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基于电喷雾电离质谱的人肝癌细胞HepG2与正常肝细胞L02的N-糖链的定性定量比较 被引量:8
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作者 潘丽英 王承健 +3 位作者 袁江北 张英 黄琳娟 王仲孚 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第2期237-243,共7页
以培养的原发性肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L02为研究对象,采用细胞裂解液提取总蛋白,用PNGase F酶解释放N-糖链,以微晶纤维素柱结合石墨碳柱纯化分离N-糖链,通过电喷雾电离质谱(ESI-MS)和串联质谱(MS/MS)对N-糖链进行序列鉴定,以β-环... 以培养的原发性肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L02为研究对象,采用细胞裂解液提取总蛋白,用PNGase F酶解释放N-糖链,以微晶纤维素柱结合石墨碳柱纯化分离N-糖链,通过电喷雾电离质谱(ESI-MS)和串联质谱(MS/MS)对N-糖链进行序列鉴定,以β-环糊精为内标对2种细胞系的N-糖链进行了定量比较分析.结果表明,在肝癌细胞系HepG2和正常细胞系L02中共检测到26种N-糖链,与L02相比,HepG2的大多数高甘露糖型糖链、唾液酸化糖链和岩藻糖基化糖链的数量都明显升高,其中有15种糖链在数量上具有极显著性差异(p<0.01),1种糖链具有显著性差异(p<0.05).本研究为进一步探索肝癌中各类N-糖链的表达特点及发现早期肝癌糖链标志物提供了参考. 展开更多
关键词 原发性肝癌细胞(HepG2) 正常肝细胞(L02) n-糖链 电喷雾电离质谱
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基于MALDI-TOF质谱技术分析人宫颈癌HeLa细胞N-糖链结构轮廓 被引量:3
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作者 王培培 于广利 +3 位作者 焦广玲 赵峡 李静 柴文刚 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1233-1238,共6页
以微量HeLa细胞(107个)为对象,经细胞裂解、还原羧甲基化、胰酶降解和Oasis-HLB柱提取分离得到总糖肽后,用PNGase F酶解释放N-糖链.对所得N-糖链用Sep-Pak C18柱纯化后进行完全甲基化衍生,再采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALD... 以微量HeLa细胞(107个)为对象,经细胞裂解、还原羧甲基化、胰酶降解和Oasis-HLB柱提取分离得到总糖肽后,用PNGase F酶解释放N-糖链.对所得N-糖链用Sep-Pak C18柱纯化后进行完全甲基化衍生,再采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析HeLa细胞表面N-糖链的结构轮廓.结果表明,在获得的34种N-糖链中,除高甘露糖型、二天线、三天线、四天线和五天线等N-糖链外,还出现了在某种程度上与肿瘤发生转移相关的特殊平分型和Lewis结构.利用MALDI-TOF MS技术可快速分析微量癌细胞表面N-糖链的结构轮廓,为进一步寻找肿瘤糖链标志物及肿瘤的早期预防诊断提供技术支持. 展开更多
关键词 肿瘤 HELA细胞 n-糖链 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱
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新型核壳型亲水聚合物-硅胶杂化填料的合成及其在蛋白质N-糖链富集中的应用 被引量:2
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作者 白海红 范超 +5 位作者 沈丙权 田芳 邓玉林 潘一廷 秦伟捷 钱小红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期221-227,共7页
