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水禽细小病毒LAMP及其可视化通用检测方法的建立
1
作者 戴银 周慧琴 +9 位作者 谷思琴 胡晓苗 王洁茹 殷冬冬 尹磊 沈学怀 潘孝成 赵瑞宏 周学利 侯宏艳 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期63-68,共6页
为了建立鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)通用的检测方法,本试验以GPV和MDPV两种水禽细小病毒的NS基因保守序列作为靶标,设计了1组特异性引物,优化建立了水禽细小病毒的环介导等温扩增(LAMP)和LAMP-羟基萘酚蓝(HNB)可视化通用检测... 为了建立鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)通用的检测方法,本试验以GPV和MDPV两种水禽细小病毒的NS基因保守序列作为靶标,设计了1组特异性引物,优化建立了水禽细小病毒的环介导等温扩增(LAMP)和LAMP-羟基萘酚蓝(HNB)可视化通用检测方法,并对2种方法的特异性和灵敏性进行检测。采用常规PCR、LAMP和LAMP-HNB对10份水禽临床样品进行检测,以评估2种方法的实用性。结果显示,LAMP方法的最佳反应温度为65℃、反应时间为60 min。2种方法仅能扩增GPV和MDPV,而对其他5种常见水禽病毒的检测结果均为阴性,最低检出浓度均为1×10-5ng/μL。2种方法与常规PCR的检测结果一致,符合率达100%。结果表明,建立的LAMP方法和LAMP-HNB可视化方法具有灵敏性好、特异性高、仪器要求低和可视化等优点,可为水禽细小病毒的现场快速检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 鹅细小病毒(GPV) 番鸭细小病毒(mdpv) NS基因 环介导等温扩增(LAMP) 可视化
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GPV·MDPV和FAdV-4三重PCR检测方法的建立 被引量：1
2
作者 戴银 胡晓苗 +6 位作者 赵瑞宏 张丹俊 潘孝成 沈学怀 尹磊 周学利 侯宏艳 《安徽农业科学》 CAS 2021年第15期183-184,187,共3页
[目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法。[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核... [目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法。[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核酸为模板,进行PCR特异性、敏感性和重复性试验。[结果]采用所建立的方法能够扩增出GPV、MDPV和FAdV-4特异性片段,且不能检出鸭黄病毒(DFV)、鸭I型肝炎病毒(DVH-Ⅰ)和禽呼肠孤病毒(ARV);GPV、MDPV和FAdV-4核酸模板的最低检测量分别为20、2、2 pg;对8份阳性临床病料进行检测,可见MDPV、GPV和FAdV-4的检出率均为100%。[结论]建立的三重PCR检测方法能够对MDPV、GPV和FAdV-4这3种病毒进行快速、准确的诊断。 展开更多
关键词 鹅细小病毒(GPV) 番鸭细小病毒(mdpv) 禽腺病毒4型(FAdV-4) 三重PCR检测
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MDPV和MDGPV母源抗体对MDPV-MDGPV二联活疫苗抗体水平影响的研究
3
作者 程晓霞 林锋强 +4 位作者 陈仕龙 朱小丽 王劭 肖世峰 陈少莺 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期281-286,共6页
为明确番鸭细小病毒(MDPV)和番鸭小鹅瘟病毒(MDGPV)母源抗体对免疫MDPV-MDGPV二联活疫苗(下称“二联活疫苗”)番鸭抗体水平的影响,本研究将二联活疫苗分别免疫1日龄不同母源抗体水平的雏番鸭,并设非免疫对照组,分别于免疫前和免疫后不... 为明确番鸭细小病毒(MDPV)和番鸭小鹅瘟病毒(MDGPV)母源抗体对免疫MDPV-MDGPV二联活疫苗(下称“二联活疫苗”)番鸭抗体水平的影响,本研究将二联活疫苗分别免疫1日龄不同母源抗体水平的雏番鸭,并设非免疫对照组,分别于免疫前和免疫后不同时间点连同非免疫对照组同时采血,采用乳胶凝集抑制试验(LPAI)分别测定各组雏番鸭血清中MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体效价。并按雏番鸭母源抗体高低分组即:MDPV母源抗体阴性组(<1 log2,A组)、MDPV低母源抗体组(1 log2~3 log2,B组)、MDPV高母源抗体组(4 log2~6 log2,C组)、MDGPV母源抗体阴性组(<1 log2,D组)、MDGPV低母源抗体组(1 log2~3 log2,E组)和MDGPV高母源抗体组(4 log2~6 log2,F组),根据LPAI抗体检测结果分析各免疫组抗体水平变化和非免疫对照组母源抗体消长规律。