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蓖麻PLC2N基因的克隆与生物信息学分析
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作者 朱有军 张连宇 丛小惠 《中南农业科技》 2025年第9期46-49,共4页
在蓖麻(Ricinus communis L.)中克隆了PLC2N基因,运用生物信息学技术对PLC2N基因编码的蛋白质进行分析,以揭示其在蓖麻生长发育过程中的功能。结果表明,通过克隆蓖麻PLC2N基因,得到1785 bp的片段。PLC2N基因编码的蛋白质分子质量为67.98... 在蓖麻(Ricinus communis L.)中克隆了PLC2N基因,运用生物信息学技术对PLC2N基因编码的蛋白质进行分析,以揭示其在蓖麻生长发育过程中的功能。结果表明,通过克隆蓖麻PLC2N基因,得到1785 bp的片段。PLC2N基因编码的蛋白质分子质量为67.98839 ku,等电点为6.16,有594个氨基酸残基,高度亲水,无跨膜区;二级结构中α-螺旋结构在蛋白质序列中占28.11%,共计167种氨基酸;延长链占19.02%,包含113种氨基酸;β转角结构占6.57%,含有39种氨基酸;无规则卷曲部分占总氨基酸数量的46.30%,氨基酸数量约275种。三级结构预测结果显示,该蛋白质包含了α-螺旋、β-转角以及无规则卷曲等关键结构,其中α-螺旋在蛋白质中占据核心地位。经同源性分析,发现蓖麻中的PLC2N基因与陆地棉这一物种之间存在较接近的亲缘关系。 展开更多
关键词 蓖麻(Ricinus communis L.) PLC2n基因 克隆 生物信息学
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骨髓间充质干细胞和部分肿瘤细胞中Nucleostemin基因的表达 被引量:36
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作者 钱晖 许文荣 +6 位作者 王文兵 韩崇旭 郝顺祖 朱伟 孙晓春 胡嘉波 黄诒森 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期8-12,共5页
以分离的人胚胎和大鼠骨髓间充质干细胞 (MSCs) ,6种肿瘤细胞株 ,裸鼠肿瘤和转移瘤组织为实验材料 ,以大鼠心肌组织和人胎盘组织为对照 ,探讨nucleostemin基因的表达情况 .RT PCR结果显示 ,nucleostemin基因在MSCs、肿瘤细胞和肿瘤组织... 以分离的人胚胎和大鼠骨髓间充质干细胞 (MSCs) ,6种肿瘤细胞株 ,裸鼠肿瘤和转移瘤组织为实验材料 ,以大鼠心肌组织和人胎盘组织为对照 ,探讨nucleostemin基因的表达情况 .RT PCR结果显示 ,nucleostemin基因在MSCs、肿瘤细胞和肿瘤组织中均有不同程度的表达 ,而大鼠心肌和人胎盘组织中无表达 .DNA测序结果证明 ,扩增的PCR产物与GenBank提供的DNA序列完全同源 .SCID裸鼠肿瘤动物模型定量PCR结果证实 ,nucleostemin的mRNA在裸鼠肿瘤组织和转移瘤组织中表达较高 .研究结果表明 ,在细胞中nucleostemin基因不同水平的表达可能与MSCs、肿瘤细胞的增殖和肿瘤的发生、发展与转移有关 . 展开更多
关键词 表达 肿瘤细胞 裸鼠 大鼠 转移瘤 人胎盘组织 骨髓间充质干细胞 n基因 发生 PCR产物
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猪流行性腹泻病毒N基因的克隆及原核表达 被引量:16
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作者 杨巍 李广兴 +2 位作者 孟凡丹 王鑫 任晓峰 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期81-85,I0001,共6页
从患猪流行性腹泻的病猪粪便中分离了猪流行性腹泻病毒(PEDV)命名为HLJBY,将病毒在Vero细胞上传代,使之适应生长。将扩增的猪流行性腹泻病毒的N基因克隆到原核表达载体PET30a上,构建了重组表达质粒PET-30a-PEDV-N,并在37℃的条件下诱导... 从患猪流行性腹泻的病猪粪便中分离了猪流行性腹泻病毒(PEDV)命名为HLJBY,将病毒在Vero细胞上传代,使之适应生长。将扩增的猪流行性腹泻病毒的N基因克隆到原核表达载体PET30a上,构建了重组表达质粒PET-30a-PEDV-N,并在37℃的条件下诱导表达,通过不同时间取样,经SDS-PAGE分析结果表明,该蛋白获得了高效的表达。将PEDV在Vero细胞上大量繁殖后经超离纯化,作为免疫原制备兔抗PEDV的多克隆抗体血清。Western-blot结果表明蛋白与多抗血清具有良好的免疫反应性。 展开更多