蛋白质的N-糖基化修饰与多种重要的生理、病理进程密切相关,是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。由于糖蛋白本身多是低丰度表达的蛋白质,且糖链结构具有高度微不均一性,这使得蛋白质糖基化修饰的分析具有一定的挑战。本研究利用表面引... 蛋白质的N-糖基化修饰与多种重要的生理、病理进程密切相关,是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。由于糖蛋白本身多是低丰度表达的蛋白质,且糖链结构具有高度微不均一性,这使得蛋白质糖基化修饰的分析具有一定的挑战。本研究利用表面引发-原子转移自由基聚合(SI-ATRP)法,以带有双键的氨基葡萄糖为单体(GMAG),成功制备了新型核壳型亲水聚合物-硅胶杂化填料(pGMAG-SiO2)。由于在硅胶表面引入致密的亲水聚合物层,该填料不仅保持了硅胶良好的机械强度,而且显著提高了其亲水性,因此非常适合作为亲水填料用于蛋白质的N-糖链富集。以麦芽七糖和鸡卵清蛋白的N-糖链为研究对象,考察了该填料对N-糖链的富集效果,并将该杂化填料成功用于人血浆中糖蛋白N-糖链的富集检测,共鉴定了47种糖型。以上结果表明,pGMAG-SiO2填料对N-糖链具有较高的亲和性,可以用于N-糖链的高覆盖率鉴定。 展开更多
关键词 表面引发-原子转移自由基聚合反应 核壳型硅胶填料 n-糖链 n-基化蛋白质
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肝型碱性磷酸酶N-糖链亲和层析用于原发性肝癌诊断研究 被引量:1
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作者 郭子林 王彦 《济宁医学院学报》 1999年第1期20-23,共4页
目的研究肝型碱性磷酸酶N-糖链亲和层析在原发性肝癌诊断中的应用价值。方法用麦胚凝集素WGA分离血清中肝型碱性磷酸酶和骨型碱性磷酸酶,再将肝型碱性磷酸酶进行蔓陀萝凝集素DSA亲和层析,分离不同亲和力组分,测定酶活力;将... 目的研究肝型碱性磷酸酶N-糖链亲和层析在原发性肝癌诊断中的应用价值。方法用麦胚凝集素WGA分离血清中肝型碱性磷酸酶和骨型碱性磷酸酶,再将肝型碱性磷酸酶进行蔓陀萝凝集素DSA亲和层析,分离不同亲和力组分,测定酶活力;将血清直接上样DSA亲和层析柱,分离肝型碱性磷酸酶强结合组分。结果正常成人血清肝型碱性磷酸酶不与DSA结合,而慢性乙型肝炎、肝硬化出现了DSA弱结合组分且随肝病慢性化发展有增加之趋势。在原发性肝癌肝型碱性磷酸酶中分离到DSA强结合组分,且在所检18例原发性肝癌中均存在,但在正常人血清及慢性肝病血清中未发现。用肝型碱性磷酸酶DSA强结合组分诊断原发性肝癌的灵敏度和特异度均可高达100%。结论肝型碱性磷酸酶强结合组分为原发性肝癌特异性标志,血清肝型碱性磷酸酶DSA亲和层析是一种诊断原发性肝癌的灵敏可靠的方法。 展开更多
关键词 碱性磷酸酶 n-糖链 原发性 肝癌 亲和层析 诊断
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N-糖链合成相关β-1,4半乳糖基转移酶在人星形胶质细胞瘤中的表达
5
作者 严美娟 沈爱国 +4 位作者 邵晓轶 李爱红 王惠民 顾建新 程纯 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期241-243,共3页
目的分析与N-糖链合成相关β-1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ(β1,4-galactosyltransferaseⅠ、Ⅱ、Ⅴ,β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ)mRNA在正常脑组织和各级人星形胶质细胞瘤的表达变化。方法采用RT-PCR方法,分析β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在人... 目的分析与N-糖链合成相关β-1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ(β1,4-galactosyltransferaseⅠ、Ⅱ、Ⅴ,β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ)mRNA在正常脑组织和各级人星形胶质细胞瘤的表达变化。