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牛白血病病毒P24蛋白单克隆抗体的制备与表位鉴定
1
作者 于长清 周玉龙 +1 位作者 徐青元 先元华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1080-1085,共6页
为制备牛白血病病毒(BLV)P24蛋白单克隆抗体(MAb),本研究分别将原核表达载体pcoldIII-P24-GST和p ET-32a-P24-6×His转染大肠杆菌感受态细胞后诱导表达并分别采用纯化磁珠和Ni-柱纯化带有His和GST标签的两种重组P24蛋白(rP24-His和r... 为制备牛白血病病毒(BLV)P24蛋白单克隆抗体(MAb),本研究分别将原核表达载体pcoldIII-P24-GST和p ET-32a-P24-6×His转染大肠杆菌感受态细胞后诱导表达并分别采用纯化磁珠和Ni-柱纯化带有His和GST标签的两种重组P24蛋白(rP24-His和r P24-GST)。将rP24-His作为免疫原免疫小鼠,制备针对P24蛋白的MAb,利用rP24-GST作为包被抗原,经ELISA方法筛选,结果显示获得并筛选到两株针对P24蛋白效价较高的MAb44-10和115-5。间接免疫荧光试验检测结果显示,两株MAb仅和P24蛋白反应,均不能与牛病毒性腹泻病毒反应,初步表明其特异性良好。将P24蛋白截短表达后进行抗原表位鉴定,结果显示,两株MAb 44-10和115-5分别识别P24蛋白氨基酸序列197GQKLQACAHW^(206)和108GDLRSQYQN^(116)。本研究获得的两株P24 MAb具有建立BLV血清学检测方法的潜力,为进一步研发针对P24蛋白的BLV检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 牛白血病病毒 单克隆抗体 p24蛋白
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贵州遵义地区山羊Borna病毒P24基因片段的检测 被引量：7
2
作者 王长明 徐平 +1 位作者 葛均江 郭振元 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期149-151,共3页
目的探讨贵州遵义及周边地区山羊博尔纳病病毒(BDV)感染状况。方法采用荧光定量套式逆转录酶聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测了300只山羊外周血单个核细胞(PBMC)中BDVP24基因片段。对阳性产物进行基因序列测定,氨基酸顺序,及同源性分析。... 目的探讨贵州遵义及周边地区山羊博尔纳病病毒(BDV)感染状况。方法采用荧光定量套式逆转录酶聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测了300只山羊外周血单个核细胞(PBMC)中BDVP24基因片段。对阳性产物进行基因序列测定,氨基酸顺序,及同源性分析。结果300只山羊PBMC中2只检出BDVP24基因阳性片段。山羊BDVP24基因片段阳性率为0.67(。BDVP24基因片段测序结果与GenBank提供的strainV毒株比较同源性为96.51%,有3个位点出现一致性沉寂突变,与BDV/MDCK毒株比较同源性为96.51%,有3个位点出现一致性沉寂突变,与C6BV毒株比较同源性为96.51%,有3个位点出现一致性沉寂突变,但所编码的氨基酸没有改变。结论贵州遵义及周边部分地区山羊存在BDV自然感染。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 巢式逆转录荧光定量PCR BDV p24基因 山羊
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HIV-1 p24抗原检测的应用研究 被引量：5
3
作者 尹红章 李秀华 +2 位作者 孟淑芳 宋爱京 李德富 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期151-152,154,共3页
目的 :用抗HIV 1p2 4单克隆抗体和多克隆抗体构建的间接ELISA试剂 ,检测HIV 1抗体阳性及其它样品 ,探讨应用的可行性。方法 :采用单克隆抗体固相、兔抗HIV 1p2 4抗体夹心 ,羊抗兔HRP结合物的间接ELISA法。结果 :显示试剂盒HIV 1p2 4抗... 目的 :用抗HIV 1p2 4单克隆抗体和多克隆抗体构建的间接ELISA试剂 ,检测HIV 1抗体阳性及其它样品 ,探讨应用的可行性。方法 :采用单克隆抗体固相、兔抗HIV 1p2 4抗体夹心 ,羊抗兔HRP结合物的间接ELISA法。结果 :显示试剂盒HIV 1p2 4抗原检出灵敏度为 5 0pg/ml(基因工程抗原 ) ;特异性 99 46 % ;HIV抗体阳性血样阳性率 3 2 % ;抗体阴性的特殊人群血样阳性率 3 9% ;抗体不确定血样阳性率为 15 4% ,明显高于抗体阳性和阴性组血样。病毒培养 1d ,抗原效价 1∶80 ,第 3天可达1∶5 12 0。结论 :该间接夹心HIV 1p2 4抗原检测试剂灵敏度高、特异性好 ,可应用于HIV感染的辅助检测及病毒的基础研究。 展开更多