关键词 PEDV n基因 原核表达 n蛋白
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犬瘟热病毒H、F、N基因试验免疫研究 被引量:13
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作者 闫芳 夏咸柱 +4 位作者 扈荣良 谢之景 赵忠鹏 高玉伟 黄耕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期50-55,共6页
以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗,分组进行了免疫小鼠试验,对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示:所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应,pVAXLPH+pVAXLPF+pVAXLPN3个基因混合... 以构建的真核表达载体pVAXLPH、pVAXLPF和pVAXLPN为基因疫苗,分组进行了免疫小鼠试验,对免疫鼠体内免疫应答水平进行了检测。结果显示:所构建的基因疫苗可以诱导小鼠产生特异性免疫应答反应,pVAXLPH+pVAXLPF+pVAXLPN3个基因混合免疫小鼠诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答,免疫3次后血清中抗CDV ELISA抗体效价为0.332,而免疫前为0.158;抗CDV中和抗体效价为1:(4~16);CD4^+T/CD8^+T比值为2.05±0.38,而对照组为1.99±0.56;免疫小鼠脾细胞对CDVLP及ConA刺激的增殖反应值分别为0.384和0.356。基因疫苗免疫犬试验中,进行了单用基因疫苗免疫和基因疫苗与CDV弱毒疫苗联合免疫效果的比较研究。结果显示,基因疫苗免疫3次后,血清中抗CDVELISA抗体效价为0.296,抗CDV中和抗体效价为1:(8~32)。基因疫苗免疫2次,再使用弱毒疫苗加强免疫1次,血清中抗CDVELISA抗体效价为0.433,抗CDV中和抗体效价为1:(16~64)。 展开更多
关键词 犬瘟热 基因疫苗 犬瘟热病毒H基因 犬瘟热病毒F基因 犬瘟热病毒n基因
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貂、狐、貉源犬瘟热病毒分离株H和N基因的遗传多样性分析 被引量:9
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作者 王君玮 姜平 +3 位作者 王志亮 张维 李林 赵永刚 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期108-113,共6页
为研究鼬科动物犬瘟热病毒(CDV)毒株的变异特性,对来自不同地区的貉、狐、貂的5个CDV分离株(其中HD-m、LN-m为貂源,HTp-r、THD1-r为貉源,HB-f为狐源)和1个CDV国内弱毒疫苗株(vCh)的N基因和部分H基因进行了核苷酸测序,并构建系统... 为研究鼬科动物犬瘟热病毒(CDV)毒株的变异特性,对来自不同地区的貉、狐、貂的5个CDV分离株(其中HD-m、LN-m为貂源,HTp-r、THD1-r为貉源,HB-f为狐源)和1个CDV国内弱毒疫苗株(vCh)的N基因和部分H基因进行了核苷酸测序,并构建系统发生树。结果表明,5个分离株之间H基因核苷酸序列同源性均达到97.5%以上,而N基因为94.5%-99.8%。vCh与5个分离株的H基因和N基因核苷酸序列同源性普遍较低(H基因:90.5%-91.8%;N基因:90.9%-93.5%),而与国外疫苗株vCon和vOnder的H基因核苷酸同源性达96.8%和97.2%。分离株之间H蛋白氨基酸同源性差别不大(97.1%-100%),而N蛋白氨基酸同源性差别较大(91.6%-100%)。5个CDV分离株与vCh疫苗株H蛋白和N蛋白同源性均普遍较低,H蛋白为89.7%-91.8%,N蛋白为92.8%-96.8%。vCh与vOnder、vCon有很高的同源性,其H蛋白氨基酸同源性分别为97.1%和95.6%,vCh与vOnder N蛋白氨基酸同源性达97.3%。结果显示,最近犬瘟热的流行和免疫失败现象的发生与国内所用疫苗毒株和野毒株的遗传关系甚远有关。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 H基因 n基因 同源性 遗传分析
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广西1985年~2008年IBV分离株S1基因高变区Ⅰ和N基因的序列和系统进化分析 被引量:16