方法采用RT-PCR方法,分析β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在人星形胶质细胞瘤的表达存在。以扩增的3种同工酶cDNA片段作为探针进行标记,Northernblot分析其mRNA在正常脑组织和各级人星形胶质细胞瘤中的表达变化。结果RT-PCR检测到β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在人星形胶质细胞瘤中的表达存在。northernblot发现β-1,4-GalT-Ⅱ、Ⅴ在正常脑组织中有表达,但β-1,4-GalT-Ⅱ的表达较低,而β-1,4-GalT-Ⅰ在正常脑组织中表达极低。β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在星形胶质细胞瘤中的表达显著高于正常脑组织。其中,β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ在各级胶质瘤中的表达没有明显差异。而β-1,4-GalT-Ⅴ的表达随胶质瘤分级的增高而增加。结论N-糖链合成相关的β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在人脑星形胶质细胞瘤发生过程中的表达不同,尤其是β-1,4-GalT-Ⅴ的表达与人星型胶质瘤的恶性程度显著相关。 展开更多
关键词 半乳基转移酶 n-糖链 β-1 相关 合成 正常脑组织 RT-PCR方法 NORTHERN RT-PCR检测 NORTHERN 脑星形胶质细胞瘤 cDNA片段 表达变化 blot 胶质瘤 mRNA 发生过程 恶性程度 同工酶
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人血浆N-糖链超高效液相色谱检测方法的优化
6
作者 王婷 陈海松 +2 位作者 李旺 Josef Voglmeir 刘丽 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期716-722,共7页
优化了超高效液相色谱(UPLC)检测N-糖链的方法,并用于人血浆样品检测。人血浆样品直接加热后使用N-糖酰胺酶F消化释放糖链,N-糖链经2-氨基苯甲酸胺(2-AB)标记反应4h,采用60%的乙腈进样浓度进行色谱分离,共得到19个色谱峰,对各峰使用离... 优化了超高效液相色谱(UPLC)检测N-糖链的方法,并用于人血浆样品检测。人血浆样品直接加热后使用N-糖酰胺酶F消化释放糖链,N-糖链经2-氨基苯甲酸胺(2-AB)标记反应4h,采用60%的乙腈进样浓度进行色谱分离,共得到19个色谱峰,对各峰使用离线基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测得到N-糖链结构40种,其中含具有末端唾液酸修饰的N-糖链27种。结合液相色谱、唾液酸酶消化和质谱结构分析发现:部分N-糖链末端唾液酸无论是在三氯乙酸(TCA)沉淀还是氯仿/甲醇沉淀的前处理过程中都发生了解离;80%的乙腈进样浓度会导致大部分含唾液酸N-糖链沉淀而影响色谱检测;而2-AB标记4h反应时间能够在提高检测灵敏度的同时减少唾液酸的损失。使用该方法仅需2.5μL血浆样品即可进行检测,日内和日间的重复性试验结果均无显著性差异。研究结果表明优化后的UPLC法适用于富含唾液酸的人血浆样品的检测。 展开更多
关键词 n-糖链 人血浆 超高效液相色谱 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱
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β-伴大豆球蛋白的N-糖基化位点及其N-糖链的质谱分析 被引量:3
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作者 李玲梅 王承健 +6 位作者 韩健利 柳人丹 温娅楠 魏明 晋万军 黄琳娟 王仲孚 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2018年第3期427-434,共8页
