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Nrf2过表达与敲减Hep1-6稳转细胞株的建立被引量：1: 1; 作者周飞飞杨南飞 +2 位作者余文张冬梅丰秀静《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1251-1255,共5页; 核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)是治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的一个重要靶点分子。为了从体外研究小分子通过靶向Nrf2改善NAFLD的分子机制,首先PCR克隆鼠源Nrf2基因至p Lenti6/V5-D-TOPO空载体得到重组载体p Lenti6/V5-Nrf2,通过测序、... 展开更多; 关键词核因子NF-E2相关因子2(nrf2) Hep1-6细胞 nrf2过表达稳转株 nrf2敲减稳转株 Westernblotting 定量PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

基因干预MST2的施万细胞稳转株建立及其在线粒体膜电位检测的应用: 2; 作者黄贝旭刘昶 +1 位作者梁嫩廖松洁《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期102-109,共8页; 目的构建稳定敲低及过表达哺乳动物Ste20样激酶2(mammalian ste20-like kinase 2, MST2)的大鼠施万细胞株,并初步探讨MST2对线粒体膜电位的调控作用。方法大鼠施万细胞株(RSC96)分为正常对照组(对照组)、氧糖剥夺(oxygen and glucose d... 展开更多; 关键词 MST2 施万细胞稳转株氧糖剥夺线粒体膜电位; 在线阅读下载PDF 职称材料

小鼠PKM1基因慢病毒过表达载体的构建和稳定转染C2C12细胞株的筛选及其对糖酵解的影响: 3; 作者姜声旺沈清武《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第10期75-81,88,共8页; 本研究旨在构建含小鼠PKM1基因的慢病毒过表达载体,筛选稳定过表达PKM1的C2C12细胞株,初步检测PKM1对细胞糖酵解的影响。提取小鼠背最长肌总RNA并反转录合成cDNA。用"Golden Gate"法构建带FLAG标签的PKM1表达载体并转染293T细... 展开更多; 关键词丙酮酸激酶慢病毒过表达载体稳转株糖酵解; 在线阅读下载PDF 职称材料

口腔鳞状细胞癌稳定过表达蛋白酶体激活因子PA28γ细胞株的构建被引量：1: 4; 作者辛川王冏珂 +1 位作者李敬曾昕《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期6-10,共5页; 目的构建蛋白酶体激活因子PA28γ过表达的口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞稳转株,并验证其过表达PA28γ的效率。方法首先采用聚合酶链反应(PCR)克隆PA28γ基因至pLOV.CMV.cherry.2A.EF1a.PuroR慢病毒载体中,采用PCR和DNA测序比对分析进行鉴定... 展开更多; 关键词口腔鳞状细胞癌 PA28γ 慢病毒过表达载体过表达稳转株; 在线阅读下载PDF 职称材料

PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用被引量：4: 5; 作者杨川程桦 +3 位作者王川严励黎锋魏菁《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期409-412,共4页; 【目的】探讨PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用。【方法】将C2C12细胞分别经过不同浓度的类胰高血糖素(GLP-1)诱导120h后,瞬间转染胰腺十二指肠同源框(PDX-1)基因,用RT-PCR检测PDX-1的表达,流式细胞仪、放射免疫法检... 展开更多; 关键词胰岛素分泌细胞 PDX-1 成肌细胞株分化 C2C12细胞 GLP-1 RT-PCR检测胰腺十二指肠胰高血糖素流式细胞仪免疫法检测胰岛素含量 mol/L 胰岛素浓度分泌胰岛素不同浓度细胞表达瞬时转染培养基阳性率同源框细胞内; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Nrf2过表达与敲减Hep1-6稳转细胞株的建立被引量：1: 1; 作者周飞飞杨南飞余文张冬梅丰秀静; 机构南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室; 出处《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1251-1255,共5页; 基金国家自然科学基金项目(81503082); 文摘核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)是治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的一个重要靶点分子。为了从体外研究小分子通过靶向Nrf2改善NAFLD的分子机制,首先PCR克隆鼠源Nrf2基因至p Lenti6/V5-D-TOPO空载体得到重组载体p Lenti6/V5-Nrf2,通过测序、酶切鉴定正确后,扩繁质粒,制备慢病毒并将其感染Hep1-6肝癌细胞,用稻瘟醇胚素筛选、鉴定获得稳定表达Nrf2的细胞株。同时,用Nrf2干扰质粒构建慢病毒感染Hep1-6肝癌细胞,通过嘌呤霉素筛选、鉴定Nrf2敲减的细胞株。