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表达绿色荧光蛋白的伪狂犬病毒Bartha-K61株TK^-突变株的构建
被引量：
2
1
作者
范伟兴
宋建兰
+2 位作者
魏荣
陈溥言
赵宏坤
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第5期476-482,共7页
提取伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的PRVKa plan株UL区UL25、UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的左臂片段(L...
提取伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的PRVKa plan株UL区UL25、UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL25、全部UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失270个核苷酸。将L片段和R片段克隆于pBluescriptM13-载体上,获得pSKLR;再将绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1上含GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLRG。提取pSKLRG质粒,经单酶切线性化后用脂质体与PRVBartha-K61株共转染143TK-细胞,在细胞培养液中有5 溴脱氧尿嘧啶(BrdU)存在的条件下筛选出表达绿色荧光蛋白的重组PRVBartha-K61毒株:PRVrBGFP。
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关键词
基因表达
绿色荧光蛋白
伪狂犬病毒
Bartha—K61株
TK^-突变株
基因构建
pcr扩增模板
DNA
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职称材料
题名
表达绿色荧光蛋白的伪狂犬病毒Bartha-K61株TK^-突变株的构建
被引量：
2
1
作者
范伟兴
宋建兰
魏荣
陈溥言
赵宏坤
机构
山东农业大学动物科技学院
南京农业大学动物医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第5期476-482,共7页
基金
山东省科技厅科技攻关项目(鲁科技字991154402)
文摘
提取伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的PRVKa plan株UL区UL25、UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL25、全部UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失270个核苷酸。将L片段和R片段克隆于pBluescriptM13-载体上,获得pSKLR;再将绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1上含GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLRG。提取pSKLRG质粒,经单酶切线性化后用脂质体与PRVBartha-K61株共转染143TK-细胞,在细胞培养液中有5 溴脱氧尿嘧啶(BrdU)存在的条件下筛选出表达绿色荧光蛋白的重组PRVBartha-K61毒株:PRVrBGFP。
关键词
基因表达
绿色荧光蛋白
伪狂犬病毒
Bartha—K61株
TK^-突变株
基因构建
pcr扩增模板
DNA
Keywords
PRV Bartha-K61 strain
Deletion of thymidine kinase gene
Transfer vector
Recombinant virus Connecter
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达绿色荧光蛋白的伪狂犬病毒Bartha-K61株TK^-突变株的构建
范伟兴
宋建兰
魏荣
陈溥言
赵宏坤
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003
2
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