以β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)为研究对象,利用Trypsin和Pepsin酶对其进行水解,以Con A亲和层析柱富集纯化糖肽,并用糖苷酶PNGase F和Endo H分别酶解糖肽,再采用电喷雾质谱(ESI-MS)和串联质谱(MS/MS)对所得肽段的氨基酸序列及糖链... 以β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)为研究对象,利用Trypsin和Pepsin酶对其进行水解,以Con A亲和层析柱富集纯化糖肽,并用糖苷酶PNGase F和Endo H分别酶解糖肽,再采用电喷雾质谱(ESI-MS)和串联质谱(MS/MS)对所得肽段的氨基酸序列及糖链的结构进行了分析,最后通过数据库检索对分析结果进行验证.结果表明,β-conglycinin具有5个N-糖基化位点,分别为α亚基的199和455位天冬酰胺(Asn),α'亚基的215和489位Asn及β亚基的326位Asn,且每个糖基化位点均被H5N2,H6N2,H7N2和H8N2这4种高甘露糖型N-糖链所修饰.本研究为各种糖蛋白的糖基化位点及其对应的糖链结构的鉴定分析提供了方法参考,并为深入理解大豆糖蛋白抗原表位的特异性及致敏机理提供了依据. 展开更多
关键词 Β-伴大豆球蛋白 基化位点 n-糖链 质谱
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基于Endo-M N175Q糖链转移反应与丙酮富集糖肽的LC-MS分析糖蛋白N-糖链 被引量:2
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作者 陈奕彤 张斯然 +1 位作者 张春波 金东日 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1311-1315,共5页
基于化学酶标记和丙酮富集糖肽方法,建立了一种可靠、有效、简单的糖蛋白N-糖链分析方法。以唾液酸糖肽(SGP)为模型糖肽,比较了样品中丙酮加入量对SGP的富集效果,最终选择加入样品体积5倍量的丙酮。用丙酮富集经胰蛋白处理的核糖核酸酶B... 基于化学酶标记和丙酮富集糖肽方法,建立了一种可靠、有效、简单的糖蛋白N-糖链分析方法。以唾液酸糖肽(SGP)为模型糖肽,比较了样品中丙酮加入量对SGP的富集效果,最终选择加入样品体积5倍量的丙酮。用丙酮富集经胰蛋白处理的核糖核酸酶B(RNase B)酶解液中的糖肽,以富集分离得到的糖肽(糖基供体)和PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc(糖基受体)作为酶反应底物,进行Endo-M N175Q的转糖基反应,得到PDPZBoc-Asn-GlcNAc-N-糖链标记物。采用YMC C18色谱柱为分析柱,10 mmol/L甲酸铵-乙腈为流动相梯度洗脱,经液相色谱-串联质谱(LC-MS)检测得到5种高甘露糖型糖链。结果表明,丙酮可有效地富集大量肽和少量糖肽混合溶液中的糖肽,Endo-M N175Q可将天然糖肽的糖链转移到PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc受体上。将该方法应用于胎球蛋白N-糖链分析,检测到5种复杂型N-糖链。该研究为各种糖蛋白N-糖链检测提供了新的分析方法。 展开更多
关键词 蛋白 n-糖链 酶标记 液相色谱-质谱(LC-MS)
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离线二维色谱结合糖苷外切酶酶解用于IgG与人血清糖蛋白中N-糖链的结构表征 被引量:1
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作者 李凤 张含智 康经武 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期198-204,共7页
基于离线二维色谱和糖苷外切酶分析,建立了一种有效、可靠的糖蛋白N-糖链的结构鉴定方法。首先采用弱阴离子交换色谱实现不同唾液酸程度糖链的制备,随后将激光诱导毛细管电泳(CE-LIF)与糖苷外切酶相结合进行糖链结构鉴定。将分离制备后... 基于离线二维色谱和糖苷外切酶分析,建立了一种有效、可靠的糖蛋白N-糖链的结构鉴定方法。首先采用弱阴离子交换色谱实现不同唾液酸程度糖链的制备,随后将激光诱导毛细管电泳(CE-LIF)与糖苷外切酶相结合进行糖链结构鉴定。将分离制备后的糖链荧光标记后,进行自上而下的消化(top-down digestion)以及自下而上的结构归属(bottom-up identification),共检测到IgG中的18种糖型。将上述策略进一步应用于人血清中N-糖链的分析,发现不同唾液酸化程度糖链的相对量为S1:S2:S3:S4=4.7:20.9:6:1。结果表明,人血清中高丰度的中性糖链与IgG的中性糖链结构非常相似,而血清中含量最丰富的是二唾液化两天线的N-糖型FA2G2S2。该方法在糖蛋白N-糖链的结构表征中具有一定的应用潜力。 展开更多
