目的:探讨血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]对大鼠尿毒症高转性骨病的影响,并阐明其可能的机制。方法:30只SD大鼠随机分为假手术组(n=6)和实验组(n=24),实验组大鼠采用5/6肾切除术(Platt法)+高磷(P)饮食[1.2%P,1.0%钙(Ca)]制备尿毒症高转化骨...目的:探讨血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]对大鼠尿毒症高转性骨病的影响,并阐明其可能的机制。方法:30只SD大鼠随机分为假手术组(n=6)和实验组(n=24),实验组大鼠采用5/6肾切除术(Platt法)+高磷(P)饮食[1.2%P,1.0%钙(Ca)]制备尿毒症高转化骨病模型,并将建模成功的大鼠随机分为模型组、Ang(1-7)组、血管紧张素转换酶2(ACE2)激活剂二乙酰胺三氮脒(DIZE)组(DIZE组)和Mas受体拮抗剂组(A779组),每组6只。分别于手术后12和18周采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清Ca、P、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白(UP)水平;免疫化学荧光法测定各组大鼠全段甲状旁腺素(iPTH)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清骨钙素(OC)、Ⅰ型胶原N端肽(NTX)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)-5b水平;高分辨率显微CT扫描检测各组大鼠股骨组织的骨密度(BMD)、组织骨密度(TMD)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁分离度(Tb.Sp)等三维结构参数。Von Kossa染色和吉姆萨染色观察各组大鼠皮质骨及骨小梁病理形态表现,计算骨小梁体积(TBV);荧光显微镜下测定各组大鼠骨矿化率(MAR),并计算成骨细胞指数(OBI)和破骨细胞指数(OCI)。结果:术后12和18周,与假手术组比较,模型组、Ang(1-7)组、DIZE组和A779组大鼠体质量减小(P<0.05);术后12和18周,与假手术组比较,模型组、Ang(1-7)组、DIZE组和A779组大鼠血清中24 h UP、Scr及BUN水平均升高(P<0.05);术后18周,与模型组比较,Ang(1-7)组和DIZE组大鼠血清中24 h UP及Scr水平均降低(P<0.05),A779组大鼠血清中24 h UP、Scr和BUN水平均升高(P<0.05)。证实尿毒症高转化骨病大鼠模型构建成功。术后12和18周,与假手术组比较,模型组、Ang(1-7)组、DIZE组和A779组大鼠血清中iPTH、P、OC、NTX及TRAP-5b水平均升高(P<0.05);术后18周,与模型组比较,Ang(1-7)组和DIZE组大鼠血清中NTX及TRAP-5b水平均降低(P<0.05),A779组大鼠血清中iPTH、P、NTX和TRAP-5b水平均升高(P<0.05)。高分辨率显微CT扫描检测,与假手术组比较,模型组、Ang(1-7)组、DIZE组和A779组大鼠股骨BMD及TMD均降低(P<0.05);与模型组比较,Ang(1-7)组和DIZE组大鼠股骨BMD及TMD均升高(P<0.05),A779组大鼠股骨BMD和TMD均降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠股骨Tb.Th降低(P<0.05),Tb.Sp升高(P<0.05);Ang(1-7)组和DIZE组大鼠股骨Tb.Th升高(P<0.05),而Tb.Sp降低(P<0.05);与模型组比较,A779组大鼠股骨Tb.Th降低(P<0.05),而Tb.Sp升高(P<0.05)。骨病理检查,与假手术组比较,模型组、Ang(1-7)组、DIZE组和A779组大鼠股骨TBV均降低(P<0.05),MAR、OBI和OCI均升高(P<0.05);与模型组比较,Ang(1-7)组和DIZE组大鼠股骨OBI及OCI均降低(P<0.05),TBV升高(P<0.05),而A779组大鼠股骨OBI和OCI均升高(P<0.05),TBV降低(P<0.05)。结论:ACE2/Ang(1-7)/Mas轴对尿毒症大鼠高转化骨病具有改善作用。展开更多
目的探究温肾益髓汤(Wen Shen Yi Sui Decoction,WSYSD)含药血清对RANKL诱导的破骨细胞(osteoclast,OC)分化的影响及作用机制。方法采用不同质量分数的WSYSD含药血清干预骨髓单核细胞,通过CCK-8法筛选无细胞毒性的含药血清进行后续实验...目的探究温肾益髓汤(Wen Shen Yi Sui Decoction,WSYSD)含药血清对RANKL诱导的破骨细胞(osteoclast,OC)分化的影响及作用机制。方法采用不同质量分数的WSYSD含药血清干预骨髓单核细胞,通过CCK-8法筛选无细胞毒性的含药血清进行后续实验。设置对照组、RANKL诱导组、RANKL+不同质量分数的WSYSD含药血清组。各组进行相应干预后,运用TRAP染色和甲苯胺蓝染色观察OC及骨陷窝形成;RT-qPCR和Western blot检测TRAP、c-FOS和CTR mRNA及蛋白表达;Western blot检测MAPK通路中ERK、JNK和p38蛋白磷酸化水平。结果与对照组相比,质量分数为5%、10%和15%的WSYSD含药血清未降低细胞存活率(P>0.05)。与RANKL诱导组相比,WSYSD含药血清组(5%、10%和15%)抑制了OC分化和骨陷窝形成,并降低TRAP、c-FOS和CTR mRNA表达,作用效果呈质量分数依赖性,以15%最佳(P均<0.01)。与RANKL诱导组相比,WSYSD含药血清组(15%)抑制TRAP、c-FOS和CTR蛋白表达,作用效果呈时间依赖性,以第5天最明显(P<0.01)。此外,与RANKL诱导组相比,WSYSD含药血清组(15%)抑制MAPK通路中ERK、JNK和p38蛋白磷酸化,作用效果也呈时间依赖性,以第60分钟最明显(P<0.01)。结论WSYSD含药血清可抑制RANKL诱导的OC分化,作用机制可能与抑制MAPK通路的激活有关。展开更多
