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筛选的差异表达microRNAs对猪卵母细胞Npm2基因的表达调控及作用研究
被引量：
2
1
作者
李河林
蒋玉芬
+9 位作者
程娜
韩宇辰
霍晓颖
苏宏鼎
常悦
方玉珠
王配
贾宝瑜
魏红江
成文敏
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第11期5035-5049,共15页
旨在研究卵母细胞中筛选的差异表达microRNAs对Npm2(nucleoplasmin 2)基因的调控作用。本研究采集屠宰场卵巢,收集GV期卵母细胞进行体外成熟培养,收集MⅡ期卵母细胞。使用qPCR检测筛选的差异表达miRNAs在GV、MⅡ期卵母细胞的表达水平;...
旨在研究卵母细胞中筛选的差异表达microRNAs对Npm2(nucleoplasmin 2)基因的调控作用。本研究采集屠宰场卵巢,收集GV期卵母细胞进行体外成熟培养,收集MⅡ期卵母细胞。使用qPCR检测筛选的差异表达miRNAs在GV、MⅡ期卵母细胞的表达水平;双荧光素酶报告试验验证预测的miRNA是否与靶基因Npm2存在结合位点;在体外成熟培养液中添加miRNAs模拟物/抑制物,验证miRNA对卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎体外发育能力的影响。添加最适浓度的miRNAs模拟物/抑制物后,使用花生凝集素染色试验检测皮质颗粒分布和qPCR检测Npm2 mRNA表达水平。结果表明,MⅡ期卵母细胞中miR-150、miR-7138-5p表达显著高于GV期卵母细胞(P<0.05),miR-296-3p、miR-423-3p表达水平极显著低于GV期卵母细胞(P<0.01),表达趋势与测序结果一致。miR-32表达水平无显著差异(P>0.05)。双荧光素酶报告试验结果表明,miR-32、miR-7138-5p、miR-296-3p与Npm2存在结合位点,荧光强度极显著下调(P<0.01);miR-150与Npm2存在结合位点,荧光强度显著下调(P<0.05);miR-296-5p、miR-423-3p与Npm2不存在结合位点,荧光强度无显著变化(P>0.05)。通过在体外成熟培养液中添加不同浓度miRNAs模拟物/抑制物以确定最适浓度,添加miR-32抑制物、miR-296-5p模拟物、miR-296-5p抑制物、miR-423-3p模拟物、miR-423-3p抑制物、miR-7138抑制物、miR-150模拟物、miR-150抑制物后皮质颗粒荧光强度极显著下调(P<0.01);添加miR-296-3p抑制物、miR-7138-5p模拟物后皮质颗粒荧光强度显著下调(P<0.05)。MⅡ期卵母细胞Npm2 mRNA表达量极显著高于GV期卵母细胞,添加最适浓度miR-150、miR-296-3p、miR-296-5p、miR-7138-5p模拟物和/或抑制物Npm2 mRNA表达量与对照组有显著差异(P<0.05),添加miR-32、miR-423-3p模拟物/抑制物后MⅡ期卵母细胞Npm2 mRNA表达量与对照组无显著差异(P>0.05)。筛选的差异miRNA(如miR-296-3p、miR-7138-5p)可能通过调控Npm2表达影响卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育,可为猪卵母细胞microRNAs与靶基因复杂调控网络研究提供基础。
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关键词
猪
卵母细胞
MICRORNA
npm2
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职称材料
猪GV/MⅡ期卵母细胞miRNAs表达谱及Npm2基因相关miRNAs筛选
被引量：
2
2
作者
张珂
严继猛
+9 位作者
刘耀文
李鸿辉
陈强
李卓
苏艳华
普少瑕
王海臻
魏红江
贾宝瑜
成文敏
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期996-1009,共14页
旨在探索体外成熟前后猪卵母细胞miRNAs表达谱,并筛选参与调控Npm2基因表达的miRNAs。本试验回收屠宰场猪卵巢,收集GV期卵母细胞,经体外成熟培养后获得MⅡ期卵母细胞,分别提取约130个GV期和MⅡ期卵母细胞总RNA进行Illumina HiSeqTM 250...