关键词 HIV-1p24 ELISA 单克隆抗体 艾滋病
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抗HIV-1核心抗原p24单克隆抗体的制备及特性的初步鉴定 被引量：4
4
作者 侯俊 胡燕 +4 位作者 朱雷 沈宏辉 杨健洋 洪世雯 貌盼勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期699-701,共3页
目的 :建立分泌抗HIV 1p2 4单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株 ,并对其特性进行初步鉴定。方法 :以纯化的基因工程制备的p2 4抗原免疫BALB/c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 /0骨髓瘤细胞融合 ,经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后 ... 目的 :建立分泌抗HIV 1p2 4单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株 ,并对其特性进行初步鉴定。方法 :以纯化的基因工程制备的p2 4抗原免疫BALB/c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 /0骨髓瘤细胞融合 ,经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后 ,用间接ELISA法及Dotblot对其进行筛选和特性鉴定。结果 :筛选到 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,其腹水效价为 1×10 -5,亲和力为 1.7× 10 4～ 1.8×10 4mol/L ,mAb的Ig亚类均为IgG1。两株mAb与HBcAg、HCVRNA阳性血清及HIVgp4 1等均无交叉反应 ,只与HIV 1p2 4抗原阳性血清产生特异反应。结论 :成功地建立了 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,为进一步研制HIV 1p2 展开更多
关键词 HIV-1 p24抗原 单克隆抗体 杂交瘤
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HIV核心抗原p24检测方法的建立及应用 被引量：3
5
作者 刘荷中 凌世淦 +6 位作者 陈坤 宋晓国 韩保光 孟莉 马贤凯 董邦权 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第4期51-54,共4页
ＨＩＶ感染的检测在预防ＡＩＤＳ传播方面有重要作用。本研究以重组抗原ｐＧ１免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了５株识别ＨＩＶ核心抗原ｐ２４的杂交瘤细胞株Ｄ３，１Ｈ１，２Ｇ１０，３Ｈ５和４Ｈ６。经鉴定这５株... ＨＩＶ感染的检测在预防ＡＩＤＳ传播方面有重要作用。本研究以重组抗原ｐＧ１免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了５株识别ＨＩＶ核心抗原ｐ２４的杂交瘤细胞株Ｄ３，１Ｈ１，２Ｇ１０，３Ｈ５和４Ｈ６。经鉴定这５株ＭｃＡｂ与其它病毒抗原无交叉反应，分别识别３个不同的抗原表位。应用两株识别不同表位的ＭｃＡｂ２Ｇ１０和３Ｈ５建立了检测ＨＩＶｐ２４抗原的夹心ＥＬＩＳＡ法，并初步检测了２４份ＨＩＶ抗体阳性血清。 展开更多
关键词 HIV p24 单克隆抗体 ELISA AIDS
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HIV衣壳蛋白P24与TRIM22在HEK293T细胞中的表达及共定位 被引量：3
6
作者 孙大康 安新业 +3 位作者 周玉明 纪兵 宋向芹 徐殿红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1081-1084,共4页
