microRNA-133b调节FOXL2基因的表达促进Hela细胞的增殖 被引量：2

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作者 胡飞 刘俊 +4 位作者 李亚玲 梁惠宇 姚永明 张伟 唐胜建 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第2期174-177,共4页

目的:探讨micro RNA-133b(mi R-133b)是否调控FOXL2基因的表达,阐明mi R-133b及FOXL2在Hela细胞(宫颈癌细胞)中的具体作用机制。方法:生物信息学方法分析mi R-133b是否靶向作用于FOXL2基因。体外培养Hela细胞,分实验组(mi R-133b组)和... 目的:探讨micro RNA-133b(mi R-133b)是否调控FOXL2基因的表达,阐明mi R-133b及FOXL2在Hela细胞(宫颈癌细胞)中的具体作用机制。方法:生物信息学方法分析mi R-133b是否靶向作用于FOXL2基因。体外培养Hela细胞,分实验组(mi R-133b组)和对照组(negative control组,NC组),分别瞬时转染mi R-133b及NC mimics,48 h后用Trizol及RIPA法分别提取细胞总RNA及总蛋白,RT-PCR技术检测两组FOXL2 m RNA的表达水平,Western Blot技术检测两组FOXL2蛋白的表达水平,MTT法连续7 d分别测两组Hela细胞的增殖活力。结果:mi R-133b可能作用于FOXL2 m RNA 3′UTR区域。实验组FOXL2m RNA和FOXL2蛋白表达水平较对照组均明显降低(P<0.01),实验组Hela细胞的增殖活力较对照组明显增强(P<0.01)。结论:过表达的mi R-133b通过结合并影响Hela细胞中FOXL2 m RNA靶向抑制FOXL2蛋白的表达促进Hela细胞的增殖,这可能为宫颈癌的诊疗提供作用靶点。 展开更多

关键词 FOXL2 MI R-133b 宫颈癌

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B7-H3和CD133在结直肠癌患者预后预测中的价值

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作者 黄丽娜 唐令 +3 位作者 宋斌华 卢高峰 马玖玥 刘揆亮 《中国肿瘤临床》 北大核心 2025年第8期386-391,共6页

目的:检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)、绒毛状/管状绒毛状腺瘤、管状腺瘤、非腺瘤性息肉及正常肠黏膜中B7-H3及CD133表达情况,评估其在CRC发生、发展及预后预测中的价值。方法:回顾性分析郑州大学第二附属医院2012年10月至2017年... 目的:检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)、绒毛状/管状绒毛状腺瘤、管状腺瘤、非腺瘤性息肉及正常肠黏膜中B7-H3及CD133表达情况,评估其在CRC发生、发展及预后预测中的价值。方法:回顾性分析郑州大学第二附属医院2012年10月至2017年4月和蓬安县人民医院2017年1月至2019年5月手术或活检的195例CRC、76例绒毛状/管状绒毛状腺瘤、64例管状腺瘤、30例非腺瘤性息肉和10例正常肠黏膜标本,采用免疫组织化学法检测B7-H3及CD133在标本中的表达情况。纳入患者年龄、性别,免疫组织化学B7-H3、CD133、CEA染色作为危险因素,建立CRC生存预测模型。结果:B7-H3、CD133阳性及B7-H3/CD133双阳性表达在正常肠黏膜组、非腺瘤息肉组、管状腺瘤组、绒毛状/管状绒毛状腺瘤及CRC组呈逐渐上升趋势(P<0.05),并与腺瘤的大小相关。B7-H3、CD133在CRC组高表达,且与CRC的淋巴结转移、远处转移及生存期缩短相关(P<0.05)。在CRC生存预测模型的训练集和验证集中B7-H3、CD133的高表达均与CRC的生存期缩短相关,提示B7-H3和CD133在CRC的预测预后中具有较高的价值。结论:免疫调节因子B7-H3及肿瘤干细胞标志物CD133与CRC的不良预后相关,B7-H3及CD133可能成为CRC形成过程及预测预后的指标。 展开更多

关键词 b7-H3 CD133 结直肠癌 腺瘤 预后

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miR-133a/b和MRP1在耐药性癫痫患者外周血含量的观察 被引量：8

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作者 颜博 李国良 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期680-684,共5页