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作者 磨美兰 李孟 +6 位作者 韦正吉 陈秋英 范文胜 郎亚辉 黄柏成 韦平 韦天超 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期761-765,799,共6页
为了解广西传染性支气管炎病毒(IBV)的纤突蛋白S1基因高变区Ⅰ(HVRⅠ)和核(N)蛋白基因变异情况及S1和N基因变异的相关性,本研究应用RT-PCR方法扩增了广西1985年~2008年的21株IBV的S1基因HVRⅠ和N基因,并进行了克隆、序列测定及分析。... 为了解广西传染性支气管炎病毒(IBV)的纤突蛋白S1基因高变区Ⅰ(HVRⅠ)和核(N)蛋白基因变异情况及S1和N基因变异的相关性,本研究应用RT-PCR方法扩增了广西1985年~2008年的21株IBV的S1基因HVRⅠ和N基因,并进行了克隆、序列测定及分析。结果发现:广西存在着多种基因型IBV流行;广西IBV分离株S1基因存在广泛的点突变和插入现象;N基因序列存在氨基酸替代现象。21株IBV中12株在S1基因HVRⅠ和N基因遗传进化树中均归属相同群,其余毒株却归属不同的群。2005年分离的GX-NN5存在基因重组现象。以上结果表明了广西IBV毒株存在基因突变和基因重组现象,S1和N基因的变异不完全平行,有些毒株间的S1和N基因差异很大。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 S1基因高变区Ⅰ n基因 系统进化分析 基因突变 基因重组
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实验性偏头痛动物模型c-fos、c-jun基因表达 被引量:22
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作者 彭成 任永欣 +3 位作者 姚干 陈晓莉 刘光谱 王毅 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2000年第2期112-119,共8页
目的 复制实验性偏头痛动物模型并探讨其c -fos、c -jun基因表达。方法 采用CristinaTassorelli硝酸甘油法复制大鼠实验性偏头痛模型。免疫组化ABC法研究偏头痛大鼠脑组织即刻早期基因c -fos、c -jun的表达。结果 硝酸甘油型实验性... 目的 复制实验性偏头痛动物模型并探讨其c -fos、c -jun基因表达。方法 采用CristinaTassorelli硝酸甘油法复制大鼠实验性偏头痛模型。免疫组化ABC法研究偏头痛大鼠脑组织即刻早期基因c -fos、c -jun的表达。结果 硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠出现双耳发红、甩头、前肢频繁搔头 ,活动增加等外在表现 ,脑组织c -fos、c -jun基因表达阳性细胞数增加 ,基因表达阳性细胞的面积扩大、灰度降低或变化不大。结论 硝酸甘油型实验偏头痛大鼠模型复制方法简单、重复性较好、脑组织c -fos和c -jun基因异常表达明显 ,可以作为偏头痛治疗药物筛选、药效评价和发病机理研究的动物模型。 展开更多
关键词 偏头痛 实验性 C-FOS 表达 动物模型 硝酸甘油 脑组织 n基因 药效评价 阳性细胞
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2006-2008年山东鸡传染性支气管炎病毒分离株S1与N基因的分子特征 被引量:8
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作者 路希山 胡北侠 +4 位作者 黄艳艳 孟斌 王连珠 王金宝 张秀美 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期879-885,共7页
为了调查2006-2008年山东省鸡传染性支气管炎的分子流行病学特征,应用RT-PCR方法分别扩增了14株传染性支气管炎病毒地方毒株S1基因和N基因,并进行了基因克隆与测序工作。对此14株病毒的S1基因序列利用限制性内切酶HaeⅢ进行了限制性片... 为了调查2006-2008年山东省鸡传染性支气管炎的分子流行病学特征,应用RT-PCR方法分别扩增了14株传染性支气管炎病毒地方毒株S1基因和N基因,并进行了基因克隆与测序工作。对此14株病毒的S1基因序列利用限制性内切酶HaeⅢ进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分析,结果显示可以将IBV毒株分为3种不同的基因型。其中11个毒株与LX4毒株有相同的RFLP分型,2株病毒属于Mass基因型,1个毒株有特异的RFLP分型。并将这些分离毒株与11个参考毒株分别进行了基因与氨基酸系统进化树关系分析。S1基因分析结果显示将这些毒株分成3个基因型,与RFLP分析的分型结果一致。11株病毒同属于LX4类型的毒株,分离毒株核苷酸序列相互之间有95.4%~99.7%的同源性。基因Ⅱ型与疫苗株H120和M41的同源性很高。属于基因Ⅲ型的1个毒株形成了独特的基因型。N基因分析结果表明:12株病毒与LX4属于同一基因型,有着较高的同源性。另2株病毒与疫苗株H120同源性很高。以上分析结果表明:山东省IBV分离株存在较为广泛的基因突变、插入和缺失,同时,IBV毒株间的基因重组也可能是山东省IBV变异株产生的另一主要原因。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 S1基因 n基因 RFLP分析 基因