目的观察人类免疫缺陷病毒(HIV)衣壳蛋白P24与三基序蛋白22(TRIM22)在HEK293T细胞中的共定位情况。方法以慢病毒载体p LP1为模板,通过PCR法扩增p24编码序列,克隆至p DsRed-Monomer-N1真核表达载体。经菌落PCR、双酶切及DNA测序进行鉴定... 目的观察人类免疫缺陷病毒(HIV)衣壳蛋白P24与三基序蛋白22(TRIM22)在HEK293T细胞中的共定位情况。方法以慢病毒载体p LP1为模板,通过PCR法扩增p24编码序列,克隆至p DsRed-Monomer-N1真核表达载体。经菌落PCR、双酶切及DNA测序进行鉴定。将p DsRed-Monomer-N1-p24与p EGFP-N3-TRIM22载体共同转染HEK293T细胞,用荧光显微镜观察p24-DsRed-Monomer和TRIM22-EGFP的表达及共定位情况。结果经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,成功构建p DsRedMonomer-N1-p24真核表达载体。通过荧光显微镜检测发现,p24-DsRed-Monomer和TRIM22-EGFP在HEK293T细胞中存在共定位关系。结论 HIV衣壳蛋白P24与TRIM22存在共定位。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 衣壳蛋白 p24 TRIM22 共定位
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抗HIV核心蛋白p24单克隆抗体的研制及鉴定 被引量：4
7
作者 王宏伟 金宁一 +5 位作者 刘仔 郭军庆 郭志儒 毛春生 李萍 殷震 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期63-64,共2页
抗ＨＩＶ核心蛋白ｐ２４单克隆抗体的研制及鉴定王宏伟金宁一刘仔郭军庆郭志儒毛春生李萍殷震（解放军农牧大学研究所病毒室，长春１３００６２）人Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ１）是导致人获得性免疫缺陷综合征（ＡＩＤＳ）的主要病原... 抗ＨＩＶ核心蛋白ｐ２４单克隆抗体的研制及鉴定王宏伟金宁一刘仔郭军庆郭志儒毛春生李萍殷震（解放军农牧大学研究所病毒室，长春１３００６２）人Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ１）是导致人获得性免疫缺陷综合征（ＡＩＤＳ）的主要病原［１］。对ＨＩＶ１感染的诊断，常... 展开更多
关键词 抗HIV 核心蛋白p24 单克隆抗体 研制 鉴定
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抗HIV-1 p24单克隆抗体的制备、特性鉴定及初步应用 被引量：3
8
作者 张红中 王润田 +3 位作者 王蕙芬 张坤娟 王从印 王丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期646-647,共2页
目的:制备抗HIV1p24单克隆抗体(mAb)及特性鉴定。方法:采用细胞融合技术制备可稳定分泌抗HIV1p24mAb的杂交瘤细胞。选择高效价、识别不同抗原表位的mAb纯化后,分别包被ELISA板及作为酶标记mAb,建立双mAb夹心ELISA法,检测400份正常人血浆... 目的:制备抗HIV1p24单克隆抗体(mAb)及特性鉴定。方法:采用细胞融合技术制备可稳定分泌抗HIV1p24mAb的杂交瘤细胞。选择高效价、识别不同抗原表位的mAb纯化后,分别包被ELISA板及作为酶标记mAb,建立双mAb夹心ELISA法,检测400份正常人血浆,20份抗HIV抗体阳性(p24抗原阴性)的血浆,20份HIV1感染的细胞培养上清及HIV1p24抗原国家参考品,并同时用进口p24抗原检测试剂盒进行对比检测。结果:经细胞融合、筛选、克隆化,共获得10株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选A值≥2.50的2株mAb建立的双mAb夹心ELISA法,敏感性可达2.5ng/L,且与进口试剂盒检测结果的一致性良好。结论:建立了具有高度敏感性和特异性的双mAb夹心ELISA法,为研制可用于检测HIV1p24抗原的试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 HIV-1 p24 单克隆抗体 ELISA
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HIV-p24抗原的电化学免疫传感器研究 被引量：4
9
作者 干宁 李天华 +2 位作者 陈妮 葛从辛 徐伟民 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期269-272,共4页