目的:探讨外周血中microRNA-133a/b(miR-133a/b)及多药耐药相关蛋白1(multidrug resistanceassociated protein 1,MRP1)的含量与癫痫患者耐药性的相关关系。方法:生物信息学预测靶向调控MRP1的miRNAs,构建MRP1野生型及突变型3’UTR报告... 目的:探讨外周血中microRNA-133a/b(miR-133a/b)及多药耐药相关蛋白1(multidrug resistanceassociated protein 1,MRP1)的含量与癫痫患者耐药性的相关关系。方法:生物信息学预测靶向调控MRP1的miRNAs,构建MRP1野生型及突变型3’UTR报告基因载体,双萤光素酶报告基因技术验证预测的miRNAs对MRP1的靶向调控作用。此外,收集95例接受药物治疗的癫痫患者(其中耐药患者37例,非耐药患者58例)外周血,实时荧光定量PCR检测外周血中这些miRNAs的含量,ELISA检测外周血中MRP1蛋白的含量。最后分析这些miRNAs及MRP1含量与癫痫耐药的相关性。结果:Target Scan软件预测miR-133a/b可能靶向调控MRP1,双萤光素酶报告基因技术发现,实验组(共转入miR-133a/b mimics、p MIR-MRP1及pRLTK质粒)较对照组(共转入scramble mimic、p MIR-MRP1及pRLTK质粒)相比,萤光素酶活性分别下调76.9%和64.1%(P<0.01);突变组(共转入miR-133a/b mimics、p MIR-mut-MRP1及pRLTK质粒)较实验组的萤光素酶活性分别上调3.61倍和2.04倍(P<0.01)。实时荧光定量PCR和ELISA检测发现:用药前非耐药性癫痫患者中miR-133a/b的含量分别是耐药性癫痫患者含量的2.18倍和1.74倍(P<0.05),而MRP1在耐药性癫痫患者中的含量是非耐药性癫痫患者中的3.72倍(P<0.01);用药后非耐药性癫痫患者中miR-133a/b的含量分别是耐药性癫痫患者含量的2.76倍和2.95倍(P<0.05),而MRP1在耐药性癫痫患者中的含量是非耐药性癫痫患者中4.99倍(P<0.01)。结论:miR-133a/b可直接靶向调控MRP1,且在耐药性癫痫患者血清中,miR-133a/b呈现低水平,MRP1蛋白呈现高水平,miR-133a/b联合MRP1有望成为早期诊断癫痫药物敏感性的指标。 展开更多

关键词 microrna-133a/b 多药耐药相关蛋白1 耐药性癫痫

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层状双氢氧化物负载si-NEAT1通过miR-133b/PD-L1轴调控乳腺癌紫杉醇耐药及巨噬细胞极化

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作者 张兆君 吴琼 +6 位作者 谢苗苗 叶洳吟 耿晨晨 石纪雯 杨清玲 王文锐 石玉荣 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第8期1718-1731,共14页

目的研究层状双氢氧化物(LDH)负载si-NEAT1对乳腺癌紫杉醇耐药及肿瘤相关巨噬细胞极化作用的分子机制。方法qRT-PCR、Western blotting检测乳腺癌亲本细胞(SKBR3)和紫杉醇耐药乳腺癌细胞(SKBR3-PR)中LncRNA NEAT1、miR-133b和PD-L1的表... 目的研究层状双氢氧化物(LDH)负载si-NEAT1对乳腺癌紫杉醇耐药及肿瘤相关巨噬细胞极化作用的分子机制。方法qRT-PCR、Western blotting检测乳腺癌亲本细胞(SKBR3)和紫杉醇耐药乳腺癌细胞(SKBR3-PR)中LncRNA NEAT1、miR-133b和PD-L1的表达;设置实验分组Control、si-NEAT1、miR-133b mimics,qRT-PCR、Western blotting检测SKBR3-PR中MRP、BCRP和PD-L1的表达,划痕、Transwell检测增殖迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡;采用si-NEAT1和miR-133b inhibitor进行Rescue实验;肿瘤细胞上清(CM)与巨噬细胞共培养,设置实验分组PBS、IL-4、PBS+SKBR3 CM、PBS+SKBR3-PR CM、IL-4+PR si-N CM,qRT-PCR检测M2型巨噬细胞标志物Arg-1、CD163、IL-10与miR-133b、PD-L1的表达,免疫荧光检测CD163与CD206;构建LDH@si-NEAT1纳米载体转染肿瘤细胞,设置分组Control、LDH、游离si-NEAT1、LDH@si-NEAT1,qRT-PCR、Western blotting、免疫荧光检测MRP、BCRP和PD-L1的表达,划痕、Transwell实验检测细胞增殖迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡;LDH@si-NEAT1 CM与巨噬细胞共培养,设置实验分组PBS、IL-4、IL-4+PR@CM,qRT-PCR、免疫荧光检测Arg-1、CD163、IL-10及miR-133b和PD-L1的表达。结果相较于亲本乳腺癌细胞,紫杉醇耐药乳腺癌细胞中NEAT1表达上调、miR-133b下调和PD-L1上调(P<0.05);si-NEAT1和miR-133b mimics处理分别抑制了紫杉醇耐药乳腺癌细胞的活性,促进了细胞凋亡(P<0.01),MRP、BCRP表达下调(P<0.05);敲低NEAT1,miR-133b表达上调,PD-L1表达下调(P<0.01),MRP、BCRP表达下调(P<0.001);巨噬细胞M2型极化标志物Arg-1、CD163、IL-10在SKBR3-PR CM与巨噬细胞共培养后表达上调(P<0.05),而si-NEAT1 CM与巨噬细胞共培养后下调(P<0.05);LDH@si-NEAT1作用肿瘤细胞,迁移侵袭能力下调,凋亡增加(P<0.01),MRP和BCRP以及PD-L1蛋白的表达降低(P<0.05),LDH@si-NEAT1CM作用巨噬细胞Arg-1、CD163、IL-10表达下调,miR-133b上调,PD-L1下调(P<0.01)。结论LDH@si-NEAT1通过靶向miR-133b/PD-L1轴,调控乳腺癌细胞紫杉醇耐药与巨噬细胞极化。 展开更多