关键词 离线二维色谱 毛细管电泳 免疫球蛋白G n-糖链 人血清
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双重衍生化-质谱法同时分析检测人血清中酸性与中性N-糖链
10
作者 何振宇 汪耀 +1 位作者 丁慢慢 林亚维 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期159-164,共6页
本文发展了一种新型"双重衍生化"策略,即首先以甲胺化衍生修饰酸性聚糖中的唾液酸残基,然后采用吉拉尔特试剂P(GP)对N-糖链还原端进行标记,最后以基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行检测。该衍生化方法不... 本文发展了一种新型"双重衍生化"策略,即首先以甲胺化衍生修饰酸性聚糖中的唾液酸残基,然后采用吉拉尔特试剂P(GP)对N-糖链还原端进行标记,最后以基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行检测。该衍生化方法不但保护了酸性聚糖中的唾液酸残基,而且大大提高了N-糖链的离子化效率。采用该方法,在25ng人血清样品中成功检测出16种N-糖链,其中包括9种酸性糖链和7种中性糖链,为中性、酸性N-糖链的同时检测提供了新的途径,并有望将其用于疾病相关糖链标志物的研究。 展开更多
关键词 n-糖链 吉拉尔特试剂P 双重衍生化 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱
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源于细菌Dyella caseinilytica的新型N-糖酰胺酶的特性及其功能分析
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作者 武俊英 王婷 +1 位作者 JOSEF Voglmeir 刘丽 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期104-110,共7页
N-糖酰胺酶(N-glycosidase,PNGase)是一种糖苷水解酶,主要功能为释放糖肽或糖蛋白上的N-糖链,在食品、生物医药等领域中具有重要的应用价值。目前,商业化的PNGase在使用过程中具有一定的局限性,因此,开发性能优良的新型PNGase具有研究... N-糖酰胺酶(N-glycosidase,PNGase)是一种糖苷水解酶,主要功能为释放糖肽或糖蛋白上的N-糖链,在食品、生物医药等领域中具有重要的应用价值。目前,商业化的PNGase在使用过程中具有一定的局限性,因此,开发性能优良的新型PNGase具有研究意义。该研究在细菌Dyella caseinilytica中利用编码PNGase的基因,通过在大肠杆菌中进行重组表达,成功获得一种新型PNGase,命名为PNGase Dc,该酶分子质量为63.01 kDa。之后对其酶学特性、功能和应用潜力进行分析。酶学特性结果表明,PNGase Dc的最适pH和温度分别为2.0和37℃,酶促反应无金属离子依赖性;此外,该酶稳定性优良,在4℃下保存45 d仍能维持最高活性;分子对接结果表明,PNGase Dc与底物N′N-二乙酰壳二糖的相互作用力以氢键和范德华力为主;定点突变证明,Asp102和Glu236是影响重组PNGase Dc活性的关键氨基酸;PNGase Dc对标准糖蛋白辣根过氧化物酶和牛乳铁蛋白均具有良好的去糖基化效果;最后,以拟南芥和小鼠血浆作为底物评估PNGase Dc应用潜力,证实PNGase Dc在动植物源糖蛋白的研究中具有一定的应用潜力。综上所述,该研究为动植物源糖蛋白的研究提供了一个新的工具酶PNGase Dc,并为该酶的开发利用奠定理论基础。 展开更多
关键词 PNGase Dc n-糖链 n-酰胺酶 稳定性 Dyella caseinilytica
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微量样本中N-糖组分析技术的发展与应用
12
作者 孟波 李晓宇 +2 位作者 崔新玲 应万涛 钱小红 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1416-1422,共7页