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牛冠状病毒N基因的原核表达及初步应用 被引量:4
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作者 刘合义 余丽芸 +5 位作者 侯喜林 孙留霞 周玉龙 王进轶 刘双翼 朴范泽 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期76-80,共5页
目的获得牛冠状病毒N基因的全长序列,实现N基因在大肠杆菌中的高效表达,并进行初步应用。方法根据已发表的牛冠状病毒Mebus株的序列设计引物,对BCV-DQ株进行RT-PCR扩增、克隆和测序;将该基因插入到原核表达载体pET-30a(+)上进行原核表达... 目的获得牛冠状病毒N基因的全长序列,实现N基因在大肠杆菌中的高效表达,并进行初步应用。方法根据已发表的牛冠状病毒Mebus株的序列设计引物,对BCV-DQ株进行RT-PCR扩增、克隆和测序;将该基因插入到原核表达载体pET-30a(+)上进行原核表达,SDS-PAGE和Western blot检测;用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,对部分临床样本进行检测。结果BCV-DQ株N基因全长1347bp,与GenBank已发表的6株BCV的N基因相比较,核苷酸同源性98.3%以上。构建的重组质粒pET-N能表达出一条大小约为60ku的蛋白,且能与鼠抗BCV血清发生特异性反应。用建立的ELISA方法对黑龙江不同地区送检的共256份牛血清样品进行检测,结果阳性率65.23%,与病毒中和试验的符合率达95.31%。结论BCV N基因保守性很高,并在原核表达系统中获得了高效表达,其表达产物具有良好的免疫反应原性。临床检测结果表明N蛋白可作为诊断抗原用于牛冠状病毒病的流行病学调查。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 n基因 克隆 序列分析 原核表达
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TGEV的sM、M和N基因克隆及特征分析 被引量:5
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作者 程杰 柳纪省 +4 位作者 吴润 殷相平 李宝玉 兰喜 王辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期695-700,共6页
参照GenBank中收录的TGEVsM、M和N基因序列各设计1对特异引物,经RTPCR扩增获得了TS株的相应基因片段,分别约为346、932和1217bp,其大小与预计的目的片段相符。与其他毒株的相应基因相比较,并经剪接后,TS株的sM、M和N基因全长分别为248、... 参照GenBank中收录的TGEVsM、M和N基因序列各设计1对特异引物,经RTPCR扩增获得了TS株的相应基因片段,分别约为346、932和1217bp,其大小与预计的目的片段相符。与其他毒株的相应基因相比较,并经剪接后,TS株的sM、M和N基因全长分别为248、789和1149bp,各编码82个、262个和382个氨基酸;TS株与Purdue株、TFI株和961933株的sM基因核苷酸序列同源性分别为95.2%、92.7%和90.2%;推导氨基酸的同源性分别为95.9%、97.2%、98.8%;与Purdue株、TFI株、TGEVH株和961933株的M基因核苷酸序列同源性分别为95.2%、98.0%、99.6%和95.0%;推导氨基酸的同源性分别为97.0%、97.3%、98.5%、93.5%;与Purdue株、TFI株、FS722/70株、Korea株、TO14株、TGEVH株和961933株的N基因核苷酸序列同源性分别为98.1%、97.7%、99.0%、98.3%、99.2%、99.0%和95.9%,推导氨基酸的同源性分别为97.9%、98.4%、99.0%、97.7%、99.5%、96.2%、96.6%。并对TS株基因间的保守序列和sM、M和N基因及其编码的相应氨基酸的结构特征进行了分析,发现sM和N基因在TGEV中保守;并提示在我国不仅存在有2个不同亚基因型的TGEV,而且我国的TGEV可能是输入性的。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 TGEV TS株 sM基因 M基因 n基因 克隆
