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外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化 被引量:7
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作者 张金平 张雷 +4 位作者 王惠娟 王多 赵昱 尹青 赵春芳 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期725-729,共5页
目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正... 目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正确。将重组质粒pEGFP-N1-Nkx2-5以脂质体法转染P19细胞,G418筛选2周,聚集4d,贴壁培养16d。以免疫细胞化学检测desmin、α-sarcomeric actin和cardiac Troponin T(cTnT)的表达。结果:将Nkx2-5基因正确插入pEGFP-N1载体,外源表达Nkx2-5基因可使P19细胞在无诱导剂、聚集条件下表达desmin、α-sarcomeric actin和cTnT蛋白。结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化。 展开更多
关键词 nkx2-5 质粒构建 P19细胞 基因转染 心肌分化
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3个贵州地方鸡种NKX2-5基因多态性及生物信息学分析 被引量:3
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作者 杨红 孙鹃 +5 位作者 裘贵华 宋汝谋 杨开明 朱明贵 李俊 张勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第12期209-214,共6页
以高脚鸡、威宁鸡、乌蒙乌骨鸡(含白壳蛋鸡和绿壳蛋鸡)3个贵州地方鸡种为研究对象,构建品种DNA池,扩增NKX2-5基因第1外显子全部序列及第2内含子部分序列,采用直接测序法对3个品种(4个群体)的NKX2-5基因进行单核苷酸多态性检测,利用生物... 以高脚鸡、威宁鸡、乌蒙乌骨鸡(含白壳蛋鸡和绿壳蛋鸡)3个贵州地方鸡种为研究对象,构建品种DNA池,扩增NKX2-5基因第1外显子全部序列及第2内含子部分序列,采用直接测序法对3个品种(4个群体)的NKX2-5基因进行单核苷酸多态性检测,利用生物信息学软件预测不同多态性位点对NKX2-5基因mRNA二级结构、蛋白质二级结构的影响。结果表明,在3个品种(4个群体)中共检测到G108A、T288C、C400T、T420G和G429A5个SNPs位点,其中,G108A位于非编码区;T288C、C400T位于第1外显子区;T420G和G429A位于内含子区。T288C和C400T均为错义突变,T288C突变导致丝氨酸(Ser)变为脯氨酸(Pro)、C400T突变导致丙氨酸(Ala)变为缬氨酸(Val),SNPs位点对于NKX2-5基因mRNA二级结构、蛋白质二级结构有一定影响。 展开更多
关键词 贵州地方鸡种 nkx2-5基因 SNPS 生物信息学
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NKX2-5、TBX5、GATA4基因与先天性心脏病关系研究进展 被引量:10
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作者 杜佳 易岂建 《儿科药学杂志》 CAS 2018年第5期58-61,共4页
先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)是指胚胎发育异常所致的心脏、大血管结构及功能异常,在新生儿中的发病率为0.4%~1.0%,是最常见的出生缺陷类型。心脏是胚胎最先形成的器官,心脏发育过程由基因调控,其任一基因的表达异常... 先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)是指胚胎发育异常所致的心脏、大血管结构及功能异常,在新生儿中的发病率为0.4%~1.0%,是最常见的出生缺陷类型。心脏是胚胎最先形成的器官,心脏发育过程由基因调控,其任一基因的表达异常,均能引起心脏发育畸形。 展开更多
关键词 GATA4 基因突变 心脏发育 nkx2-5 CHD 先天性心脏病
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大鼠BMSCs向心肌样细胞分化过程中miR-128对Nkx2-5基因的调控作用 被引量:1
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作者 朱国伟 鞠延玲 高振宇 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第34期1-3,共3页
