目的:构建携带N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)基因的腺病毒5型(Ad5)穿梭载体,为NR2B重组腺病毒镇痛疫苗的包装做准备。方法:以限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切质粒pcDNA3.1-NR2B获得目的基因NR2B;将NR2B定向克隆入腺病毒穿...目的:构建携带N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)基因的腺病毒5型(Ad5)穿梭载体,为NR2B重组腺病毒镇痛疫苗的包装做准备。方法:以限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切质粒pcDNA3.1-NR2B获得目的基因NR2B;将NR2B定向克隆入腺病毒穿梭载体pDC515,并行酶切及DNA测序鉴定。在脂质体介导下将pDC515-NR2B转染293细胞,并以RT-PCR及W estern b lot分别从转录水平和翻译水平检测目的基因NR2B的表达。结果:经酶切和DNA测序证实目的基因NR2B被成功克隆入载体pDC515-NR2B中,RT-PCR及W estern b lot检测NR2B可在293细胞表达。结论:成功构建NR2B重组Ad5穿梭载体pDC515-NR2B,该载体可用于NR2B重组Ad5载体镇痛疫苗的包装。展开更多
目的观察丁苯酞对2型糖尿病db/db小鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的影响,并探讨其机制。方法将16只雄性C57BL/KsJ-db/db小鼠按随机数字表法分为丁苯酞干预组[L-NBP组,予以120mg/(kg·d)丁苯酞灌胃,8只]和糖尿病...目的观察丁苯酞对2型糖尿病db/db小鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的影响,并探讨其机制。方法将16只雄性C57BL/KsJ-db/db小鼠按随机数字表法分为丁苯酞干预组[L-NBP组,予以120mg/(kg·d)丁苯酞灌胃,8只]和糖尿病对照组(DM组,等量植物油灌胃,8只),同窝出生的db/m小鼠作为正常对照组(NC组,等量植物油灌胃,10只)。干预6周后,进行指标观察。应用Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力,电生理实验记录小鼠体内海马前穿通纤维-齿状回通路长时程增强(LTP)的变化,RT-PCR检测NMDA受体亚单位(NR2B)mRNA表达情况。结果与NC组比较,DM组小鼠平均逃避潜伏期延长和穿越平台次数减少(P<0.05),L-NBP组小鼠上述学习记忆成绩明显改善(P<0.05);与NC组比较,DM组和L-NBP组小鼠海马LTP明显降低[(136.17±12.73)%、(174.17±20.35)%vs(251.67±43.78)%,P<0.05],海马CA1区NR2B mRNA表达水平明显下降(1.02±0.12、1.42±0.12 vs 1.86±0.14,P<0.05)。结论丁苯酞可能通过上调糖尿病小鼠海马CA1区NMDA受体的表达,促进LTP,改善糖尿病小鼠学习记忆能力。展开更多
文摘目的:构建携带N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)基因的腺病毒5型(Ad5)穿梭载体,为NR2B重组腺病毒镇痛疫苗的包装做准备。方法:以限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切质粒pcDNA3.1-NR2B获得目的基因NR2B;将NR2B定向克隆入腺病毒穿梭载体pDC515,并行酶切及DNA测序鉴定。在脂质体介导下将pDC515-NR2B转染293细胞,并以RT-PCR及W estern b lot分别从转录水平和翻译水平检测目的基因NR2B的表达。结果:经酶切和DNA测序证实目的基因NR2B被成功克隆入载体pDC515-NR2B中,RT-PCR及W estern b lot检测NR2B可在293细胞表达。结论:成功构建NR2B重组Ad5穿梭载体pDC515-NR2B,该载体可用于NR2B重组Ad5载体镇痛疫苗的包装。
文摘目的观察丁苯酞对2型糖尿病db/db小鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的影响,并探讨其机制。方法将16只雄性C57BL/KsJ-db/db小鼠按随机数字表法分为丁苯酞干预组[L-NBP组,予以120mg/(kg·d)丁苯酞灌胃,8只]和糖尿病对照组(DM组,等量植物油灌胃,8只),同窝出生的db/m小鼠作为正常对照组(NC组,等量植物油灌胃,10只)。干预6周后,进行指标观察。应用Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力,电生理实验记录小鼠体内海马前穿通纤维-齿状回通路长时程增强(LTP)的变化,RT-PCR检测NMDA受体亚单位(NR2B)mRNA表达情况。结果与NC组比较,DM组小鼠平均逃避潜伏期延长和穿越平台次数减少(P<0.05),L-NBP组小鼠上述学习记忆成绩明显改善(P<0.05);与NC组比较,DM组和L-NBP组小鼠海马LTP明显降低[(136.17±12.73)%、(174.17±20.35)%vs(251.67±43.78)%,P<0.05],海马CA1区NR2B mRNA表达水平明显下降(1.02±0.12、1.42±0.12 vs 1.86±0.14,P<0.05)。结论丁苯酞可能通过上调糖尿病小鼠海马CA1区NMDA受体的表达,促进LTP,改善糖尿病小鼠学习记忆能力。