结果显示:免疫二联活疫苗均可诱导1日龄雏番鸭产生不同水平的LPAI抗体,免疫后7 d(7 dpi)MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体均100%阳性,随后逐渐升高至28 dpi达峰值;其中,7 dpi~28 dpi母源抗体阴性组(A组和D组)的MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体快速升高且明显高于母源抗体阳性组(B组、C组、E组和F组);1 dpi~5 dpi母源抗体阳性组(B组、C组、E组和F组)因母源抗体未衰减,其MDPV LPAI和MDGPV LPAI效价均高于母源抗体阴性组(A组和D组)。非免疫对照组番鸭母源抗体消长分析结果显示不同母源抗体衰减期存在差异,随着日龄增长母源抗体逐渐下降,低母源抗体组(1 log2~3 log2)和高母源抗体组(4 log2~6 log2)分别在8日龄和15日龄时均有80%左右番鸭MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体转为阴性。上述结果表明低母源抗体对1日龄雏番鸭二联活疫苗抗体的产生无明显影响,而高母源抗体对番鸭抗体峰值有一定影响,建议高母源抗体雏番鸭可适当推迟至5日龄免疫。本研究为该二联活疫苗免疫程序的制定提供了科学依据。 展开更多
关键词 1日龄雏番鸭 母源抗体 mdpv-MDGPV二联活疫苗 LPAI抗体
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番鸭小鹅瘟病毒的分离与鉴定 被引量：31
4
作者 程晓霞 陈少莺 +5 位作者 朱小丽 陈仕龙 林锋强 王劭 程由铨 林天龙 《福建农业学报》 CAS 2008年第4期355-358,共4页
从临床表现腹泻、肠粘膜脱落形成栓塞为特征的发病雏番鸭肝、脾中分离到2株病毒(命名为GPV-PT株和GPV-F株),分离株在间接免疫荧光抗体试验(IFA)和琼脂扩散沉淀(AGP)试验中只与GPV单抗反应,与MPV、NDV、IBDV单抗和DHV阳性血清均不发生反... 从临床表现腹泻、肠粘膜脱落形成栓塞为特征的发病雏番鸭肝、脾中分离到2株病毒(命名为GPV-PT株和GPV-F株),分离株在间接免疫荧光抗体试验(IFA)和琼脂扩散沉淀(AGP)试验中只与GPV单抗反应,与MPV、NDV、IBDV单抗和DHV阳性血清均不发生反应;电镜观察见到实心和空心两种粒子,无囊膜,圆形,呈立体对称,直径20～24 nm;分离株无血凝活性;对紫外线和胰蛋白酶均不敏感;对番鸭胚的ELD50为lg6.5;雏番鸭人工感染病毒后出现与自然病例相似的症状,并回收到病毒。上述结果表明分离的2株病毒均为番鸭小鹅瘟病毒。 展开更多
关键词 雏番鸭 小鹅瘟病毒 分离 鉴定
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新型番鸭细小病毒的发现及其感染的临床表现 被引量：21
5
作者 黄瑜 万春和 +7 位作者 傅秋玲 陈红梅 傅光华 陈翠腾 程龙飞 程小兵 施少华 林建生 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2015年第5期442-445,共4页
2008年下半年以来,福建省、浙江省、安徽省及江苏省等地部分鸭场或养鸭户的雏半番鸭和台湾白鸭出现低病死率,约于40日龄起脚易断、上喙变短占近30%,至出栏时残次鸭达60%;免疫接种了雏番鸭细小病毒弱毒活疫苗的雏番鸭依然发生类雏番鸭&qu... 2008年下半年以来,福建省、浙江省、安徽省及江苏省等地部分鸭场或养鸭户的雏半番鸭和台湾白鸭出现低病死率,约于40日龄起脚易断、上喙变短占近30%,至出栏时残次鸭达60%;免疫接种了雏番鸭细小病毒弱毒活疫苗的雏番鸭依然发生类雏番鸭"三周病",除出现死亡外,幸存鸭的番鸭翅脚易断、上喙变短,83%感染鸭成为僵鸭,对我国养鸭业造成了较大的直接经济损失。经病原学检测、病毒分离鉴定和实验室感染试验,发现其病原为与原经典的雏番鸭细小病毒(MDPV)在基因组上、感染宿主范围和致病性存在较大差异的番鸭细小病毒,鉴于此,将之暂定名为新型番鸭细小病毒(NMDPV)。 展开更多
关键词 新型番鸭细小病毒 雏番鸭 雏半番鸭 临床感染 上喙变短
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雏番鸭细小病毒病病毒分离鉴定 被引量：2
6
作者 刘惠莉 李震 +3 位作者 王英 张平 丁卫星 韦涛荣 《上海农业学报》 CSCD 2001年第1期54-58,共5页
