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题名gutD基因的克隆及植物表达载体的构建
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作者
王悦
燕丽萍
夏阳
李阳春
洪春
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机构
甘肃农业大学生命科学技术学院
山东省林业科学研究院
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出处
《山东林业科技》
2007年第6期39-41,共3页
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文摘
通过RT-PCR的方法从大肠杆菌K12中扩增出了gutD基因的全长cDNA片段,将其克隆到pMD18 T-vector中,序列分析表明克隆的片段长度为780bp,包含了完整的gutD基因的编码序列,除编码区第61位密码子由CTG变为CGT和第72位密码子CTT变为CCT其它序列与所报道的修正序列一致。以BamHⅠ和HindIII限制性内切酶从克隆载体上切取gutD基因,将其连接在相应酶切的中间载体KS上,再以KpnI和BamHI酶切重组子获得具粘性末端的目的片段(gutD)与植物表达载体pCAMBIA2300连接,重组质粒通过双酶切和PCR鉴定正确后,采用直接转化法将pCAMBIA2300-gutD质粒导入根癌农杆菌LBA4404,并用PCR方法进行了鉴定。
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关键词
6-磷酸山梨醇脱氢酶基因(gutD)
克隆
序列分析
pcr及酶切检测
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分类号
S722.3
[农业科学—林木遗传育种]
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