文摘目的:探讨血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]对大鼠尿毒症高转性骨病的影响,并阐明其可能的机制。方法:30只SD大鼠随机分为假手术组(n=6)和实验组(n=24),实验组大鼠采用5/6肾切除术(Platt法)+高磷(P)饮食[1.2%P,1.0%钙(Ca)]制备尿毒症高转化骨病模型,并将建模成功的大鼠随机分为模型组、Ang(1-7)组、血管紧张素转换酶2(ACE2)激活剂二乙酰胺三氮脒(DIZE)组(DIZE组)和Mas受体拮抗剂组(A779组),每组6只。分别于手术后12和18周采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清Ca、P、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白(UP)水平;免疫化学荧光法测定各组大鼠全段甲状旁腺素(iPTH)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清骨钙素(OC)、Ⅰ型胶原N端肽(NTX)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)-5b水平;高分辨率显微CT扫描检测各组大鼠股骨组织的骨密度(BMD)、组织骨密度(TMD)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁分离度(Tb.Sp)等三维结构参数。Von Kossa染色和吉姆萨染色观察各组大鼠皮质骨及骨小梁病理形态表现,计算骨小梁体积(TBV);荧光显微镜下测定各组大鼠骨矿化率(MAR),并计算成骨细胞指数(OBI)和破骨细胞指数(OCI)。结果:术后12和18周,与假手术组比较,模型组、Ang(1-7)组、DIZE组和A779组大鼠体质量减小(P<0.05);术后12和18周,与假手术组比较,模型组、Ang(1-7)组、DIZE组和A779组大鼠血清中24 h UP、Scr及BUN水平均升高(P<0.05);术后18周,与模型组比较,Ang(1-7)组和DIZE组大鼠血清中24 h UP及Scr水平均降低(P<0.05),A779组大鼠血清中24 h UP、Scr和BUN水平均升高(P<0.05)。证实尿毒症高转化骨病大鼠模型构建成功。术后12和18周,与假手术组比较,模型组、Ang(1-7)组、DIZE组和A779组大鼠血清中iPTH、P、OC、NTX及TRAP-5b水平均升高(P<0.05);术后18周,与模型组比较,Ang(1-7)组和DIZE组大鼠血清中NTX及TRAP-5b水平均降低(P<0.05),A779组大鼠血清中iPTH、P、NTX和TRAP-5b水平均升高(P<0.05)。高分辨率显微CT扫描检测,与假手术组比较,模型组、Ang(1-7)组、DIZE组和A779组大鼠股骨BMD及TMD均降低(P<0.05);与模型组比较,Ang(1-7)组和DIZE组大鼠股骨BMD及TMD均升高(P<0.05),A779组大鼠股骨BMD和TMD均降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠股骨Tb.Th降低(P<0.05),Tb.Sp升高(P<0.05);Ang(1-7)组和DIZE组大鼠股骨Tb.Th升高(P<0.05),而Tb.Sp降低(P<0.05);与模型组比较,A779组大鼠股骨Tb.Th降低(P<0.05),而Tb.Sp升高(P<0.05)。骨病理检查,与假手术组比较,模型组、Ang(1-7)组、DIZE组和A779组大鼠股骨TBV均降低(P<0.05),MAR、OBI和OCI均升高(P<0.05);与模型组比较,Ang(1-7)组和DIZE组大鼠股骨OBI及OCI均降低(P<0.05),TBV升高(P<0.05),而A779组大鼠股骨OBI和OCI均升高(P<0.05),TBV降低(P<0.05)。结论:ACE2/Ang(1-7)/Mas轴对尿毒症大鼠高转化骨病具有改善作用。
文摘目的探究温肾益髓汤(Wen Shen Yi Sui Decoction,WSYSD)含药血清对RANKL诱导的破骨细胞(osteoclast,OC)分化的影响及作用机制。方法采用不同质量分数的WSYSD含药血清干预骨髓单核细胞,通过CCK-8法筛选无细胞毒性的含药血清进行后续实验。设置对照组、RANKL诱导组、RANKL+不同质量分数的WSYSD含药血清组。各组进行相应干预后,运用TRAP染色和甲苯胺蓝染色观察OC及骨陷窝形成;RT-qPCR和Western blot检测TRAP、c-FOS和CTR mRNA及蛋白表达;Western blot检测MAPK通路中ERK、JNK和p38蛋白磷酸化水平。结果与对照组相比,质量分数为5%、10%和15%的WSYSD含药血清未降低细胞存活率(P>0.05)。与RANKL诱导组相比,WSYSD含药血清组(5%、10%和15%)抑制了OC分化和骨陷窝形成,并降低TRAP、c-FOS和CTR mRNA表达,作用效果呈质量分数依赖性,以15%最佳(P均<0.01)。与RANKL诱导组相比,WSYSD含药血清组(15%)抑制TRAP、c-FOS和CTR蛋白表达,作用效果呈时间依赖性,以第5天最明显(P<0.01)。此外,与RANKL诱导组相比,WSYSD含药血清组(15%)抑制MAPK通路中ERK、JNK和p38蛋白磷酸化,作用效果也呈时间依赖性,以第60分钟最明显(P<0.01)。结论WSYSD含药血清可抑制RANKL诱导的OC分化,作用机制可能与抑制MAPK通路的激活有关。