旨在探索体外成熟前后猪卵母细胞miRNAs表达谱,并筛选参与调控Npm2基因表达的miRNAs。本试验回收屠宰场猪卵巢,收集GV期卵母细胞,经体外成熟培养后获得MⅡ期卵母细胞,分别提取约130个GV期和MⅡ期卵母细胞总RNA进行Illumina HiSeqTM 2500测序,获取miRNA测序数据,每个处理重复3次,筛选差异表达microRNAs并进行靶基因GO和KEGG聚类分析。结果表明,本研究成功构建了GV期和MⅡ期猪卵母细胞miRNAs表达谱,GV期和MⅡ期卵母细胞差异表达miRNAs有95个,具有相似表达模式的miRNA聚为一类,对95个差异表达miRNAs进行靶基因预测,共得到3 967个靶基因,经GO和KEGG富集分析表明,这些靶基因被富集于5 194个GO条目和212个信号通路,其中参与卵母细胞减数分裂成熟的信号通路有2个。在差异表达miRNAs中筛选到5个与Npm2基因相关的miRNAs。采用qRT-PCR对其中2个miRNAs进行验证,证实其表达趋势与测序结果一致。本研究筛选了GV期和MⅡ期卵母细胞差异表达miRNAs,推测差异表达的miRNAs可能通过代谢、卵母细胞减数分裂相关通路、孕激素介导的卵母细胞成熟通路等途径在卵母细胞体外成熟过程中发挥作用,并筛选出调控Npm2基因表达的miRNAs,研究结果可为进一步阐明miRNA对Npm2基因的调控及其在卵母细胞成熟过程中的作用提供依据。
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关键词
猪
卵母细胞
MIRNAS
npm2
基因
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职称材料
题名
筛选的差异表达microRNAs对猪卵母细胞Npm2基因的表达调控及作用研究
被引量：
2
1
作者
李河林
蒋玉芬
程娜
韩宇辰
霍晓颖
苏宏鼎
常悦
方玉珠
王配
贾宝瑜
魏红江
成文敏
机构
云南农业大学动物科学技术学院
云南农业大学动物医学院
云南省小型猪基因编辑与异种器官移植重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第11期5035-5049,共15页
基金
云南省“兴滇英才支持计划”青年人才项目(YNWR-QNBJ-2020-156)
云南省基础研究专项重点项目(202201AS070078)
国家自然科学基金地区项目(31660656)。
文摘
旨在研究卵母细胞中筛选的差异表达microRNAs对Npm2(nucleoplasmin 2)基因的调控作用。本研究采集屠宰场卵巢,收集GV期卵母细胞进行体外成熟培养,收集MⅡ期卵母细胞。使用qPCR检测筛选的差异表达miRNAs在GV、MⅡ期卵母细胞的表达水平;双荧光素酶报告试验验证预测的miRNA是否与靶基因Npm2存在结合位点;在体外成熟培养液中添加miRNAs模拟物/抑制物,验证miRNA对卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎体外发育能力的影响。添加最适浓度的miRNAs模拟物/抑制物后,使用花生凝集素染色试验检测皮质颗粒分布和qPCR检测Npm2 mRNA表达水平。结果表明,MⅡ期卵母细胞中miR-150、miR-7138-5p表达显著高于GV期卵母细胞(P<0.05),miR-296-3p、miR-423-3p表达水平极显著低于GV期卵母细胞(P<0.01),表达趋势与测序结果一致。miR-32表达水平无显著差异(P>0.05)。双荧光素酶报告试验结果表明,miR-32、miR-7138-5p、miR-296-3p与Npm2存在结合位点,荧光强度极显著下调(P<0.01);miR-150与Npm2存在结合位点,荧光强度显著下调(P<0.05);miR-296-5p、miR-423-3p与Npm2不存在结合位点,荧光强度无显著变化(P>0.05)。通过在体外成熟培养液中添加不同浓度miRNAs模拟物/抑制物以确定最适浓度,添加miR-32抑制物、miR-296-5p模拟物、miR-296-5p抑制物、miR-423-3p模拟物、miR-423-3p抑制物、miR-7138抑制物、miR-150模拟物、miR-150抑制物后皮质颗粒荧光强度极显著下调(P<0.01);添加miR-296-3p抑制物、miR-7138-5p模拟物后皮质颗粒荧光强度显著下调(P<0.05)。