针对糖组学分析面临的初始样本量需求较高的技术挑战,该研究发展了一种微量样本N-糖链制备技术(GPAT),通过在移液枪头(Tip)中分别装填C18和HILIC填料,实现了一站式原位蛋白消化、N-糖链释放和富集。与目前普遍采用的基于过滤辅助样品制... 针对糖组学分析面临的初始样本量需求较高的技术挑战,该研究发展了一种微量样本N-糖链制备技术(GPAT),通过在移液枪头(Tip)中分别装填C18和HILIC填料,实现了一站式原位蛋白消化、N-糖链释放和富集。与目前普遍采用的基于过滤辅助样品制备(FASP)技术的N-糖组分析策略相比,使用GPAT技术可以实现微量免疫球蛋白G(IgG)和人肝癌HepG2细胞提取蛋白的原位N-糖链的释放和富集,样本起始量减少90%,可以从10μg IgG和10μg的HepG2细胞蛋白中分别检测到20条和39条N-糖链。从6例健康人(3例男性,3例女性)尿液中提取的10μg尿蛋白中检测到49条N-糖链。该方法实现了微量复杂蛋白样本N-糖链简便、快速的定量分析策略,为进一步的糖组学方法推广应用奠定了基础。 展开更多
关键词 n-糖链 组学 尿蛋白 基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱仪
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转基因植物重组糖蛋白糖基化研究现状与植物重组糖蛋白糖结构的改造策略
13
作者 陈敏 刘德虎 王鹏 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期107-110,共4页
本文综述了转基因植物重组蛋白质糖基化的研究现状,并着重介绍了转基因重组蛋白N-糖链的结构以及改造植物重组糖蛋白的糖结构的两种重要策略--将蛋白表达产物滞留在细胞内质网中或改变植物的糖基化过程.最后对转基因植物重组蛋白糖链研... 本文综述了转基因植物重组蛋白质糖基化的研究现状,并着重介绍了转基因重组蛋白N-糖链的结构以及改造植物重组糖蛋白的糖结构的两种重要策略--将蛋白表达产物滞留在细胞内质网中或改变植物的糖基化过程.最后对转基因植物重组蛋白糖链研究未来的发展作了展望. 展开更多
关键词 转基因植物 研究现状 蛋白 基化 结构 改造策略 重组蛋白质 表达产物 n-糖链 内质网 细胞
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来源于胞曲霉的α-1,2-甘露糖苷酶在酿酒酵母Δalg3Δoch1Δmnn1菌株中的定位表达 被引量:1
14
作者 董宁远 张阁元 +1 位作者 徐沙 高晓冬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1-6,共6页
利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)生产医药糖蛋白,必须对其N-糖基化途径进行人源化改造。在敲除酿酒酵母W303A特异性糖基化基因ALG3、OCH1和MNN1后,表达来源于胞曲霉(Aspergillus saitoi)的α-1,2-甘露糖苷酶(MsdSp)进一步改造... 利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)生产医药糖蛋白,必须对其N-糖基化途径进行人源化改造。在敲除酿酒酵母W303A特异性糖基化基因ALG3、OCH1和MNN1后,表达来源于胞曲霉(Aspergillus saitoi)的α-1,2-甘露糖苷酶(MsdSp)进一步改造酿酒酵母N-糖链。通过在Msd Sp的C-端添加内质网滞留信号(HDEL)和构建高尔基体滞留信号Kre2p与MsdSp的嵌合体蛋白实现MsdSp在内质网和高尔基体中的定位表达。结果表明,各突变株中均检测到Man_3GlcNAc_2和Man_4GlcNAc_2型N-糖链,并且在强启动子酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(GPD)控制下,内质网定位表达MsdSp的菌株KM201中,Man_3GlcNAc_2和Man_4GlcNAc_2型N-糖链含量较多。该研究为酿酒酵母N-聚糖进一步人源化改造提供依据。 展开更多
关键词 酿酒酵母 人源化 n-糖链结构 细胞定位
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