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桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白基因的原核表达与免疫检测
被引量：
2
1
作者
卢全有
吴祖建
+1 位作者
夏志松
谢联辉
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期218-225,共8页
桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V)是从发生桑花叶卷叶病的桑树植株中分离的一种线虫传多面体病毒属(Nepovirus)病毒,推测其外壳蛋白的分子质量约59 k D。以感染MMLRa V的桑树叶片的c DNA为模...
桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V)是从发生桑花叶卷叶病的桑树植株中分离的一种线虫传多面体病毒属(Nepovirus)病毒,推测其外壳蛋白的分子质量约59 k D。以感染MMLRa V的桑树叶片的c DNA为模板,采用RT-PCR获得编码该病毒外壳蛋白C端38 k D的核苷酸序列片段,暂命名为CP38。将CP38连接到原核表达载体构建重组表达载体p GEX-4T-CP38,转化大肠杆菌BL21(DE3)并经1 mmol/L IPTG诱导,使融合蛋白GST-CP38高效表达。通过SDS-PAGE胶回收原核表达的融合蛋白,以其为抗原免疫新西兰大白兔制备MMLRa V的多克隆抗血清,采用间接ELISA法测定该抗血清的效价为1∶2 048,Western blot检测其能够与MMLRa V发生特异性反应。用制备的抗血清对感病桑树叶片粗汁液煮沸后离心获得的上清液进行间接ELISA检测,MMLRa V的检出率达到84%,可以应用于大田病样的检测。
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关键词
桑花叶卷叶病相关病毒
外壳蛋白基因
原核表达
抗血清
酶联免疫吸附试验间接法
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职称材料
利用深度测序技术鉴定疑似桑花叶卷叶病感病桑树叶片中的相关病毒
2
作者
苏秀
陈莎
+2 位作者
朱诚棋
周湘
马良进
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期576-582,共7页
植物通过小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰机制来防御外来病毒感染,通过对感病植物材料小RNA(sRNA)的深度测序,获得这一过程中产生的与病毒序列高度一致的siRNA序列信息,可以快速地鉴定侵染植物的病毒组成。以采集自浙江省桐乡市桑园疑似...
植物通过小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰机制来防御外来病毒感染,通过对感病植物材料小RNA(sRNA)的深度测序,获得这一过程中产生的与病毒序列高度一致的siRNA序列信息,可以快速地鉴定侵染植物的病毒组成。以采集自浙江省桐乡市桑园疑似感染桑花叶卷叶病(原称桑花叶型萎缩病)的桑树叶片为材料提取总RNA,构建sRNA文库并进行深度测序,对测序得到的总sRNA进行组装后,比对鉴定出桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V),并分别得到占MMLRa V 2个组分全基因组14.19%和21.86%的核酸序列。进一步以感病桑叶组织的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得部分MMLRa V基因组序列,经Sanger测序确定采集的感病桑树叶片中只存在MMLRa V。通过生物信息学方法分析表明,MMLRa V来源siRNA在基因组中的长度分布、5'端碱基偏好性及热点区分布等具有明显特点。研究结果显示,利用siRNA深度测序技术鉴定桑树病毒是非常高效的手段。
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关键词
桑花叶卷叶病相关病毒
深度测序
小干扰RNA
生物信息学分析
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职称材料
题名
桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白基因的原核表达与免疫检测
被引量：
2
1
作者
卢全有
吴祖建
夏志松
谢联辉
机构
福建省植物病毒学重点实验室福建农林大学
农业部蚕桑遗传改良重点实验室江苏科技大学
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期218-225,共8页
基金
国家重点基础研究发展计划"973"项目(No.2014CB1384-02)
文摘
桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V)是从发生桑花叶卷叶病的桑树植株中分离的一种线虫传多面体病毒属(Nepovirus)病毒,推测其外壳蛋白的分子质量约59 k D。以感染MMLRa V的桑树叶片的c DNA为模板,采用RT-PCR获得编码该病毒外壳蛋白C端38 k D的核苷酸序列片段,暂命名为CP38。将CP38连接到原核表达载体构建重组表达载体p GEX-4T-CP38,转化大肠杆菌BL21(DE3)并经1 mmol/L IPTG诱导,使融合蛋白GST-CP38高效表达。通过SDS-PAGE胶回收原核表达的融合蛋白,以其为抗原免疫新西兰大白兔制备MMLRa V的多克隆抗血清,采用间接ELISA法测定该抗血清的效价为1∶2 048,Western blot检测其能够与MMLRa V发生特异性反应。用制备的抗血清对感病桑树叶片粗汁液煮沸后离心获得的上清液进行间接ELISA检测,MMLRa V的检出率达到84%,可以应用于大田病样的检测。
关键词
桑花叶卷叶病相关病毒
外壳蛋白基因
原核表达
抗血清
酶联免疫吸附试验间接法
Keywords
mulberry
mosaic
leaf
roll-associated
virus（
MMLRa V）
Coat protein
Prokaryotic expression
Antiserum
Indirect-enzyme-linked immunosorbent assay
分类号
S888.71 [农业科学—特种经济动物饲养]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
利用深度测序技术鉴定疑似桑花叶卷叶病感病桑树叶片中的相关病毒
2
作者
苏秀
陈莎
朱诚棋
周湘
马良进
机构
浙江农林大学林业与生物技术学院
园艺作物病虫害治理湖南省重点实验室湖南省植物保护研究所湖南省农业科学院
华南农业大学林学院
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期576-582,共7页
基金
浙江省重中之重林学一级学科开放基金项目(No.KF201-330)
浙江省教育厅一般科研项目(No.Y201431042)
文摘
植物通过小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰机制来防御外来病毒感染,通过对感病植物材料小RNA(sRNA)的深度测序,获得这一过程中产生的与病毒序列高度一致的siRNA序列信息,可以快速地鉴定侵染植物的病毒组成。以采集自浙江省桐乡市桑园疑似感染桑花叶卷叶病(原称桑花叶型萎缩病)的桑树叶片为材料提取总RNA,构建sRNA文库并进行深度测序,对测序得到的总sRNA进行组装后,比对鉴定出桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V),并分别得到占MMLRa V 2个组分全基因组14.19%和21.86%的核酸序列。进一步以感病桑叶组织的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得部分MMLRa V基因组序列,经Sanger测序确定采集的感病桑树叶片中只存在MMLRa V。通过生物信息学方法分析表明,MMLRa V来源siRNA在基因组中的长度分布、5'端碱基偏好性及热点区分布等具有明显特点。研究结果显示,利用siRNA深度测序技术鉴定桑树病毒是非常高效的手段。
关键词
桑花叶卷叶病相关病毒
深度测序
小干扰RNA
生物信息学分析
Keywords
mulberry mosaic leaf roll-associated virus（mmlrav）
Deep sequencing
Small interfering RNA（siRNA）
Bioinformatics analysis
分类号
S888.71 [农业科学—特种经济动物饲养]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白基因的原核表达与免疫检测
卢全有
吴祖建
夏志松
谢联辉
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
利用深度测序技术鉴定疑似桑花叶卷叶病感病桑树叶片中的相关病毒
苏秀
陈莎
朱诚棋
周湘
马良进
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
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职称材料
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