关键词 乳腺癌紫杉醇耐药 乳腺癌 LncRNA NEAT1 miR-133b PD-L1 层状双氢氧化物 M2型巨噬细胞极化

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参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响 被引量：13

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作者 赵立昌 袁超 +4 位作者 殷娜 计忠宁 相春波 曾菁蓉 李萍 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1034-1038,共5页

目的探究参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响。方法选取2017年1月至2020年10月于江阴市中医院门诊就诊的90例糖尿病肾病患者为研究对象,依据随机数字表法将其分为对照组、观察... 目的探究参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响。方法选取2017年1月至2020年10月于江阴市中医院门诊就诊的90例糖尿病肾病患者为研究对象,依据随机数字表法将其分为对照组、观察组各45例。对照组采用缬沙坦分散片口服治疗,观察组在对照组治疗基础上加服参麦地黄汤。2组疗程均为3个月,治疗前后评估2组患者中医证候积分变化,检测2组患者空腹血糖(FPG)和血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)]、血管内皮功能指标[可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)及内皮素-1(ET-1)]及miR-133b、miR-135b变化。结果治疗后,2组患者中医症候积分、FPG、SCr、BUN、UACR及MDA、sICAM-1、ET-1、miR-133b、miR-135b表达水平均显著下降,SOD活性明显升高(P<0.01),观察组优于对照组(P<0.01)。观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.01)。结论参麦地黄汤联合缬沙坦可有效改善糖尿病肾病临床症状,可能与其调控机体氧化应激、血管内皮功能、血清miR-133b、miR-135b水平有关。 展开更多

关键词 参麦地黄汤 缬沙坦 糖尿病肾病 氧化应激 血管内皮功能 miR-133b miR-135b

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降钙素基因相关肽通过调节microRNA-1和microRNA-133a的表达抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡(英文) 被引量：6

6

作者 李健哲 彭军 +2 位作者 王晨静 邓汉武 李元建 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期964-971,共8页

目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对心肌细胞凋亡的抑制作用及其潜在的机制。方法:异丙肾上腺素(10-5 mol/L)孵育48 h以诱导体外培养的大鼠心肌细胞凋亡,不同浓度的CGRP(10-8或10-7mol/L)在异丙肾上腺素孵育前1 h给药。药物处理结束后,... 目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对心肌细胞凋亡的抑制作用及其潜在的机制。方法:异丙肾上腺素(10-5 mol/L)孵育48 h以诱导体外培养的大鼠心肌细胞凋亡,不同浓度的CGRP(10-8或10-7mol/L)在异丙肾上腺素孵育前1 h给药。药物处理结束后,检测心肌细胞凋亡率和细胞内活性氧的水平以及microRNA-1和microRNA-133a表达的变化。结果:异丙肾上腺素能显著增加心肌细胞的凋亡和细胞内活性氧的产生,同时伴随着microRNA-1表达的上调和microRNA-133a表达的下调,预先给予CGRP可显著抑制异丙肾上腺素的上述效应,但CGRP的有益效应可被CGRP受体拮抗剂所取消。结论:CGRP可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制活性氧的产生进而调节microRNA-1和microRNA-133a的表达有关。 展开更多

关键词 降钙素基因相关肽 异丙肾上腺素 心肌细胞 凋亡 活性氧 microrna-1 mi-croRNA-133a

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microRNA-21在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及意义 被引量：9

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作者 张继新 吕晓涛 +4 位作者 高颖 崔力方 张程燕 昌红 李保玉 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期163-167,共5页