制备了一种基于巯基丁二胺铜（Ⅱ）（CuL）的自组装修饰传感器，用于人血清中HIV-p24水平免疫分析。其主要参数为：电极表面直径2mm、高2cm，CuL覆盖率为1．02×10^-11 mol/cm^2，检测用血量〈10mL，检测速度〈10S。其电化学行为表... 制备了一种基于巯基丁二胺铜（Ⅱ）（CuL）的自组装修饰传感器，用于人血清中HIV-p24水平免疫分析。其主要参数为：电极表面直径2mm、高2cm，CuL覆盖率为1．02×10^-11 mol/cm^2，检测用血量〈10mL，检测速度〈10S。其电化学行为表现出表面控制过程。结合电化学酶联免疫分析法，在含有1．0mmol/L H2O2的pH：6．2磷酸盐缓冲溶液中，获得HIV-p24的测定校正曲线为0．5-200ng/mL，检测限为0．2ng/mL。该传感器准确性、精确性和制备重复性良好。测定10ng/mL HIV-p24时的变异系数为3．5％。该方法避免了常规电化学免疫测定中电子媒介体的加入，简化了分析步骤，缩短了分析时间。对艾滋病的诊断和检测具有一定价值。该研究的新颖性，已为宁波市科学技术情报研究所2006年9月20日出具的第20063360800348号《科技查新报告》所证实，属未见文献报道。 展开更多
关键词 伏安法 自组装 巯基丁二胺铜 HIV-p24 免疫传感器
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应用梭状芽孢杆菌口服疫苗载体表达HIV p24蛋白的研究 被引量：3
10
作者 石英 周育森 +5 位作者 郭彦 肖文君 于虹 吴昊 陈月 PhalguniGupta 《科学技术与工程》 2007年第17期4265-4270,4276,共7页
应用一种不产毒的梭状芽孢杆菌(Clostridium perfringens,C.P.)作为口服疫苗载体表达HIVp24蛋白。用PCR扩增HIVp24基因,酶切后插入到含有C.P.序列的pJRC200质粒的CPEORF中,将重组的cp24质粒转化无致病作用的ATCC3624菌株。使HIVp24基因... 应用一种不产毒的梭状芽孢杆菌(Clostridium perfringens,C.P.)作为口服疫苗载体表达HIVp24蛋白。用PCR扩增HIVp24基因,酶切后插入到含有C.P.序列的pJRC200质粒的CPEORF中,将重组的cp24质粒转化无致病作用的ATCC3624菌株。使HIVp24基因在C.P.形成芽孢时大量表达。结果应用SDS_PAGE和West Blot分析HIVp24在重组C.P.繁殖体和芽孢中的表达情况,发现HIVp24蛋白在C.P.芽孢体中大量表达,而在C.P.繁殖体中却没有表达。证明在体外构建了含有HIVp24基因的重组pJRC200质粒,成功地表达了HIVp24蛋白并得到了HIVp24的高表达ATCC3624菌株。为成功研究C.P.作为一种口服HIV疫苗载体奠定了基础。 展开更多
关键词 CLOSTRIDIUM perfringens HIV p24 OPE 口服疫苗
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采用抗体包被金磁纳米微粒修饰电极的HIV p24/gp36安培联检芯片 被引量：4
11
作者 干宁 李榕生 +2 位作者 陈亚东 杨欣 李天华 《西安交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第7期115-119,共5页
研制了以聚碳酸酯为基底的双通道安培检测微流控免疫芯片,在其中分别集成了修饰有HIV核心抗原p24/gp36的单克隆一级抗体的纳米金修饰电极,并应用于人血清中p24和gp36抗原的同时分析.检测原理是：基于夹心免疫分析法,在电压驱动下,一次... 研制了以聚碳酸酯为基底的双通道安培检测微流控免疫芯片,在其中分别集成了修饰有HIV核心抗原p24/gp36的单克隆一级抗体的纳米金修饰电极,并应用于人血清中p24和gp36抗原的同时分析.检测原理是：基于夹心免疫分析法,在电压驱动下,一次性加入含有p24和gp36样品及HRP酶标记的p24和gp36二级抗体溶液,与电极表面的一级抗体生成夹心免疫复合物;接着在体系中加入H2O2,以方波溶出伏安法检测免疫复合物上HRP催化H2O2的还原电流.在pH为6.2的磷酸缓冲液中,对HIV p24和gp36的检测时间均少于2 min,线性范围为0.5-400μg/L,检测限为0.25μg/L.该芯片集成了加样、分离和检测系统,检测时间短,灵敏度明显高于传统的酶联免疫吸附分析法,可应用于对艾滋病的早期诊断和大范围筛查. 展开更多
关键词 金磁纳米修饰电极 方波溶出伏安法 微流控芯片 HIVp24 HIVgp36
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适于HIV-1 p24抗原检测试剂的单抗制备与筛选 被引量：1
12
作者 郭永利 陈毅歆 +5 位作者 黄德党 罗海峰 葛胜祥 程通 张军 夏宁邵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期527-531,共5页