目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化过程中miR-128对Nkx2-5基因的调控作用。方法分离培养大鼠BMSCs,应用5-氮杂胞苷将其诱导为心肌样细胞,采用Real-time PCR法检测诱导6、10、14、18、22 d时miR-128、Nkx2-5基因的表... 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化过程中miR-128对Nkx2-5基因的调控作用。方法分离培养大鼠BMSCs,应用5-氮杂胞苷将其诱导为心肌样细胞,采用Real-time PCR法检测诱导6、10、14、18、22 d时miR-128、Nkx2-5基因的表达。用生物信息学方法对miR-128和Nkx2-5基因的靶向匹配关系进行预测,显示miR-128与Nkx2-5 mRNA的3'UTR结合情况良好。提取心肌细胞总RNA,扩增Nkx2-5 mRNA 3'UTR片段,构建Nkx2-5 3'UTR-pmir GLO荧光素酶报告载体,双荧光素酶检测转染Nkx2-5 3'UTR-pmir GLO以及miR-128模拟物或对照miRNA的荧光强度,鉴定miR-128与Nkx2-5的靶向关系。结果将诱导6 d的Nkx2-5和miR-128的表达量分别设为1,诱导10 d的Nkx2-5表达量为4.33±1.32、22 d为14.78±6.05,诱导10 d的miR-128表达量为0.776 2±0.054 3、22 d为0.197 6±0.083 6。miR-128与Nkx2-5的表达呈负相关(r=-0.546,P=0.021)。相对于转染对照miRNA(设定其荧光素酶活性为1),转染miR-128能使Nkx2-5 3'UTR-pmir GLO的荧光素酶表达下降为0.435 4±0.072 6。结论 miR-128通过结合Nkx2-5 mRNA 3'UTR抑制其表达,具有负性调控BMSCs向心肌样细胞分化过程中Nkx2-5表达的作用。 展开更多
关键词 微小核糖核酸 nkx2-5基因 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞 大鼠
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3个鸡种NKX2-5基因多态性与胫长的关联性分析
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作者 杨红 张勇 +3 位作者 何琦 李俊 张雄 彭松 《广东农业科学》 CAS 2016年第6期156-162,共7页
以贵州特有鸡种高脚鸡、矮脚鸡和百宜黑鸡为试验对象,利用PCR-SSCP和DNA测序等方法检测了NKX2-5基因T563C、C675T位点在3个试验鸡群中不同基因型与胫长的关联性。T563C与胫长关联分析表明,高脚鸡群体中TT基因型个体胫长显著高于CC型,百... 以贵州特有鸡种高脚鸡、矮脚鸡和百宜黑鸡为试验对象,利用PCR-SSCP和DNA测序等方法检测了NKX2-5基因T563C、C675T位点在3个试验鸡群中不同基因型与胫长的关联性。T563C与胫长关联分析表明,高脚鸡群体中TT基因型个体胫长显著高于CC型,百宜黑鸡群体中TT基因型显著高于CT型,矮脚鸡群体中不同基因型个体间胫长差异不显著;C675T突变位点在3个鸡种中只有CC和CT两种基因型,且各鸡种不同基因型个体间胫长差异不显著。 展开更多
关键词 nkx2-5基因 胫长 SSCP 多态性
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转录因子Nkx2.5、ISL-1表达与小鼠胚胎心的早期发育 被引量:4
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作者 冯先玲 景雅 +3 位作者 李海荣 杨艳萍 乔从进 张涛 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期577-580,594,F0002,共6页
目的:探讨转录因子Nkx2.5和ISL-1的表达与小鼠胚胎早期心发育的关系.方法:胚龄7.5~13d小鼠胚胎连续石蜡切片,用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗转录因子ISL-1、抗Nkx2.5抗体,进行免疫组织化学显色.结... 目的:探讨转录因子Nkx2.5和ISL-1的表达与小鼠胚胎早期心发育的关系.方法:胚龄7.5~13d小鼠胚胎连续石蜡切片,用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗转录因子ISL-1、抗Nkx2.5抗体,进行免疫组织化学显色.结果:转录因子Nkx2.5在胚龄7.5d生心板表达早于心肌特异性蛋白MHC及SMA.随心外形建立,Nkx2.5在心各部表达逐渐增强.胚龄9d, Nkx2.5阳性表达从原始心管动脉端延伸至心包腔背侧脏壁中胚层及咽周围轴旁中胚层.Isl-1开始表达于胚龄8d原始心管心背系膜及前肠腹侧脏壁中胚层间充质,阳性细胞数量在11~12d达顶峰,形成前肠腹侧连接流出道远端和心房背侧壁的ISL-1阳性细胞带.11~12d,流出道远端出现Nkx2.5和MHC阴性,ISL-1、SMA阳性表达区.胚龄13d后,Nkx2.5和ISL-1在心和前肠腹侧间充质的表达强度下降.结论:Nkx2.5是原始生心区心肌前体细胞早期分化的标记蛋白,在第2生心区表达限于胚龄9d、咽周脏壁和轴旁中胚层心肌前体细胞亚群.第2生心区标记蛋白ISL-1主要表达在胚龄8~12d前肠腹侧脏壁中胚层心肌前体细胞,并向心管添加心肌细胞,参与流出道发育及心管成襻.11d后,第2生心区间充质细胞开始分化为升主动脉和肺动脉干平滑肌. 展开更多
关键词 转录因子nkx2.5 转录因子ISL-1 2生心区 胚胎心 小鼠
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