目的研究miR-21在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达,探讨miR-21表达与DL-BCL临床病理特征的关系及其在DLBCL发生发展中的意义。方法采用Real-time RT-PCR方法检测36例DLBCL和10例正常淋巴结中miR-21的表... 目的研究miR-21在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达,探讨miR-21表达与DL-BCL临床病理特征的关系及其在DLBCL发生发展中的意义。方法采用Real-time RT-PCR方法检测36例DLBCL和10例正常淋巴结中miR-21的表达,并采用免疫组织化学SP法检测Ki-67、PTEN在DLBCL中的表达。结果miR-21在DLBCL中高表达,36例DLBCL中有14例表达PTEN(38.9%),21例Ki-67≥50%(58.3%)。DLBCL中miR-21表达水平与PTEN蛋白表达呈负相关,其高表达与DLBCL高Ann Arbor分期、高增殖指数(Ki-67≥50%)、国际预后指数(IPI)呈正相关。结论miR-21过表达可能是DLBCL恶性度高的标志,是促进DLBCL肿瘤细胞增殖的重要因素。PTEN可能是miR-21在DLBCL发挥作用的靶标。 展开更多

关键词 淋巴瘤 大b细胞 microrna-21 实时定量RT-PCR

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miR-133b通过靶向调控EGFR影响食管鳞癌的侵袭、转移 被引量：5

8

作者 曾薇 朱金峰 +1 位作者 孔德华 单莉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第7期1010-1016,共7页

目的探讨miR-133b在食管鳞癌侵袭、转移过程中的作用及机制。方法使用生物信息学工具预测miR-133b的靶基因;双荧光素酶报告基因实验验证miR-133b对靶基因表皮生长因子受体(EGFR)的直接靶向调控作用;细胞增殖实验、划痕实验和Transwell... 目的探讨miR-133b在食管鳞癌侵袭、转移过程中的作用及机制。方法使用生物信息学工具预测miR-133b的靶基因;双荧光素酶报告基因实验验证miR-133b对靶基因表皮生长因子受体(EGFR)的直接靶向调控作用;细胞增殖实验、划痕实验和Transwell实验检测miR-133b的不同表达对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;qRT-PCR验证miR-133b与EGFR在食管鳞癌组织中的表达,并分析miR-133b与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。结果生物信息学工具预测EGFR为miR-133b的靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实miR-133b可与EGFR 3'UTR片段结合;体外实验通过上调食管鳞癌细胞中miR-133b的表达使细胞的增殖受阻(ECA109:P<0.05,KYSE150:P<0.01);细胞的迁移(ECA109:P<0.01,KYSE150:P<0.01)和侵袭能力(EC5A109:P<0.01,KYSE150:P<0.01)显著减弱。在食管鳞癌组织中miR-133b与EGFR的表达呈负相关性(P<0.01),且miR-133b的表达与食管鳞癌的TNM分期、淋巴结转移显著相关(P均<0.05)。结论 miR-133b可能通过下调EGFR的表达,抑制食管鳞癌的增殖、侵袭和转移,在食管鳞癌的演进中起负调控作用。 展开更多

关键词 食管鳞癌 miR-133b EGFR 侵袭 转移

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miR-133b靶向PKM2基因对肺癌A549干细胞增殖及药物敏感性的影响 被引量：8

9

作者 米永华 何苗 刘北忠 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期376-381,共6页

背景与目的已有研究表明miR-133b可抑制肺癌细胞生长,miR-133b表达水平在肺癌组织及患者血清中显著降低,miR-133b通过靶向丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)基因提高鳞癌细胞的放疗敏感性,但其机制尚未明了。本研... 背景与目的已有研究表明miR-133b可抑制肺癌细胞生长,miR-133b表达水平在肺癌组织及患者血清中显著降低,miR-133b通过靶向丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)基因提高鳞癌细胞的放疗敏感性,但其机制尚未明了。本研究通过提取非小细胞肺癌细胞株A549的CD133^+/CD34^+干细胞,研究miR-133b对其增殖及顺铂类药物(cisplatin,DDP)敏感性的影响,探讨miR-133b与PKM2基因的关系,以及它们在肺癌干细胞中的作用。方法使用miRBase和miRNAMap数据库进行miR-133b与PKM2基因的序列比对。应用免疫磁珠分选法从A549细胞中分选出CD133^+/CD34^+肺癌干细胞,流式细胞仪检测纯度。转染miR-133b进入CD133^+/CD34^+细胞,qRT-PCR检测验证miR-133b表达情况,CCK8法检测细胞增殖情况;15μg/mL DDP处理转染miR-133b细胞,检测0 h、12 h、24 h、72 h的细胞凋亡情况;采用Western blot检测PKM2蛋白水平的表达。结果PKM2基因可能为miR-133b的靶基因;流式结果显示CD133^+/CD34^+细胞的纯度为(92.15+4.27)%。qRT-PCR结果显示,与对照组相比,过表达miR-133b后,miR-133b明显上调,miR-133b抑制表达后,miR-133b明显下调(P<0.05)。细胞增殖实验及Western blot结果显示,与对照组相比,miR-133b mimics组细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),PKM2蛋白水平明显降低(P<0.05);而抑制miR-133b表达则明显增加细胞的增殖能力及PKM2蛋白水平(P<0.05)。DDP处理12 h后miR-133b mimics组细胞的凋亡持续明显高于对照组(P<0.05)。miR-133b mimics+DDP组PKM2蛋白的表达明显低于对照组及miR-133b inhibitor组(P<0.05)。结论过表达miR-133b能够通过下调PKM2而抑制肺癌干细胞的生长和增殖,并且可以增强肺癌干细胞对DDP的敏感性。 展开更多