MⅡ期卵母细胞Npm2 mRNA表达量极显著高于GV期卵母细胞,添加最适浓度miR-150、miR-296-3p、miR-296-5p、miR-7138-5p模拟物和/或抑制物Npm2 mRNA表达量与对照组有显著差异(P<0.05),添加miR-32、miR-423-3p模拟物/抑制物后MⅡ期卵母细胞Npm2 mRNA表达量与对照组无显著差异(P>0.05)。筛选的差异miRNA(如miR-296-3p、miR-7138-5p)可能通过调控Npm2表达影响卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育,可为猪卵母细胞microRNAs与靶基因复杂调控网络研究提供基础。
关键词
猪
卵母细胞
MICRORNA
npm2
Keywords
pig
oocyte
microRNA
Npm 2
分类号
S828.3 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
猪GV/MⅡ期卵母细胞miRNAs表达谱及Npm2基因相关miRNAs筛选
被引量：
2
2
作者
张珂
严继猛
刘耀文
李鸿辉
陈强
李卓
苏艳华
普少瑕
王海臻
魏红江
贾宝瑜
成文敏
机构
云南农业大学动物科学技术学院
云南农业大学动物医学院
云南农业大学云南省动物基因编辑与体细胞克隆技术重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期996-1009,共14页
基金
国家自然科学基金地区项目(31660656
31560636
+2 种基金
31760671)
云南省重大科技专项计划(2018ZF018)
云南省农业基础联合专项(2018FG001-041)。
文摘
旨在探索体外成熟前后猪卵母细胞miRNAs表达谱,并筛选参与调控Npm2基因表达的miRNAs。本试验回收屠宰场猪卵巢,收集GV期卵母细胞,经体外成熟培养后获得MⅡ期卵母细胞,分别提取约130个GV期和MⅡ期卵母细胞总RNA进行Illumina HiSeqTM 2500测序,获取miRNA测序数据,每个处理重复3次,筛选差异表达microRNAs并进行靶基因GO和KEGG聚类分析。结果表明,本研究成功构建了GV期和MⅡ期猪卵母细胞miRNAs表达谱,GV期和MⅡ期卵母细胞差异表达miRNAs有95个,具有相似表达模式的miRNA聚为一类,对95个差异表达miRNAs进行靶基因预测,共得到3 967个靶基因,经GO和KEGG富集分析表明,这些靶基因被富集于5 194个GO条目和212个信号通路,其中参与卵母细胞减数分裂成熟的信号通路有2个。在差异表达miRNAs中筛选到5个与Npm2基因相关的miRNAs。采用qRT-PCR对其中2个miRNAs进行验证,证实其表达趋势与测序结果一致。本研究筛选了GV期和MⅡ期卵母细胞差异表达miRNAs,推测差异表达的miRNAs可能通过代谢、卵母细胞减数分裂相关通路、孕激素介导的卵母细胞成熟通路等途径在卵母细胞体外成熟过程中发挥作用,并筛选出调控Npm2基因表达的miRNAs,研究结果可为进一步阐明miRNA对Npm2基因的调控及其在卵母细胞成熟过程中的作用提供依据。
关键词
猪
卵母细胞
MIRNAS
npm2
基因
Keywords
pig
oocyte
miRNAs
Npm 2 gene
分类号
S828.3 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
筛选的差异表达microRNAs对猪卵母细胞Npm2基因的表达调控及作用研究
李河林
蒋玉芬
程娜
韩宇辰
霍晓颖
苏宏鼎
常悦
方玉珠
王配
贾宝瑜
魏红江
成文敏
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
2
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下载PDF
职称材料
2
猪GV/MⅡ期卵母细胞miRNAs表达谱及Npm2基因相关miRNAs筛选
张珂
严继猛
刘耀文
李鸿辉
陈强
李卓
苏艳华
普少瑕
王海臻
魏红江
贾宝瑜
成文敏
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
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