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广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子在大肠杆菌中的表达 被引量:4
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作者 宋慧 张学荣 +2 位作者 周元聪 江涛 舒雨雁 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期265-270,共6页
目的采用基因工程技术,在大肠杆菌(E.coli)中表达广西眼镜蛇(黑眼镜蛇)蛇毒神经生长因子(NGF)成熟蛋白并检测其生物活性。方法将天然广西眼镜蛇蛇毒的NGF蛋白基因克隆至融合表达载体pET-40b(+)中,以C端融合了6个组氨酸的形式在E.coli BL... 目的采用基因工程技术,在大肠杆菌(E.coli)中表达广西眼镜蛇(黑眼镜蛇)蛇毒神经生长因子(NGF)成熟蛋白并检测其生物活性。方法将天然广西眼镜蛇蛇毒的NGF蛋白基因克隆至融合表达载体pET-40b(+)中,以C端融合了6个组氨酸的形式在E.coli BL21(DE3)通过异丙基硫代半乳糖苷诱导表达NGF蛋白。超声破菌后,将上清液经Ni^(2+)-NTA柱纯化,收集并冻干NGF融合蛋白,用蛋白印迹法分析其NGF抗原活性,并通过促PC12细胞生长法观察其生物活性。结果经蛋白印迹分析可知在38 ku处的条带具有NGF抗原活性。加入天然蛇毒NGF,生长轴突的PC12细胞为(83±3)%,重组品为(21±3)%,表明经纯化的融合蛋白具有NGF生物活力,但活性弱于天然蛇毒NGF。结论在大肠杆菌中可以表达出有活性的蛇毒NGF蛋白。 展开更多
关键词 眼镜蛇 蛇毒 神经生长因子 蛋白表达
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蛇毒神经生长因子的分离纯化及鉴定 被引量:4
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作者 刘春宇 陈洁 +3 位作者 卢军 刘晓青 向军剑 林剑 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 1997年第3期90-94,共5页
采用SephadexG50、CM-Celulose32柱层析,从中华眼镜蛇中分离出神经生长因子(NerveGrowthFacter,NGF)。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Westernbloting法证明所得到的N... 采用SephadexG50、CM-Celulose32柱层析,从中华眼镜蛇中分离出神经生长因子(NerveGrowthFacter,NGF)。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Westernbloting法证明所得到的NGF为单一组分,相对分子质量约为1.3×104.经凝胶等电聚焦电泳测得NGF等电点PI约为7.0左右.经HPLC及电泳图像分析系统测得纯度为98%.此NGF经8d鸡胚背根神经节体外培养证明,具有促进神经纤维生长的活性.将所纯化的NGF免疫大白兔获得抗血清。 展开更多
关键词 蛇毒 神经生长因子 分离 纯化 眼镜蛇毒 抗体
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中华眼镜蛇毒神经生长因子对PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响
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作者 李卉 余晓东 +3 位作者 和七一 邓敏 陈夏 林奕心 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期88-91,共4页
目的探讨中华眼镜蛇毒(Naja Naja Atra)神经生长因子(nNGF)对PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响。方法PC12细胞分为正常对照组和给药组,采用Western blot方法检测各组PC12细胞κ阿片受体蛋白质的表达。结果①nNGF的25、50、100μg.L-1... 目的探讨中华眼镜蛇毒(Naja Naja Atra)神经生长因子(nNGF)对PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响。方法PC12细胞分为正常对照组和给药组,采用Western blot方法检测各组PC12细胞κ阿片受体蛋白质的表达。结果①nNGF的25、50、100μg.L-13个剂量中,50和100μg.L-1nNGF下调PC12细胞κ阿片受体蛋白质的表达,50μg.L-1剂量组下调最明显(P<0.01),100μg.L-1剂量组下调(P<0.05)。②50μg.L-1nNGF分别处理PC12细胞1、3、5、7、10 d后,其κ阿片受体蛋白质表达呈降低趋势,其中d 5、7下调(P<0.05),d 10下调明显(P<0.01)。③10μmol.L-1吗啡可上调PC12细胞κ阿片受体蛋白表达,而10μmol.L-1纳络酮对其无影响,二者分别都能逆转nNGF的下调效应,但是二者共存时不能逆转nNGF的下调效应。结论nNGF诱导PC12细胞分化中,可引起PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达的下调效应,该效应能被吗啡或纳络酮逆转,但二者共存不能被逆转效应。 展开更多
关键词 中华眼镜蛇毒神经生长因子(nngf) PC12细胞 Κ阿片受体
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舟山眼镜蛇毒神经生长因子的亲和层析分离
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作者 韦传宝 黄亚男 《生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期41-44,共4页
用层析和制备SDS-PAGE法纯化舟山眼镜蛇(Najanajaatra Cantor)毒神经生长因子(NGF),免疫家兔获得抗血清。用辛酸-硫酸铵沉淀法初步纯化IgG,蛋白A-Sepharose亲和层析进一步纯化IgG,并与CNBr活化的Sepharose4B偶联,采用亲和层析法对舟山... 用层析和制备SDS-PAGE法纯化舟山眼镜蛇(Najanajaatra Cantor)毒神经生长因子(NGF),免疫家兔获得抗血清。用辛酸-硫酸铵沉淀法初步纯化IgG,蛋白A-Sepharose亲和层析进一步纯化IgG,并与CNBr活化的Sepharose4B偶联,采用亲和层析法对舟山眼镜蛇毒神经生长因子进行分离纯化。产物经过SDS-PAGE检测呈一条带,并显示了良好的生物学活性。纯化NGF最大比活性为5.0×104U/mg蛋白,亲和常数为4.35×108L/mol,亲和层析分离NGF得率比传统分离方法得率提高35.2%,该方法为NGF的大量提取提供了技术支持。 展开更多
关键词 舟山眼镜蛇 神经生长因子 亲和层析
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