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枸杞内生真菌NQ8GⅡ4菌株原生质体制备及再生条件研究
被引量：
2
1
作者
闫思远
杨富龙
+4 位作者
杜娟
李金
任苗苗
李嘉泓
顾沛雯
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期1710-1719,共10页
以枸杞内生真菌Fusarium nematophilum NQG8Ⅱ4菌株为材料,利用单因素试验和响应面法对影响原生质体制备的4个因素(菌龄、酶解时间、酶质量浓度、稳渗剂浓度)进行优化,获得原生质体制备的最佳条件。确定酶解时间,酶质量浓度,稳渗剂浓度...
以枸杞内生真菌Fusarium nematophilum NQG8Ⅱ4菌株为材料,利用单因素试验和响应面法对影响原生质体制备的4个因素(菌龄、酶解时间、酶质量浓度、稳渗剂浓度)进行优化,获得原生质体制备的最佳条件。确定酶解时间,酶质量浓度,稳渗剂浓度三因素对原生质体产量、原生质体再生率和有效原生质体量的组合效应。结果表明,NQ8GⅡ4菌株原生质体制备的最佳条件为:过滤收集菌龄16 h的菌丝0.05 g于1 mL质量浓度为30.30 g/L崩溃酶+10 g/L溶壁酶的酶解液中反应2.5 h;以0.713 mol/L NaCl为稳渗剂,原生质体产量平均为7.12×107 mL-1,再生率平均为5.56%,有效原生质体量平均为39.59×105mL-1,与模型预测值拟合较好。获得枸杞内生真菌NQ8GⅡ4菌株原生质体制备的最佳条件,为该菌株在原生质体诱变、基因组重排、基因编辑技术等后续分子遗传学研究提供理论基础。
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关键词
枸杞内生真
菌
nq8gⅱ4菌株
原生质体
响应面法
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职称材料
枸杞内生真菌NQ8GⅡ4菌株GFP标签蛋白表达载体的筛选
2
作者
闫思远
任苗苗
+4 位作者
杜娟
李金
杨富龙
李嘉泓
顾沛雯
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2021年第4期123-132,共10页
[目的]筛选适合枸杞内生真菌(Fusarium nematophilum)NQ8GⅡ4菌株GFP标签蛋白的表达载体,为后期研究该菌株在宿主植物中的侵染行为和定殖规律奠定基础。[方法]采用PEG介导原生质体转化法,分别将GFP标签蛋白表达载体pFL2、pDL2、r-KNT和K...
[目的]筛选适合枸杞内生真菌(Fusarium nematophilum)NQ8GⅡ4菌株GFP标签蛋白的表达载体,为后期研究该菌株在宿主植物中的侵染行为和定殖规律奠定基础。[方法]采用PEG介导原生质体转化法,分别将GFP标签蛋白表达载体pFL2、pDL2、r-KNT和KNTG转入NQ8GⅡ4菌株,对比4种NQ8GⅡ4转化子的荧光强度、遗传稳定性、拮抗活性和致病性,筛选GFP标签蛋白的最佳表达载体。[结果]枸杞内生真菌NQ8GⅡ4菌株对潮霉素B(HmB)的耐受质量浓度为20 mg/L,对遗传霉素(G418)的耐受质量浓度为80 mg/L。通过PEG介导原生质体转化,获得pFL2转化子272株、pDL2转化子57株、r-KNT转化子73株和KNTG转化子226株,其转化效率分别为13.60,2.85,3.65和11.30株/μg。荧光显微观察发现,表达载体pDL2和KNTG的转化子所产生的荧光强度明显强于表达载体r-KNT和pFL2的转化子。连续培养5代后,pDL2转化子的遗传稳定率高达89.47%,pFL2、r-KNT和KNTG转化子的遗传稳定率分别仅为67.28%,68.49%和58.85%。4种转化子对枸杞胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)的拮抗活性以及对枸杞离体叶片的致病性均与野生型菌株无明显差异。[结论]pDL2更适合用作NQ8GⅡ4菌株GFP标签蛋白的表达载体。
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关键词
内生真
菌
nq8gⅱ4菌株
PE
g
介导原生质体转化
表达载体
枸杞
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职称材料
题名
枸杞内生真菌NQ8GⅡ4菌株原生质体制备及再生条件研究
被引量：
2
1
作者
闫思远
杨富龙
杜娟
李金
任苗苗
李嘉泓
顾沛雯
机构
宁夏大学农学院
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期1710-1719,共10页