采集以腹泻、呼吸困难为主要症状的雏番鸭肝、脾病料 ,接种 14d龄非免疫番鸭胚 ,80 %胚在 3～ 7d死亡 ,胚体呈弥漫性充血、出血。接种番鸭胚成纤维原代细胞 72h可见细胞圆缩、聚团等变化。收集尿囊液及细胞培养物 ,以番鸭细小病毒 (Musc... 采集以腹泻、呼吸困难为主要症状的雏番鸭肝、脾病料 ,接种 14d龄非免疫番鸭胚 ,80 %胚在 3～ 7d死亡 ,胚体呈弥漫性充血、出血。接种番鸭胚成纤维原代细胞 72h可见细胞圆缩、聚团等变化。收集尿囊液及细胞培养物 ,以番鸭细小病毒 (Muscovyducklingparvovirus ,MDPV)阳性血清进行聚苯乙烯乳胶凝集 ,病料培养物均呈阳性反应 ,提取病料接种的尿囊液及细胞基因组DNA ,用自行设计引物PCR扩增到与设计相符的 60 0bp片段 ,经酶切鉴定 ,结果表明克隆到的片段为雏番鸭细小病毒特异性片段 。 展开更多
关键词 雏番鸭细小病毒病 PCR 病毒 分离鉴定
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雏番鸭细小病毒病研究进展 被引量：11
7
作者 娄高明 杜伟贤 陈建红 《广东畜牧兽医科技》 1999年第2期3-8,共6页
雏番鸭细小病毒病是由雏番鸭细心病毒引起幼龄番鸭的一种新的番鸭疫病。该病于1980年在中国首次报道。本病因日龄不同而异，3周龄以下的雏番鸭主要是急性感染，主要症状是喘气、厌食、腹泻、脱水、迅速消瘦、死亡率高，特征病变是胰炎... 雏番鸭细小病毒病是由雏番鸭细心病毒引起幼龄番鸭的一种新的番鸭疫病。该病于1980年在中国首次报道。本病因日龄不同而异，3周龄以下的雏番鸭主要是急性感染，主要症状是喘气、厌食、腹泻、脱水、迅速消瘦、死亡率高，特征病变是胰炎、肠炎和肝炎。3周龄以上的番鸭主要是慢性感染。雏番鸭细小病毒与小鹅瘟病毒均属于细小病毒科，其理化特性和基因组结构非常相似，常规的病毒分离和血清学诊断方法不能区分雏番鸭细小病毒与小鹏瘟病毒感染。本文综述了雏番鸭细小病毒病近来在病原学、流行病学、病理学、临床诊断、预防与治疗及其分子生物学等方面的研究进展。 展开更多
关键词 雏番鸭 细小病毒病 鸭
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应用PCR快速诊断番鸭细小病毒病和小鹅瘟 被引量：13
8
作者 宋永峰 温纳相 +5 位作者 宋延华 周丽 黎敏 周全 管凤霞 高恒 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第5期49-52,共4页
根据GenBank中已发表的番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)全序列,分别设计并合成特异性引物MDPVF/R和GPVF/R,对细小病毒属成员GPV、MDPV、犬细小病毒(CPV)及鸭常见病毒病病原如鸭瘟病毒(DPV)、鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭呼肠病毒(DRV... 根据GenBank中已发表的番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)全序列,分别设计并合成特异性引物MDPVF/R和GPVF/R,对细小病毒属成员GPV、MDPV、犬细小病毒(CPV)及鸭常见病毒病病原如鸭瘟病毒(DPV)、鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭呼肠病毒(DRV)、流感病毒(AIV)的核酸进行PCR扩增。结果表明,引物特异性良好,引物MDPVF/R只能特异性扩增出MDPV的714 bp基因片段,引物GPVF/R只能特异性扩增出GPV的570 bp基因片段;敏感性试验结果表明,MDPV DNA最低检出量为17.5 pg,GPV DNA最低检出量为13.7 pg。该方法的建立对这两种疾病的鉴别诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 PCR 鉴别诊断 番鸭细小病毒 鹅细小病毒
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番鸭细小病毒分离鉴定 被引量：1
9
作者 刘惠莉 李震 +2 位作者 王英 张平 丁卫星 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期98-100,共3页
采集以腹泻、呼吸困难为主要症状的雏番鸭肝、脾病料，接种１４日龄非免疫番鸭胚，８０％胚在３－７天死亡，胚体呈弥漫性充血、出血。接种番鸭胚成纤维原代细胞７２小时可见细胞圆缩、聚团等变化。聚苯乙烯乳胶凝集试验呈阳性，提取病... 采集以腹泻、呼吸困难为主要症状的雏番鸭肝、脾病料，接种１４日龄非免疫番鸭胚，８０％胚在３－７天死亡，胚体呈弥漫性充血、出血。接种番鸭胚成纤维原代细胞７２小时可见细胞圆缩、聚团等变化。聚苯乙烯乳胶凝集试验呈阳性，提取病毒接种细胞及尿囊液 ＤＮＡ，用自行设计引物扩增到与设计相符的 ６００ｂｐ片段，克隆至 Ｔ载体，经酶切及序列分析表明我们所分离到的病毒为雏番鸭细小病毒（Ｍｕｓｃｏｖｙ　 Ｄｕｃｋｉｌｉｎｇ　 Ｐａｖｏｖｉｒｕｓ，ＭＰＶ）。 展开更多
关键词 雏番鸭细小病毒 聚苯乙烯乳胶凝集试验 PCR扩增
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