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小反刍兽疫病毒N基因在昆虫细胞中的表达 被引量:6
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作者 龙云凤 祝贺 +6 位作者 杨建明 陈朝银 徐维佳 周晓黎 董俊 叶玲玲 艾军 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第12期1-5,共5页
为了研发小反刍兽疫病毒ELISA检测试剂盒中替代全病毒的抗原物质,参照GenBank公布的小反刍兽疫疫苗株Nigeria75/1的全基因组序列(GenBank登录号:X74443),人工合成表达核蛋白的N基因开放阅读框序列,通过PCR扩增、经引物设计引入的EcoRⅠ... 为了研发小反刍兽疫病毒ELISA检测试剂盒中替代全病毒的抗原物质,参照GenBank公布的小反刍兽疫疫苗株Nigeria75/1的全基因组序列(GenBank登录号:X74443),人工合成表达核蛋白的N基因开放阅读框序列,通过PCR扩增、经引物设计引入的EcoRⅠ和KpnⅠ特异性酶切位点,将N基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,阳性重组质粒命名为pFastBacHTA-PPRV-N,测序结果显示N基因片段长度为1 578bp。将该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒Bacmid-PPRV-N,将该重组穿梭质粒在脂质体介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。通过SDS-PAGE和Western blot分析表明该蛋白得到表达产物,具有与抗体反应的活性,大小约为61.3ku。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 n基因 杆状病毒表达载体 昆虫细胞 表达
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猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH-la株N基因的分子克隆、序列测定及其比较分析 被引量:16
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作者 仇华吉 童光志 +5 位作者 郭宝清 王柳 张绍杰 王玫 于力 刘宝全 《中国畜禽传染病》 CSCD 1998年第4期217-220,共4页
根据已发表的PRRSVIAF-exp91株的核酸序列,设计了一对特异性引物,用RT-PCR扩增了PRRSVCH-la株的N基因,经补平和磷酸化后,克隆到pUC18SmaI位点上。经电泳分析、酶切和PCR鉴定证实后,进... 根据已发表的PRRSVIAF-exp91株的核酸序列,设计了一对特异性引物,用RT-PCR扩增了PRRSVCH-la株的N基因,经补平和磷酸化后,克隆到pUC18SmaI位点上。经电泳分析、酶切和PCR鉴定证实后,进行序列测定。序列分析表明CH-la株与IAF-exp91株(美洲型)N基因核苷酸同一性为93.2%,氨基酸同一性高达96.7%,而与LV株(欧洲株)核苷酸同一性为63%,氨基酸同一性仅为59%。其推导氨基酸残基分子量为13.3kDa。根据CH-la株N基因推导的氨基酸残基缺少欧洲型毒株LV特有的两个氨基酸片段,表明CH-1a株与IAF-exp91株同源性高于它与LV株的同源性,而且CH-1a株与鼠乳糖脱氢酶增高症病毒(LDV)在进化关系上比LV株与LDV更密切。CH-1a株N基因推导的氨基酸残基N-端1/2段约26%是由Arg、Lys和His这3种氨基酸组成的,其疏水性侧像图与LV株和VR-2332株(美洲型)几乎相同,这表明两种基因型的核衣壳蛋白(N蛋白)具有一定的保守性。由于N蛋白是PRRSV所有结构蛋白中免疫原性比较强的病毒蛋白,是现行血清学试验的抗原基础,因此N基因的分子克隆为研制PRR? 展开更多
关键词 猪病 生殖-呼吸道 综合征 PRRSV n基因 分子克隆
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水疱性口炎病毒N基因原核表达载体的构建及表达 被引量:4