目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双... 目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1p24抗原检测试剂。结果成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合“16G12+2F2b-HRP”,该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性。结论本研究初步成功地建立了HIV-1p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 HIV-1 p24蛋白 单克隆抗体 夹心ELISA
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流式细胞术检测CD4^+ T细胞内p24抗原辅助诊断HIV-1的感染 被引量：1
13
作者 高凯 罗碧莲 +3 位作者 李燕 徐慧芳 韩志刚 梁彩云 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期426-429,共4页
目的探讨流式细胞术(FCM)检测CD4+T淋巴细胞内p24抗原对人免疫缺陷病毒1(HIV-1)感染的辅助诊断价值。方法通过FCM检测HIV-1感染者和正常人(阴性对照)CD4+T淋巴细胞内HIV-1 p24抗原,建立方法。收集HIV-1早期感染者样本,用FCM检测CD4+T淋... 目的探讨流式细胞术(FCM)检测CD4+T淋巴细胞内p24抗原对人免疫缺陷病毒1(HIV-1)感染的辅助诊断价值。方法通过FCM检测HIV-1感染者和正常人(阴性对照)CD4+T淋巴细胞内HIV-1 p24抗原,建立方法。收集HIV-1早期感染者样本,用FCM检测CD4+T淋巴细胞内p24抗原,ELISA检测血浆p24抗原以及nest-PCR检测核酸,比较3种方法的检测结果。结果感染者p24+CD4+T淋巴细胞比例明显高于相应阴性对照(P<0.01);感染者组p24+CD4+T淋巴细胞比例95%百分位数为1.92%,确立阴阳界值为2.00%。CD4+T淋巴细胞计数≤350个/μL的感染者p24+CD4+T淋巴细胞比例明显高于相应CD4+T淋巴细胞计数>350个/μL的感染者(P<0.05)。FCM检测HIV-1早期感染者CD4+T淋巴细胞内p24抗原结果显示,该方法的检验效能优于ELISA检测血浆p24抗原,和核酸检测相当。结论 FCM检测CD4+T淋巴细胞内p24抗原能及时发现HIV-1早期感染,在HIV-1感染的辅助诊断方面有一定的应用价值。 展开更多
关键词 流式细胞术 HIV p24抗原 CD4+T淋巴细胞
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人免疫缺陷病毒I型 p24gag 基因的重组与表达 被引量：1
14
作者 金宁一 郭军庆 +5 位作者 王秀清 田梅 李体远 王宏伟 尹凤阁 殷震 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第6期47-51,共5页
将编码人Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）衣壳蛋白的ｐ２４ｇａｇ基因片段，克隆到原核表达载体ｐＥＴ－１７ｂ的Ｔ７噬菌体启动子下游，构建成了重组表达质粒ｐＥＴ２４，并使ｐ２４ｇａｇ基因片段在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中高效... 将编码人Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）衣壳蛋白的ｐ２４ｇａｇ基因片段，克隆到原核表达载体ｐＥＴ－１７ｂ的Ｔ７噬菌体启动子下游，构建成了重组表达质粒ｐＥＴ２４，并使ｐ２４ｇａｇ基因片段在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中高效表达，产物为３０ｋＤａ的ｓ１９－ｐ２４融合蛋白，表达量占菌体总蛋白的３８．４％。重组ｐ２４蛋白均与抗ｐ２４单克隆抗体及ＨＩＶ－１阳性血清发生特异性反应，具有较好的抗原性。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒 Ⅰ型 p24蛋白 基因重组
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博尔纳病病毒p24重组蛋白的表达与初步鉴定 被引量：2
15
作者 杨爱英 张凤民 +1 位作者 郭彩玲 谷鸿喜 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期62-63,共2页
