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牛瑟氏泰勒虫P23和P33表面蛋白双基因融合表达载体的构建及原核表达
被引量：
4
1
作者
曹世诺
于龙政
+3 位作者
薛书江
贾立军
周末
张守发
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第11期866-869,874,共5页
为探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接一起,2个基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶...
为探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接一起,2个基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得1151bp的双基因融合片段,克隆于表达质粒pGEX-4T-1中,构建了双基因重组表达载体pGEX-4T-P23-P33,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达出预期大小70.0ku的融合蛋白。Western blot检测结果显示,该蛋白与牛瑟氏泰勒虫抗血清呈阳性反应,表明融合蛋白具有反应原性,为进一步研究此融合蛋白作为疫苗候选成分提供了理论依据。
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关键词
牛瑟氏泰勒虫
p
23
表面
蛋白
基因
p33表面蛋白基因
融合
基因
表达
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职称材料
牛瑟氏泰勒虫环介导等温扩增检测方法的建立
被引量：
8
2
作者
王中光
张守发
+4 位作者
曹世诺
贾立军
薛书江
田万年
王暖成
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期108-111,共4页
为建立快捷、灵敏的牛瑟氏泰勒虫(T.sergenti)检测方法,本研究以感染牛T.sergenti的阳性血液为试验材料,建立了牛T.sergenti P33表面蛋白基因环介导等温扩增(LAMP)检测技术,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。结果显...
为建立快捷、灵敏的牛瑟氏泰勒虫(T.sergenti)检测方法,本研究以感染牛T.sergenti的阳性血液为试验材料,建立了牛T.sergenti P33表面蛋白基因环介导等温扩增(LAMP)检测技术,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。结果显示,扩增产物经显色、电泳、酶切鉴定后,LAMP方法扩增牛T.sergenti产物检测管显色后呈阳性反应,最低检测量为2.3fg/μL模板DNA,比普通PCR高10倍,牛T.sergenti LAMP产物电泳后呈特征性梯状条带,而弓形虫等对照组均无扩增条带。说明本研究建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速等优点,适合于牛T.sergenti的检测。
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关键词
牛瑟氏泰勒虫
p33表面蛋白基因
环介导等温扩增技术
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职称材料
题名
牛瑟氏泰勒虫P23和P33表面蛋白双基因融合表达载体的构建及原核表达
被引量：
4
1
作者
曹世诺
于龙政
薛书江
贾立军
周末
张守发
机构
延边大学农学院动物医学系
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第11期866-869,874,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30560112)
文摘
为探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接一起,2个基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得1151bp的双基因融合片段,克隆于表达质粒pGEX-4T-1中,构建了双基因重组表达载体pGEX-4T-P23-P33,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达出预期大小70.0ku的融合蛋白。Western blot检测结果显示,该蛋白与牛瑟氏泰勒虫抗血清呈阳性反应,表明融合蛋白具有反应原性,为进一步研究此融合蛋白作为疫苗候选成分提供了理论依据。
关键词
牛瑟氏泰勒虫
p
23
表面
蛋白
基因
p33表面蛋白基因
融合
基因
表达
Keywords
Theileria sergenti
p
23 surface
p
rotein gene
p
33
surface
p
rotein gene
fusion gene ex
p
ression
分类号
S852.729 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
牛瑟氏泰勒虫环介导等温扩增检测方法的建立
被引量：
8
2
作者
王中光
张守发
曹世诺
贾立军
薛书江
田万年
王暖成
机构
延边大学农学院动物医学系
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期108-111,共4页
基金
国家自然科学基金(30560112)
文摘
为建立快捷、灵敏的牛瑟氏泰勒虫(T.sergenti)检测方法,本研究以感染牛T.sergenti的阳性血液为试验材料,建立了牛T.sergenti P33表面蛋白基因环介导等温扩增(LAMP)检测技术,并优化了LAMP的各反应条件,进行了敏感性和特异性试验。结果显示,扩增产物经显色、电泳、酶切鉴定后,LAMP方法扩增牛T.sergenti产物检测管显色后呈阳性反应,最低检测量为2.3fg/μL模板DNA,比普通PCR高10倍,牛T.sergenti LAMP产物电泳后呈特征性梯状条带,而弓形虫等对照组均无扩增条带。说明本研究建立的LAMP方法具有灵敏、特异、快速等优点,适合于牛T.sergenti的检测。
关键词
牛瑟氏泰勒虫
p33表面蛋白基因
环介导等温扩增技术
Keywords
Theileria sergenti
p
33
surface
p
rotein gene
loo
p
-mediated isothermal am
p
lification LAM
p
分类号
S852.72 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛瑟氏泰勒虫P23和P33表面蛋白双基因融合表达载体的构建及原核表达
曹世诺
于龙政
薛书江
贾立军
周末
张守发
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
4
在线阅读
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职称材料
2
牛瑟氏泰勒虫环介导等温扩增检测方法的建立
王中光
张守发
曹世诺
贾立军
薛书江
田万年
王暖成
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
8
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职称材料
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参考文献
引证文献
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