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作者 郑增忍 王海霞 +3 位作者 龚振华 张彦明 李葳 刘俊辉 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2004年第5期5-8,共4页
 针对水疱性口炎病毒(VSV)N基因设计特异性引物,在引物中分别加入EcoR 和Xho 酶切位点。RT-PCR扩增后得到目的基因,将其克隆到表达载体pET30c,连接产物转化于DH5α菌株,在含Kan+的平板上37℃培养24h,然后挑取白色菌落,鉴定为阳性者,转...  针对水疱性口炎病毒(VSV)N基因设计特异性引物,在引物中分别加入EcoR 和Xho 酶切位点。RT-PCR扩增后得到目的基因,将其克隆到表达载体pET30c,连接产物转化于DH5α菌株,在含Kan+的平板上37℃培养24h,然后挑取白色菌落,鉴定为阳性者,转化于BL21菌株,再经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导获得高效表达。表达融合蛋白分子质量为53ku(目的蛋白大约47ku),同预期蛋白大小相近。Westernblot检测表明,其能与本病毒阳性血清发生特异性反应,表达蛋白有望成为有价值的VSV诊断抗原。 展开更多
关键词 水疱性口炎病毒 n基因 原核表达载体 诊断 抗原 水疱性口炎
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福建省狂犬病毒的N基因序列分析 被引量:4
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作者 张建明 王灵岚 +7 位作者 严延生 李世清 林代华 李述扬 杨秀惠 邓艳琴 何似 陈阳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期515-518,共4页
目的了解福建省狂犬病毒流行毒株的基因分型和遗传进化关系,以及流行毒株与疫苗株在N基因核苷酸和氨基酸水平的差异。方法采集福建省不同时间、不同地区的犬脑组织标本共89份,通过RT-nested-PCR扩增、纯化、克隆、测序,获得19条包含N基... 目的了解福建省狂犬病毒流行毒株的基因分型和遗传进化关系,以及流行毒株与疫苗株在N基因核苷酸和氨基酸水平的差异。方法采集福建省不同时间、不同地区的犬脑组织标本共89份,通过RT-nested-PCR扩增、纯化、克隆、测序,获得19条包含N基因全长的序列,采用生物学软件进行序列整理分析。结果根据N基因核苷酸和推导的氨基酸的同源性,把福建省已知狂犬病毒分为3个群组,群组间具有显著的地域分布特征,各群组内部N基因核苷酸和氨基酸同源性分别在99.7%~100%和98.9%~100%之间,群组间N基因核苷酸和氨基酸同源性在86.4%~89.3%和95.3%~98.4%之间。福建省狂犬病毒的流行毒株与目前使用的各种疫苗株N基因序列同源性在86.5%~98.9%之间。结论福建省境内存在表观健康犬携带狂犬病毒现象,福建省已知狂犬病毒流行毒株均属于基因I型,可分为3个群组。从N基因序列的分析上看,我省目前使用疫苗能有效地保护流行毒株的感染。 展开更多
关键词 狂犬病毒 n基因 序列分析
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鸡肾型IBV地方分离株N基因的克隆及分子遗传变异分析 被引量:5
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作者 王晶钰 邓小敏 +3 位作者 张彦明 罗艳 李鹏 郭抗抗 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第5期50-54,58,共6页
用RT-PCR方法对分离于陕西省不同地区的8个鸡肾型IBV毒株的Ⅳ基因分别进行了扩增,将各扩增产物与T载体连接后,转化感受态细胞筛选阳性克隆质粒并进行基因测序,用DNAstar软件将这8个毒株与GenBank收录的7个IBV代表毒株的Ⅳ基因进行了比... 用RT-PCR方法对分离于陕西省不同地区的8个鸡肾型IBV毒株的Ⅳ基因分别进行了扩增,将各扩增产物与T载体连接后,转化感受态细胞筛选阳性克隆质粒并进行基因测序,用DNAstar软件将这8个毒株与GenBank收录的7个IBV代表毒株的Ⅳ基因进行了比较分析,研究了其变异情况。结果表明,B01,YL,WH和 YX株与7株代表毒株的同源性较高,而G,BJ,WG,FF株与7个代表毒株的同源性相对较低。氨基酸推导序列比对结果表明,N蛋白突变以散在的点突变形式为主,其中46,48,50,75,78,189,232,236,237,299,301,350,366等位点容易发生突变,突变位点无明显规律性。 展开更多
关键词 肾型传染性支气管炎病毒 地方分离株 n基因 序列分析
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小反刍兽疫病毒N基因的原核表达 被引量:9