博尔纳病病毒 (BornaDiseaseVirus,BDV)是一种嗜神经病毒。研究表明 ,BDV不仅可以引起马、羊等家畜的自然感染 ,从啮齿类动物到人以外的灵长类动物均易受到BDV的实验性感染 ,而且BDV感染还可能与人类的某些精神神经疾病的发生相关。本... 博尔纳病病毒 (BornaDiseaseVirus,BDV)是一种嗜神经病毒。研究表明 ,BDV不仅可以引起马、羊等家畜的自然感染 ,从啮齿类动物到人以外的灵长类动物均易受到BDV的实验性感染 ,而且BDV感染还可能与人类的某些精神神经疾病的发生相关。本研究对含有BDV p2 4重组质粒PGEX 3X的大肠杆菌表达系统进行了优化表达BDV p2 4蛋白 ,在IPTG 2mmol/L、3h表达量最大 ,同时用BDV p2 4单克隆抗体证实了其特异性。从而为建立检测待检血清中BDV p2 展开更多
关键词 博尔纳病毒 BDV-p24蛋白 WESTERN-BLOT 表达 鉴定 血清抗体 家畜人
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HIVp24抗原的检测及意义 被引量：3
16
作者 郑永唐 汪剑平 刘广杰 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第3期83-86,共4页
关键词 艾滋病 HIV p24抗原 诊断
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弓形虫P24基因敲除转染质粒pGB/P5-P3的构建 被引量：1
17
作者 舒衡平 蒋立平 +1 位作者 吴翔 罗树红 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第11期926-929,共4页
目的构建弓形虫P24(TgP24)基因敲除转染质粒pGB/P5P3(GRA2/BleP245’UTRP243,UTR),为TgP24基因敲除奠定基础。方法根据TgP24基因序列,设计并合成两对特异引物(P1toP4),采用PCR技术特异扩增TgP24基因的5,端非翻译区2.5kb片段(P245’UTR)... 目的构建弓形虫P24(TgP24)基因敲除转染质粒pGB/P5P3(GRA2/BleP245’UTRP243,UTR),为TgP24基因敲除奠定基础。方法根据TgP24基因序列,设计并合成两对特异引物(P1toP4),采用PCR技术特异扩增TgP24基因的5,端非翻译区2.5kb片段(P245’UTR)和3’端非翻译区2.89kb片段(P243’UTR),将其分别亚克隆入pCR2.1TOPOTA载体,构建质粒P245’UTR/TA和P243’UTR/TA;重组质粒P245’UTR/TA经KpnⅠ和BglⅡ双酶切后,再将纯化的P245’UTR片段亚克隆入转染质粒GRA2/Ble的KpnⅠ和BglⅡ位点,构建重组质粒pGBP5(GRA2/BleP245’UTR);重组质粒P243’UTR/TA经BamHⅠ和NotⅠ双酶切后,纯化P243’UTR片段,再将其定向克隆到重组质粒pGBP5的BamHⅠ和NotⅠ位点,从而构建弓形虫TgP24基因敲除转染质粒pGB/P5P3。重组质粒经DNA序列测定证实目的片段插入正确。结果经过PCR筛选、限制性酶切及DNA测序鉴定,证实P245’UTR和P243’UTR两片段正确插入质粒GRA2/Ble的KpnⅠ和BglⅡ及BamHⅠ和NotⅠ位点,位于药物选择ble基因的上,下游。结论成功构建弓形虫P24基因敲除转染质粒pGB/P5P3。 展开更多
关键词 弓形虫 p24 基因敲除 转染质粒 pGB/P5-P3 构建
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HIV-1gag基因p24编码区的变异性分析 被引量：1
18
作者 尹春煜 卢洪洲 +5 位作者 蒋卫民 胡越凯 赵清霞 何云 潘孝彰 翁心华 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第4期371-374,共4页
目的　了解我国HIV感染者p2 4蛋白编码区的基因变异情况。 方法　收集我国河南及上海地区 2 8份已经证实的HIV - 1感染患者的血浆标本并抽提出RNA ;采用逆转录和Nested PCR的方法扩增所需的目的基因 ,使用DNA测序仪直接测序 ;应用CLUST... 目的　了解我国HIV感染者p2 4蛋白编码区的基因变异情况。 方法　收集我国河南及上海地区 2 8份已经证实的HIV - 1感染患者的血浆标本并抽提出RNA ;采用逆转录和Nested PCR的方法扩增所需的目的基因 ,使用DNA测序仪直接测序 ;应用CLUSTALW、PHYLIP等软件包对序列进行比对及进化树分析。结果　2 8份gag样本中 2 5份为B亚型 ,3份为A亚型。与共享序列相比 ,2 5例B亚型的 p2 4编码区中发生核苷酸改变的位点比例为 0 .4 %～ 4 .8% ,平均为 1.4 % ,其中A→G占 2 0 .5 % ,G→A占 17.3% ;3例A亚型发生核苷酸改变的位点比例平均为 0 .2 4 %。在所有变异位点中均未发现G→A的高度突变。B亚型和A亚型内的基因离散率平均为 2 .9%和 0 .5 8% ,A亚型与B亚型之间的基因离散率平均为 11.1%。 2 5例B亚型根据基因序列所推测的p2 4蛋白发生氨基酸改变的比例为 0 .4 %～ 5 .2 % ,平均为 2 .2 %。进化树分析表明在我国河南地区HIV感染B亚型多为与泰国株相近的B’亚型。结论　HIV 1p2 4编码区仍相对保守 。 展开更多