关键词 MiR-133b A549 PKM2 DDP

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双氢睾酮体外培养人毛囊中差异表达的miR-133b对人毛乳头细胞的增殖及诱导能力的影响 被引量：5

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作者 邓文佳 邓长健 +3 位作者 韩乐 刘本 唐鑫 万苗坚 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期202-208,共7页

【目的】探究不同浓度双氢睾酮(DHT)对毛囊生长和毛囊细胞增殖的影响及其与miR-133b表达的关系,然后进一步探究miR-133b对毛乳头细胞的增殖和诱导能力的影响。【方法】体外显微分离人毛囊,选取生长期的毛囊进行培养,显微镜下每日测量并... 【目的】探究不同浓度双氢睾酮(DHT)对毛囊生长和毛囊细胞增殖的影响及其与miR-133b表达的关系,然后进一步探究miR-133b对毛乳头细胞的增殖和诱导能力的影响。【方法】体外显微分离人毛囊,选取生长期的毛囊进行培养,显微镜下每日测量并拍摄不同浓度的DHT处理组(10-8、10-7、10-6和10-5 mol/L)和对照组各组毛囊的生长长度,免疫荧光检测各组毛母质细胞Ki-67表达量评估毛囊增殖能力,qRT-PCR检测各组毛囊中miR-133b的表达量。通过Lipofectamine 2000转染miR-133b mimics及miR-133b NC至人毛乳头细胞中,CCK-8检测各组人毛乳头细胞增殖能力,qRT-PCR及Western Blot检测毛乳头细胞诱导能力指标Versican、ALP、β-catenin的mRNA及蛋白水平的相对表达量。【结果】与对照组相比,DHT 10-5 mol/L实验组对毛囊的生长的抑制作用有统计学意义(P<0.05),DHT 10-5 mol/L实验组进入退行期的时间提前;其他组生长长度与对照组相比无统计学意义。免疫荧光及qRT-PCR显示,与对照组相比,DHT 10-5 mol/L实验组毛母质细胞中Ki-67阳性细胞较少且毛囊中miR-133b的相对表达量明显升高,相当于对照组的(3.17±0.26)倍(P<0.01)。CCK-8显示,miR-133b mimics组OD450低于miR-133b NC组(P<0.05);qRT-PCR显示,在mRNA水平,miR-133b mimics组Versican、ALP、β-catenin的相对表达量均低于miR-133b NC组(P<0.001、P<0.01和P<0.01)。Western blot显示,在蛋白水平,miR-133b mimics组Versican、ALP、β-catenin的相对表达量同样均低于miR-133b NC组(P<0.01、P<0.001和P<0.01)。【结论】高浓度DHT可能通过调控miR-133b的表达抑制人毛乳头细胞的增殖活性及诱导能力,最终抑制人毛囊的生长及增殖。 展开更多

关键词 miR-133b 双氢睾酮 毛囊 毛乳头细胞

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微小RNA-133b对心肌纤维化的影响 被引量：5

11

作者 张松林 范粉灵 +2 位作者 魏峰 王军 张玉顺 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期589-594,共6页

目的研究微小RNA-133b(miR-133b)对心肌纤维化的影响。方法选取人心肌成纤维细胞(CFs),采用CCK8检测过表达及敲低miR-133b时细胞增殖情况,qRT-PCR及Westernblot检测结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(col... 目的研究微小RNA-133b(miR-133b)对心肌纤维化的影响。方法选取人心肌成纤维细胞(CFs),采用CCK8检测过表达及敲低miR-133b时细胞增殖情况,qRT-PCR及Westernblot检测结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)及Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)的表达水平;生物学软件预测miR-133b的靶基因,双荧光素酶报告实验证实miR-133b与靶基因的直接调控作用。结果qRT-PCR检测结果显示,转染miR-133bmimic后miR-133b的表达水平明显高于阴性对照组(t=26.219,P=0.000),转染miR-133binhibitor后miR-133b的表达水平明显低于阴性对照组(t=6.738,P=0.003)。转染CFs21、45、69、93和117h后,与阴性对照组相比,miR-133bmimic组CFs增殖能力明显降低,而miR-133binhibitor组CFs增殖水平明显上升(P均<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-133b后,CTGF(t=9.213,P=0.001;t=8.195,P=0.001)、α-SMA(t=6.511,P=0.003;t=4.434,P=0.011)、collagenⅠ(t=3.172,P=0.034;t=4.053,P=0.015)及collagenⅢ(t=6.404,P=0.003;t=5.319,P=0.006)的mRNA和蛋白表达水平均明显下调;敲低miR-133b后,CTGF(t=9.439,P=0.001;t=14.100,P=0.000)、α-SMA(t=4.519,P=0.011;t=4.377,P=0.012)、collagenⅠ(t=5.966,P=0.004;t=5.514,P=0.005)及collagenⅢ(t=4.622,P=0.010;t=4.996,P=0.008)的mRNA和蛋白表达水平均明显上升。共转染miR-133bmimic和WT3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimiccontrol和WT3’UTR表达载体的细胞(t=5.654,P=0.005),共转染miR-133bmimic和MUT3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimiccontrol和MUT3’UTR表达载体的细胞差异无统计学意义(t=0.380,P=0.724)。结论miR-133b可能是通过靶向抑制CTGF来影响CFs的活化增殖,从而改善心肌纤维化。 展开更多