Q-PCR检测结果显示,过表达稳转株(p Lenti6/V5-Nrf2)中Nrf2基因的表达量为对照组(p Lenti6/V5-Lac Z)的4倍,敲减稳转株中Nrf2基因的表达量大幅度降低。Western blotting显示过表达稳转株的Nrf2表达量明显高于对照组,敲减稳转株的Nrf2表达量明显低于对照稳转株,此结果与Q-PCR结果一致。所克隆的Nrf2基因和敲减基因在Hep1-6小鼠肝癌细胞中得到了正确转录和翻译,稳转细胞株构建成功。; 关键词核因子NF-E2相关因子2(nrf2) Hep1-6细胞 nrf2过表达稳转株 nrf2敲减稳转株 Westernblotting 定量PCR; Keywords nuclear factor NF-E2 related factor 2（nrf2） Hep1 -6 cell N rf2 over expression cell line N rf2knock down cell line Western blotting qPCR; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基因干预MST2的施万细胞稳转株建立及其在线粒体膜电位检测的应用: 2; 作者黄贝旭刘昶梁嫩廖松洁; 机构中山大学附属第一医院神经科; 出处《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期102-109,共8页; 基金国家自然科学基金面上项目(编号:82071366) 广州市临床特色技术项目(编号:2023P-TS21) +3 种基金广东省神经系统重大疾病诊治工程技术研究中心、广东省神经系统重大疾病诊治转化医学创新平台和广州市神经系统重大疾病临床医学研究与转化中心项目资助。; 文摘目的构建稳定敲低及过表达哺乳动物Ste20样激酶2(mammalian ste20-like kinase 2, MST2)的大鼠施万细胞株,并初步探讨MST2对线粒体膜电位的调控作用。方法大鼠施万细胞株(RSC96)分为正常对照组(对照组)、氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation, OGD)模型组、MST2敲低对照组、MST2敲低组、MST2过表达对照组、MST2过表达组。逆转录PCR法扩增大鼠Mst2基因全长序列,构建过表达Mst2基因的慢病毒表达载体重组质粒并鉴定。使用第二代慢病毒包装系统获取Mst2基因敲低及过表达的慢病毒毒液,并分别感染RSC96细胞株,建立基因干预MST2的稳转株。实时荧光定量PCR结合western blot检测基因干预效率,光镜结合S100荧光染色观察稳转株形态学变化。使用OGD模型处理细胞,以线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位水平(mitochondrial membrane potential, MMP)。结果经测序分析,成功构建Mst2慢病毒表达载体重组质粒。施万细胞稳转株具有施万细胞的形态特征,并且表达施万细胞特异性标志物S100。在慢病毒感染的施万细胞,MST2表达在mRNA及蛋白水平上均较对照组有稳定且显著的差异,敲低效率超过90%,过表达约为对照组的40倍。稳转株在OGD模型中,对于MST2蛋白的基因干预仍然维持稳定。OGD可显著增加MST2蛋白表达,并降低施万细胞MMP,提示线粒体功能受损;而敲低MST2则显著改善MMP。结论本研究成功构建了稳定敲低及过表达MST2的大鼠施万细胞株,并且在OGD模型中,敲低MST2可改善线粒体膜电位,提示其对线粒体具有保护作用。; 关键词 MST2 施万细胞稳转株氧糖剥夺线粒体膜电位; Keywords MST2 Schwann cells Stable cell lines Oxygen and glucose deprivation Mitochondrial membrane potential; 分类号 R741.02 [医药卫生—神经病学与精神病学] R338 [医药卫生—人体生理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小鼠PKM1基因慢病毒过表达载体的构建和稳定转染C2C12细胞株的筛选及其对糖酵解的影响: 3; 作者姜声旺沈清武; 机构湖南农业大学动物科学技术学院湖南农业大学食品科学技术学院; 出处《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第10期75-81,88,共8页; 基金 “十三五”国家重点研发计划(2018YFD0500405) 国家自然科学基金(31571862)。; 文摘本研究旨在构建含小鼠PKM1基因的慢病毒过表达载体,筛选稳定过表达PKM1的C2C12细胞株,初步检测PKM1对细胞糖酵解的影响。提取小鼠背最长肌总RNA并反转录合成cDNA。用"Golden Gate"法构建带FLAG标签的PKM1表达载体并转染293T细胞,进行慢病毒包装并检测慢病毒滴度。转染C2C12细胞并优化转染条件,根据载体携带的抗性基因puro,用嘌呤霉素筛选稳转株。通过qPCR和Western Blot从转录水平和翻译水平检测目的基因的表达。通过测定细胞培养基的pH、乳酸含量以及葡萄消耗量检测PKM1对糖酵解的影响。结果表明小鼠PKM1基因慢病毒载体构建成功,慢病毒滴度为3.4×10^8 TU/mL。慢病毒侵染靶细胞的最佳感染复数为30,筛选稳转细胞株所用嘌呤霉素的最佳浓度为1.2μg/mL。显微镜下观察病毒转导效果良好,荧光率达80%以上。过表达组中FLAG-PKM1的mRNA表达量约是空载体组的9.4万倍。FLAG-PKM1融合蛋白成功在宿主细胞内表达。与野生型组和空载体组相比,过表达组细胞培养基的乳酸含量增加,葡萄糖消耗量增加,pH降低,表明细胞糖酵解加剧。本研究成功构建了含小鼠PKM1基因的稳转株,为深入研究PKM1翻译后修饰对其自身酶活以及细胞糖酵解的影响提供了材料。