基金
国家自然科学基金(31460484)。
文摘
以枸杞内生真菌Fusarium nematophilum NQG8Ⅱ4菌株为材料,利用单因素试验和响应面法对影响原生质体制备的4个因素(菌龄、酶解时间、酶质量浓度、稳渗剂浓度)进行优化,获得原生质体制备的最佳条件。确定酶解时间,酶质量浓度,稳渗剂浓度三因素对原生质体产量、原生质体再生率和有效原生质体量的组合效应。结果表明,NQ8GⅡ4菌株原生质体制备的最佳条件为:过滤收集菌龄16 h的菌丝0.05 g于1 mL质量浓度为30.30 g/L崩溃酶+10 g/L溶壁酶的酶解液中反应2.5 h;以0.713 mol/L NaCl为稳渗剂,原生质体产量平均为7.12×107 mL-1,再生率平均为5.56%,有效原生质体量平均为39.59×105mL-1,与模型预测值拟合较好。获得枸杞内生真菌NQ8GⅡ4菌株原生质体制备的最佳条件,为该菌株在原生质体诱变、基因组重排、基因编辑技术等后续分子遗传学研究提供理论基础。
关键词
枸杞内生真
菌
nq8gⅱ4菌株
原生质体
响应面法
Keywords
Endophytic fun
g
us from Lycium barbarum
nq
8
g
ⅱ
4
strain
Protoplast
Response surface methodolo
g
y
分类号
S432.1 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
枸杞内生真菌NQ8GⅡ4菌株GFP标签蛋白表达载体的筛选
2
作者
闫思远
任苗苗
杜娟
李金
杨富龙
李嘉泓
顾沛雯
机构
宁夏大学农学院
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2021年第4期123-132,共10页
基金
国家自然科学基金项目(31460484)。
文摘
[目的]筛选适合枸杞内生真菌(Fusarium nematophilum)NQ8GⅡ4菌株GFP标签蛋白的表达载体,为后期研究该菌株在宿主植物中的侵染行为和定殖规律奠定基础。[方法]采用PEG介导原生质体转化法,分别将GFP标签蛋白表达载体pFL2、pDL2、r-KNT和KNTG转入NQ8GⅡ4菌株,对比4种NQ8GⅡ4转化子的荧光强度、遗传稳定性、拮抗活性和致病性,筛选GFP标签蛋白的最佳表达载体。[结果]枸杞内生真菌NQ8GⅡ4菌株对潮霉素B(HmB)的耐受质量浓度为20 mg/L,对遗传霉素(G418)的耐受质量浓度为80 mg/L。通过PEG介导原生质体转化,获得pFL2转化子272株、pDL2转化子57株、r-KNT转化子73株和KNTG转化子226株,其转化效率分别为13.60,2.85,3.65和11.30株/μg。荧光显微观察发现,表达载体pDL2和KNTG的转化子所产生的荧光强度明显强于表达载体r-KNT和pFL2的转化子。连续培养5代后,pDL2转化子的遗传稳定率高达89.47%,pFL2、r-KNT和KNTG转化子的遗传稳定率分别仅为67.28%,68.49%和58.85%。4种转化子对枸杞胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)的拮抗活性以及对枸杞离体叶片的致病性均与野生型菌株无明显差异。[结论]pDL2更适合用作NQ8GⅡ4菌株GFP标签蛋白的表达载体。
关键词
内生真
菌
nq8gⅱ4菌株
PE
g
介导原生质体转化
表达载体
枸杞
Keywords
endophytic fun
g
us
nq
8
g
ⅱ
4
strain
PE
g
mediated protoplasts transformation
expression vector
Lycium barbarum
分类号
S567.1 [农业科学—中草药栽培]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
枸杞内生真菌NQ8GⅡ4菌株原生质体制备及再生条件研究
闫思远
杨富龙
杜娟
李金
任苗苗
李嘉泓
顾沛雯
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
2
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职称材料
2
枸杞内生真菌NQ8GⅡ4菌株GFP标签蛋白表达载体的筛选
闫思远
任苗苗
杜娟
李金
杨富龙
李嘉泓
顾沛雯
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2021
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