关键词 心肌纤维化 微小RNA-133b 结缔组织生长因子

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MicroRNA-10b对人低转移肺癌细胞株95-C增殖和侵袭的作用及其机制的研究 被引量：3

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作者 刘翼 李明慧 +2 位作者 张国庆 庞作良 郭文佳 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第9期928-931,共4页

目的微小RNA(microRNA,miRNA)-10b被证实可促进多种肿瘤细胞的生长及增强其侵袭能力。文中旨在研究miRNA-10b对人低转移肺癌细胞95-C的增殖及侵袭力的影响及其作用机制。方法用脂质体法将miRNA-10b真核表达质粒瞬时转染入95-C,实验设置... 目的微小RNA(microRNA,miRNA)-10b被证实可促进多种肿瘤细胞的生长及增强其侵袭能力。文中旨在研究miRNA-10b对人低转移肺癌细胞95-C的增殖及侵袭力的影响及其作用机制。方法用脂质体法将miRNA-10b真核表达质粒瞬时转染入95-C,实验设置空白对照组、阴性对照组和miRNA-10b质粒转染组,实时定量荧光PCR(Real-Time PCR,RT-PCR,)检测各组细胞miRNA-10b的表达及KLF4mRNA的表达,细胞增殖实验检测各组细胞的增殖情况,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力,Western blot检测各组细胞KLF4蛋白的表达。结果转染后48h,RT-PCR检测,miRNA-10b质粒转染组miRNA-10b表达(1.61±0.12)较空白对照组(1.01±0.08)、阴性对照组(0.86±0.07)明显上调(P<0.05),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。生长曲线反映miRNA-10b质粒转染组细胞生长速度明显高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组和阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);Transwell结果显示,miRNA-10b质粒转染组[(188.0±15.1)/高倍显微镜]较空白对照组[(151.0±11.3)/高倍显微镜]、阴性对照组[(136.0±10.8)/高倍显微镜]有更多的细胞迁移到Transwell膜的另一侧(P<0.05),空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义(P>0.05);转染后48 h,miRNA-10b质粒组KLF4蛋白表达(0.86±0.06)较空白对照组(1.48±0.05)和阴性对照组(1.54±0.08)降低(P<0.05);各组细胞KLF4 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miRNA-10b可能过下调KLF4蛋白的表达促进95-C细胞的增殖及侵袭能力。 展开更多

关键词 microrna-10b 95-C KLF4 细胞增殖 侵袭能力

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MicroRNA-29a对大鼠心肌细胞Bcl-2和Mcl-1表达的调控作用及其机制 被引量：6

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作者 张振辉 尤祥宇 +2 位作者 刘少军 刘连 刘世明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1928-1932,共5页

目的:探讨microRNA-29a(miR-29a)对大鼠心肌细胞(CM细胞)B细胞白血病/淋巴瘤-2(Bcl-2)和髓样细胞白血病-1(Mcl-1)表达的调控机制。方法:体外培养新生Sprague-Dawley大鼠CM细胞和人胚肾细胞株293T。合成大鼠miR-29a的拟似物(mimic)和抑制... 目的:探讨microRNA-29a(miR-29a)对大鼠心肌细胞(CM细胞)B细胞白血病/淋巴瘤-2(Bcl-2)和髓样细胞白血病-1(Mcl-1)表达的调控机制。方法:体外培养新生Sprague-Dawley大鼠CM细胞和人胚肾细胞株293T。合成大鼠miR-29a的拟似物(mimic)和抑制剂(inhibitor)。用脂质体Lipofectamine RNAiMAX转染miR-29a mimic进入CM细胞,转染48 h后分别用实时荧光定量PCR和Western blotting检测Bcl-2和Mcl-1mRNA和蛋白的表达变化。构建Bcl-2和Mcl-1的萤光素酶报告基因载体(DNA质粒),转染293T细胞(DNA质粒和miRNA共转染)和CM细胞(miRNA和DNA质粒先后转染),双萤光素酶报告基因系统检测萤光素酶的表达变化。结果:CM细胞转染miR-29a mimic 48 h后,Bcl-2和Mcl-1 mRNA和蛋白的水平均下调(P<0.05)。双萤光素酶报告基因系统显示,在293T细胞中,miR-29a可特异抑制带有bcl-2和mcl-1 3’UTR上野生型识别元件的报告基因表达(P<0.05),在CM细胞中,抑制内源性的miR-29a水平能促进bcl-2和mcl-1 3’UTR上野生型识别元件的报告基因表达。结论:抗凋亡基因bcl-2和mcl-1是miR-29a的靶基因。miR-29a可能通过作用于Bcl-2和Mcl-1实现对心肌细胞凋亡的调控作用,具体效应仍待进一步阐明。 展开更多