; 关键词丙酮酸激酶慢病毒过表达载体稳转株糖酵解; Keywords pyruvate kinase lentivirus overexpression vector stable cell strain glycolysis; 分类号 TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名口腔鳞状细胞癌稳定过表达蛋白酶体激活因子PA28γ细胞株的构建被引量：1: 4; 作者辛川王冏珂李敬曾昕; 机构口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院黏膜病科; 出处《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期6-10,共5页; 基金国家重点研发计划重点专科课题(2017YFC0840100,2017YFC0840107) 国家自然科学基金(81472533,81672675,281771081)~~; 文摘目的构建蛋白酶体激活因子PA28γ过表达的口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞稳转株,并验证其过表达PA28γ的效率。方法首先采用聚合酶链反应(PCR)克隆PA28γ基因至pLOV.CMV.cherry.2A.EF1a.PuroR慢病毒载体中,采用PCR和DNA测序比对分析进行鉴定;其次采用293T细胞包装病毒;然后采用病毒感染OSCC细胞构建PA28γ稳定过表达细胞株。最后利用免疫印迹技术检测OSCC细胞稳转株中PA28γ表达的水平。结果DNA测序结果显示成功构建PA28γ过表达慢病毒载体构建;荧光结果显示,PA28γ过表达慢病毒成功感染OSCC细胞,并呈现樱桃红色荧光;免疫印迹结果显示,构建的PA28γ稳定过表达细胞显著提高细胞中PA28γ表达水平。结论PA28γ过表达慢病毒载体能显著提高细胞中PA28γ蛋白表达水平,为进一步研究PA28γ对OSCC发生发展的影响及其机制提供了稳定的细胞转染载体。; 关键词口腔鳞状细胞癌 PA28γ 慢病毒过表达载体过表达稳转株; Keywords oral squamous cell carcinoma PA28γ lentivirus overexpression vector stable overexpression cell line; 分类号 R782 [医药卫生—口腔医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用被引量：4: 5; 作者杨川程桦王川严励黎锋魏菁; 机构中山大学附属第二医院内分泌科; 出处《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期409-412,共4页; 基金教育部博士学科点专项科研基金资助项目(20020558077) 中国博士后基金资助项目; 文摘【目的】探讨PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用。【方法】将C2C12细胞分别经过不同浓度的类胰高血糖素(GLP-1)诱导120h后,瞬间转染胰腺十二指肠同源框(PDX-1)基因,用RT-PCR检测PDX-1的表达,流式细胞仪、放射免疫法检测细胞内和培养基中是否存在胰岛素。【结果】GLP-1可以直接诱导C2C12细胞表达PDX-1;PDX-1瞬时转染C2C12细胞后,胰岛素分泌细胞阳性率比值(1.19±0.10)、培养基中的胰岛素含量(2.45±1.48)×10-6U/mL均明显升高(P<0.05);单独的40nmol/LGLP-1诱导与瞬间转染PDX-1相比,阳性率比值及胰岛素浓度的差别均无统计学意义。【结论】GLP-1可以诱导C2C12表达PDX-1,而且PDX-1可以促进C2C12分泌胰岛素。提示GLP-1诱导C2C12分化为胰岛素分泌细胞可能与PDX-1有关。; 关键词胰岛素分泌细胞 PDX-1 成肌细胞株分化 C2C12细胞 GLP-1 RT-PCR检测胰腺十二指肠胰高血糖素流式细胞仪免疫法检测胰岛素含量 mol/L 胰岛素浓度分泌胰岛素不同浓度细胞表达瞬时转染培养基阳性率同源框细胞内; Keywords myoblast insulin-secreting cells glucagon-like peptide-1 (GLP-1) pancreatic-duodenum homeobox-1 PDX-1; 分类号 R587.1 [医药卫生—内分泌] R363.27 [医药卫生—病理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	Nrf2过表达与敲减Hep1-6稳转细胞株的建立	周飞飞杨南飞余文张冬梅丰秀静	《江苏农业学报》 CSCD 北大核心	2016	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	基因干预MST2的施万细胞稳转株建立及其在线粒体膜电位检测的应用	黄贝旭刘昶梁嫩廖松洁	《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	小鼠PKM1基因慢病毒过表达载体的构建和稳定转染C2C12细胞株的筛选及其对糖酵解的影响	姜声旺沈清武	《食品工业科技》 CAS 北大核心	2020	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	口腔鳞状细胞癌稳定过表达蛋白酶体激活因子PA28γ细胞株的构建	辛川王冏珂李敬曾昕	《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2020	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用	杨川程桦王川严励黎锋魏菁	《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2005	4	在线阅读下载PDF 职称材料