关键词 HIV-1gag基因 p24编码区 变异 序列 HIV感染
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HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的比较 被引量：3
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作者 金光 王卫 +3 位作者 丛喆 蒋虹 陈霆 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 2011年第2期26-30,共5页
目的由于检测SIV p27抗原试剂盒来源困难,有时不稳定,鉴于HIV-1 p24与SIVp27有较强的交叉抗原,本研究比较HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原得出的结果是否存在一定的相关性。方法 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒... 目的由于检测SIV p27抗原试剂盒来源困难,有时不稳定,鉴于HIV-1 p24与SIVp27有较强的交叉抗原,本研究比较HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原得出的结果是否存在一定的相关性。方法 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒定性和定量检测样品中SIV p27抗原,并对检测结果进行回归和相关分析。结果 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的灵敏度分别是150 pg/mL和62.5 pg/mL。两种试剂盒检测病毒液和血浆中SIV p27抗原的定性结果一致。定量结果的统计分析得出病毒液的直线回归决定系数R2=0.857,直线相关系数r=0.926,P<0.01,直线正相关程度较高;血浆的直线回归决定系数R2=0.512,直线相关系数r=0.716,P<0.05,直线正相关程度较低。结论 HIV-1 p24 ELISA试剂盒能够替代SIVp27 ELISA试剂盒定性检测病毒液和血浆中SIV p27抗原,但只能定量检测病毒液中SIV p27抗原。 展开更多
关键词 HIV-1p24 SIVp27
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基于纳米金组合电极的HIV p24微流控安培免疫传感芯片研究 被引量：2
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作者 陈亚东 李榕生 +2 位作者 干宁 杨欣 李天华 《传感技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期165-170,共6页
研制了以聚碳酸酯(PC)为基底,以表面修饰了人免疫缺陷病毒(HIV)核心抗原p24单克隆一级抗体(Rp24I)的纳米金组合电极(GNEE)为工作电极的微流控安培免疫传感芯片,并应用于p24抗原(简称p24)实时分析。检测原理是基于夹心免疫分析法,在电压... 研制了以聚碳酸酯(PC)为基底,以表面修饰了人免疫缺陷病毒(HIV)核心抗原p24单克隆一级抗体(Rp24I)的纳米金组合电极(GNEE)为工作电极的微流控安培免疫传感芯片,并应用于p24抗原(简称p24)实时分析。检测原理是基于夹心免疫分析法,在电压驱动和流动条件下,一次性加入p24样品和纳米金胶标记的p24二级抗体(Rp24Ⅱ-Au,金胶直径为50～100nm)溶液,利用不同物质因受电场影响而在微管道中的迁移速率不同,使得p24抗原和Rp24Ⅱ-Au依次到达GNEE电极,与其表面的Rp24I生成三明治型免疫复合物(Rp24I/p24/Rp24Ⅱ-Au)。接着以方波溶出伏安法(SWSV)将复合物上的金胶粒子溶出,由于溶出电流大小与被测定p24呈正比关系,从而获得p24的测定校正曲线。在pH6.2的磷酸缓冲液(PBS)中p24检测时间小于2min,线性范围为1～500ng/L(R2=0.9975),检测限为0.25ng/L。该芯片集成了加样、分离和检测系统,简化了分析步骤,缩短了检测时间,灵敏度达1μA.ng-1.mL,明显高于传统酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对艾滋病的早期诊断和大范围筛查具有应用价值。 展开更多
关键词 纳米金组合电极 方波溶出伏安法 微流控 HIV-p24 安培免疫传感芯片
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