关键词 microrna-29a 细胞凋亡 b细胞白血病 淋巴瘤-2 髓样细胞白血病-1

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山楂叶总黄酮通过调控miR-133b改善缺氧复氧诱导的神经细胞损伤 被引量：14

14

作者 李丽静 王领弟 吴晓光 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1443-1449,共7页

目的探讨山楂叶总黄酮通过调控miR-133b改善缺氧复氧诱导的神经细胞损伤。方法山楂叶总黄酮(10、30、90 mg/L)培养SH-SY5Y细胞24 h后,构建缺氧复氧(H/R)细胞模型;将miR-NC、miR-133b、anti-miR-NC、anti-miR-133b质粒转染至SH-SY5Y细胞6... 目的探讨山楂叶总黄酮通过调控miR-133b改善缺氧复氧诱导的神经细胞损伤。方法山楂叶总黄酮(10、30、90 mg/L)培养SH-SY5Y细胞24 h后,构建缺氧复氧(H/R)细胞模型;将miR-NC、miR-133b、anti-miR-NC、anti-miR-133b质粒转染至SH-SY5Y细胞6 h,加入90 mg/L山楂叶总黄酮处理24 h,再进行缺氧复氧处理。RT-PCR检测miR-133b、RBMX mRNA表达,Western blot检测RBMX、Bax、Bcl-2蛋白表达,采用试剂盒分别检测LDH、SOD、MDA水平,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性。结果预处理SH-SY5Y细胞,山楂叶总黄酮能上调H/R诱导的神经细胞SOD水平,下调LDH、MDA水平,抑制Bax、RBMX表达及细胞凋亡率,促进Bcl-2、miR-133b表达(P<0.05),与H/R诱导的神经细胞过表达miR-133b结果一致。且miR-133b靶向调控RBMX的表达,抑制miR-133b表达逆转了山楂叶总黄酮对H/R诱导的神经细胞损伤的改善作用。结论山楂叶总黄酮通过调控miR-133b靶向调控RBMX的表达改善缺氧复氧诱导的神经细胞损伤。 展开更多

关键词 山楂叶总黄酮 miR-133b RbMX 神经细胞损伤 缺氧复氧

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调控microRNA-99b表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用 被引量：2

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作者 吴维光 孙小丽 +1 位作者 陈勍 林仲秋 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期670-675,共6页

【目的】探讨上调microRNA-99b(miR-99b)表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制。【方法】宫颈癌SiHa细胞分正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组。利用siPORT NeoFX TransfectionAgent,阴性对照组细胞转染Cy3dye labeled... 【目的】探讨上调microRNA-99b(miR-99b)表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制。【方法】宫颈癌SiHa细胞分正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组。利用siPORT NeoFX TransfectionAgent,阴性对照组细胞转染Cy3dye labeled PremiR Negative Control,miR-99b调控组细胞转染Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor。实时定量PCR方法检测miR-99b表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测靶基因细胞分裂周期25A(CDC25A)蛋白表达。【结果】实时定量PCR结果显示,miR-99b调控组细胞,miR-99b表达增加107.23倍。正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组细胞增殖率分别为(3.26±0.44)%、(3.65±0.47)%和(2.24±0.45)%,细胞凋亡率分别为(8.12±1.54)%、(8.75±1.67)%和(14.26±1.70)%,细胞CDC25A蛋白表达分别为0.50±0.06、0.59±0.05和0.31±0.05。与正常对照组和阴性对照组比较,miR-99b调控组细胞增殖率、凋亡率和CDC25A蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】上调miR-99b表达可通过降低靶基因CDC25A表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-99b可能成为宫颈癌治疗的靶基因。 展开更多

关键词 SIHA细胞 microrna-99b 增殖 调亡

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丰富环境干预对帕金森病大鼠中脑miR-133b表达的影响 被引量：4