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作者 阮洋 秦峻岭 +8 位作者 高玉伟 孙玮 张涛 杨玉姣 杨松涛 王承宇 王铁成 黄耕 夏咸柱 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期21-25,共5页
目的是表达出小反刍兽疫病毒的核蛋白,并鉴定其活性。根据GenBank发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列,对其进行基因优化并合成。设计引物,利用PCR的方法扩增PPRV-N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中... 目的是表达出小反刍兽疫病毒的核蛋白,并鉴定其活性。根据GenBank发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列,对其进行基因优化并合成。设计引物,利用PCR的方法扩增PPRV-N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET-28a-N。阳性质粒转化原核表达宿主菌Transetta(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间、温度。通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析确定表达蛋白的表达量和活性。扩增出PPRV-N基因,构建的原核表达载体pET-28a-N和原核表达菌,表达了N蛋白,表达蛋白能与PPRV阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒n基因 原核表达 SDS-PAGE电泳 WESTERn-BLOT
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小反刍兽疫病毒N基因的克隆及原核表达 被引量:6
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作者 艾军 杨建明 +5 位作者 叶玲玲 杨晓花 张其艳 董俊 孙洪正 周晓黎 《动物医学进展》 CSCD 2008年第5期1-3,共3页
根据小反刍兽疫病毒疫苗株Nigeria75/1的全基因序列,通过PCR方法,将N基因亚克隆入pBAD/TOPO表达载体,构建了原核表达质粒pBAD-PPRN。该重组质粒转化至大肠埃希菌TOP10中,经L-Arabinose诱导,SDS-PAGE和Western blot检测,表达的重组N蛋白... 根据小反刍兽疫病毒疫苗株Nigeria75/1的全基因序列,通过PCR方法,将N基因亚克隆入pBAD/TOPO表达载体,构建了原核表达质粒pBAD-PPRN。该重组质粒转化至大肠埃希菌TOP10中,经L-Arabinose诱导,SDS-PAGE和Western blot检测,表达的重组N蛋白分子质量与预期的73.6ku一致,为以小反刍兽疫N蛋白为抗原的诊断试剂盒研制奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 n基因 原核表达
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抗转Bt基因棉棉铃虫幼虫中肠氨肽酶N基因的克隆与序列特征 被引量:5
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作者 苏建亚 周晓梅 +1 位作者 张天翼 沈晋良 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2004年第1期13-20,共8页
通过对抗性和敏感棉铃虫中肠氨肽酶的克隆和测序,鉴定了氨肽酶基因家族的2个成员:Haapn3和Haapn4,其cDNA序列具有3053和2862个核苷酸,分别具有3045和2853bp的开放阅读框,编码产生1014和951个氨基酸的蛋白质。其推定氨基酸序列均具有锌... 通过对抗性和敏感棉铃虫中肠氨肽酶的克隆和测序,鉴定了氨肽酶基因家族的2个成员:Haapn3和Haapn4,其cDNA序列具有3053和2862个核苷酸,分别具有3045和2853bp的开放阅读框,编码产生1014和951个氨基酸的蛋白质。其推定氨基酸序列均具有锌结合模体HEXXH和所有锌依赖氨肽酶共有的序列GAMEN。N 末端分别具有18和20个氨基酸的疏水性信号肽,C 末端均具有21个氨基酸的GPI添加信号肽。比对抗性和敏感棉铃虫cDNA的开放阅读框,在Haapn3的开放阅读框中,抗性品系的cDNA具有25个核苷酸的不同,其中9个碱基替代造成氨基酸的变化:苏氨酸189→天冬酰胺、甘氨酸229→天冬氨酸、赖氨酸231→精氨酸、谷氨酸250→丙氨酸、异亮氨酸275→缬氨酸、天冬酰胺281→天冬氨酸、酪氨酸302→组氨酸、缬氨酸648→异亮氨酸、脯氨酸975→谷氨酰胺,其它16个碱基替代为无义突变。在Haapn4的开放阅读框中,有15个点突变,其中8个突变为无义突变,其它7个导致了氨基酸的改变,即赖氨酸4→天冬酰胺、组氨酸162→酪氨酸、脯氨酸185→丝氨酸、谷氨酸297→甘氨酸、苯丙氨酸385→丝氨酸、甲硫氨酸450→异亮氨酸、缬氨酸630→异亮氨酸。本文报道的氨肽酶4个cDNA序列已提交GenBank,AY279536和AY279537分别是抗性和敏感品系的Haapn3。 展开更多
