切时间及杂交过程等方面,对地高辛标记的Southern杂交技术进行...
对甘蔗Southern杂交体系的优化,旨为转基因甘蔗Southern杂交鉴定分析提供参考。以转基因甘蔗为材料,就探针不同标记方法的比较、甘蔗基因组DNA的提取、基因组DNA酶切量、酶切时间及杂交过程等方面,对地高辛标记的Southern杂交技术进行了优化研究。结果表明,改良的CTAB法提取的甘蔗DNA能满足后期实验的要求;PCR法标记探针的效率较随机引物法标记探针的效率高,更适合用于Southern杂交;40μg的DNA在400μL酶切体系中,酶切10 h可获得良好的酶切效果;杂交温度40℃,杂交18 h,可获得清晰的杂交条带。
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关键词
甘蔗
SOUTHERN杂交
地高辛
pcr法标记探针
酶切
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职称材料
题名
基于地高辛标记对小麦进行Southern杂交分析主要影响因素的优化和验证
被引量：
7
1
作者
刘禄
牛焱焱
雷昊
林志珊
赵翔宇
叶兴国
张宪省
机构
山东农业大学发育分子生物学实验室/国家重点实验室
中国农业科学院作物科学研究所/国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程/农业部作物遗传改良与育种重点开放实验室
中国科学技术大学
北京城市学院
出处
《植物遗传资源学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期182-188,共7页
基金
转基因专项2008ZX08002
文摘
以转基因小麦和野生型小麦DNA为材料,对利用地高辛标记对小麦基因组DNA进行Southern杂交分析的影响因素进行了优化研究,包括探针制备与纯化、样品DNA量、酶切体系、真空转印条件、杂交条件、免疫检测方法等。结果表明,对随机引物标记的模板和标记后的探针进行纯化可明显提高探针的标记效率,10μg高质量的DNA样品在80μl的体系中,酶切8～12h可获得良好的效果;真空转膜时使用碱性液比中性液获得的转膜效果更干净;试剂纯度、杂交温度及杂交炉转速等均对杂交效果产生重要影响;配合改进的CSPD涂布方法,使用化学发光检测系统比单纯使用X光片显像更易操作,背景更干净;本研究所优化的地高辛标记的小麦Southern杂交分析显示出较高的灵敏度和信噪比,结果稳定,可克服同位素标记对实验条件、设备及实验人员身体状况等限制,在普通实验室推广应用。
关键词
小麦
地高辛
标记
随机引物
pcr法标记探针
免疫检测
SOUTHERN杂交
Keywords
Wheat
Digoxigenin
Random primer
pcr
DNA labeling
Immunological detection
Southern blotting
分类号
S512.1 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
转基因甘蔗植株Southern杂交体系的优化
被引量：
7
2
作者
崔学强
张树珍
沈林波
冯翠莲
机构
海南大学农学院
中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心农业部热带作物生物技术重点开放实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期105-109,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31101197)
现代农业产业技术体系建设专项基金(CARS-20-2-5)
文摘
对甘蔗Southern杂交体系的优化,旨为转基因甘蔗Southern杂交鉴定分析提供参考。以转基因甘蔗为材料,就探针不同标记方法的比较、甘蔗基因组DNA的提取、基因组DNA酶切量、酶切时间及杂交过程等方面,对地高辛标记的Southern杂交技术进行了优化研究。结果表明,改良的CTAB法提取的甘蔗DNA能满足后期实验的要求;PCR法标记探针的效率较随机引物法标记探针的效率高,更适合用于Southern杂交;40μg的DNA在400μL酶切体系中,酶切10 h可获得良好的酶切效果;杂交温度40℃,杂交18 h,可获得清晰的杂交条带。
关键词
甘蔗
SOUTHERN杂交
地高辛
pcr法标记探针
酶切
Keywords
sugarcane
Southern blot
digoxigenin
pcr
-labeled probe
enzyme digestion
分类号
S566.1 [农业科学—作物学]
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
基于地高辛标记对小麦进行Southern杂交分析主要影响因素的优化和验证
刘禄
牛焱焱
雷昊
林志珊
赵翔宇
叶兴国
张宪省
《植物遗传资源学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
转基因甘蔗植株Southern杂交体系的优化
崔学强
张树珍
沈林波
冯翠莲
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
7
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职称材料
已选择
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