关键词 抗转Bt基因 棉铃虫 幼虫 氨肽酶 n基因 基因克隆 序列分析
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高温介导N基因对TMV免疫丧失的代谢轮廓分析 被引量:3
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作者 刘旭 王耀峰 +5 位作者 余广宏 宋玉川 王杰 申莉莉 王凤龙 杨金广 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第2期84-92,共9页
高温(>28℃)可引起含N基因的免疫寄主对TMV抗性丧失,导致TMV系统侵染。本研究以枯斑三生(Nicotianatabacum var.Samsun NN)烟草为研究材料,采用代谢组学方法,系统研究25℃和31℃条件下,TMV未侵染和TMV侵染12 h、24 h和48 h枯斑三生... 高温(>28℃)可引起含N基因的免疫寄主对TMV抗性丧失,导致TMV系统侵染。本研究以枯斑三生(Nicotianatabacum var.Samsun NN)烟草为研究材料,采用代谢组学方法,系统研究25℃和31℃条件下,TMV未侵染和TMV侵染12 h、24 h和48 h枯斑三生烟草的代谢差异。应用气相色谱与质谱联用(GC-MS)技术,结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析法(OPLS-DA)对不同温度下代谢产物的差异性进行分析。结果表明:GC-MS技术共检测到49种代谢物包括氨基酸类、糖类、有机酸类、脂肪酸类、醇类以及多胺类等。在25℃常温条件下,TMV侵染枯斑三生烟引起苹果酸、水杨酸、γ-氨基丁酸、脯氨酸和乙醇胺等代谢物含量上调,而在31℃高温处理N基因失活后,TMV侵染导致组织蔗糖和肌醇含量下调、葡萄糖和果糖含量上调以及伴随氨基酸类含量普遍上调。 展开更多
关键词 TMV 代谢 n基因
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猪流行性腹泻病毒云南流行毒株N基因序列分析 被引量:5
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作者 宋聪 刘宁 +5 位作者 李美荃 石於友 李华春 高林 杨荣丽 姚俊 《动物医学进展》 北大核心 2016年第5期15-19,共5页
为了解近年来云南省PEDV流行毒株的变异情况,选取了采集自昆明西翥、富源、厂口、玉溪红塔等地方猪场的不同时间的6份PEDV阳性水样腹泻粪便样品,进行N基因的RT—PCR扩增、测序及序列分析。结果表明,来自同一猪场不同流行时间的TY1、... 为了解近年来云南省PEDV流行毒株的变异情况,选取了采集自昆明西翥、富源、厂口、玉溪红塔等地方猪场的不同时间的6份PEDV阳性水样腹泻粪便样品,进行N基因的RT—PCR扩增、测序及序列分析。结果表明,来自同一猪场不同流行时间的TY1、TY2、TY3毒株之间,TY1与TY2毒株N基因核苷酸序列完全相同,仅TY3毒株在第80和第1238位置处的碱基发生了变异(A—C、C—T),TY3与TY1、TY2的毒株N基因核苷酸序列的同源性达99.8%。云南6个流行毒株TY1、TY2、TY3、YXHT、FYDH及Changkou的核苷酸序列的同源性为99.2%~100%。云南6个流行毒株与2014年德国毒株GER—L00721—2014(Accession:LM645057.1)、法国毒株KR011756-FR001—2014(Accession:KR011756.1)及我国2010年河北毒株JF700126.1-HB—HS-2010(Accession:LM645057.1)的核苷酸序列同源性为98.6%~100%,并同属于一个进化分支。云南6个流行毒株与CV777经典疫苗毒株之间的同源性仅为95.2%~95.5%,存在一定的变异,这或许是云南省猪群经PEDV疫苗免疫后保护率较低的原因之一。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 n基因 序列分析 云南株
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