16

作者 许容娟 蒲蜀湘 +4 位作者 庄顺芝 李芳 高聪 龙友明 姚海燕 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第20期3351-3355,共5页

目的探讨丰富环境(EE)干预对帕金森病(PD)大鼠中脑miR-133b表达的影响。方法将造模成功的6-羟基多巴胺(6-OHDA)PD大鼠随机分成2组:PD+EE组、PD+标准环境(SE)组。设假手术(sham)+EE组、sham+SE组为对照组。予对应环境干预6周后,用酪氨酸... 目的探讨丰富环境(EE)干预对帕金森病(PD)大鼠中脑miR-133b表达的影响。方法将造模成功的6-羟基多巴胺(6-OHDA)PD大鼠随机分成2组:PD+EE组、PD+标准环境(SE)组。设假手术(sham)+EE组、sham+SE组为对照组。予对应环境干预6周后,用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化法检测大鼠中脑TH阳性纤维及TH阳性细胞表达;采用实时荧光定量PCR检测大鼠中脑miR-133b表达水平。结果与sham+SE组相比,PD+SE组损毁侧中脑TH阳性纤维及细胞数目较少;与PD+SE组相比,PD+EE组大鼠损毁侧中脑TH阳性纤维及细胞数目较多,差异均有统计学意义(P <0.05)。PD+SE组大鼠中脑miR-133b相对表达量高于sham+SE组;PD+EE组大鼠中脑miR-133b的相对表达量低于PD+SE组,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 6-OHDA可能通过上调miR-133b表达导致多巴胺能神经元退行性变。EE可能通过抑制miR-133b的表达,促进黑质-纹状体系统多巴胺能神经元的恢复。 展开更多

关键词 帕金森病 丰富环境 miR.133b 酪氨酸羟化酶 大鼠

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miR-133b与肿瘤的关系及其作用机制 被引量：2

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作者 姚云峰 王俊 王宝成 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期811-814,共4页

microRNA(miRNA)是一类长度为20~24个核苷酸的非编码小RNA,它们可在转录后水平调节基因的表达。miRNA是许多细胞功能调控的关键因素,包括细胞的生长、增殖、分化及凋亡等。近来许多研究发现mi R-133b与肿瘤的侵袭与转移密切相关,它可以... microRNA(miRNA)是一类长度为20~24个核苷酸的非编码小RNA,它们可在转录后水平调节基因的表达。miRNA是许多细胞功能调控的关键因素,包括细胞的生长、增殖、分化及凋亡等。近来许多研究发现mi R-133b与肿瘤的侵袭与转移密切相关,它可以通过抑制EGFR、fas、FSCN1及c-MET等多种基因的表达而发挥其抗肿瘤作用。本文主要对mi R-133b在不同肿瘤中的异常表达及其可能的作用及其作用机制进行综述。 展开更多

关键词 miR-133b 肿瘤 侵袭及转移 凋亡

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miR-125b通过下调HAX-1的表达提高CD133^+ SW480细胞对顺铂的敏感性 被引量：2

18

作者 潘海强 沈锋 +2 位作者 崔焌辉 蔡珂 都志军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1053-1059,共7页

目的:探讨miR-125b在CD133^+结直肠癌细胞中发挥的作用并研究其是否和顺铂的体外治疗有关。方法:用RT-qPCR方法检测miR-125b在常规SW480肿瘤细胞及CD133^+ SW480肿瘤细胞中的表达水平。流式细胞术检测miR-125b和顺铂对SW480细胞系中CD13... 目的:探讨miR-125b在CD133^+结直肠癌细胞中发挥的作用并研究其是否和顺铂的体外治疗有关。方法:用RT-qPCR方法检测miR-125b在常规SW480肿瘤细胞及CD133^+ SW480肿瘤细胞中的表达水平。流式细胞术检测miR-125b和顺铂对SW480细胞系中CD133^+ 细胞比例的影响。MTT法检测miR-125b对顺铂杀伤CD133^+ SW480细胞能力的影响。利用生物信息学及Western blot方法验证miR-125b是否调节CD133^+ SW480细胞中HAX-1的表达。运用JC-1染色、Annexin V染色及Western blot方法研究miR-125b影响顺铂疗效的信号通路的效应。结果:CD133^+ SW480细胞中的miR-125b表达水平显著低于正常结直肠上皮细胞系FHC和常规SW480肿瘤细胞。顺铂体外单独治疗能提高SW480细胞系中CD133^+细胞的比例,然而联用miR-125b模拟物后CD133^+ SW480细胞的比例显著下降。MTT实验结果表明miR-125b可显著增强顺铂对CD133^+ SW480细胞的杀伤活性。Western blot实验表明miR-125b的靶基因可能为HAX-1。miR-125b联合顺铂可引起CD133^+ SW480细胞线粒体膜电位的丧失并诱导线粒体内细胞色素C的释放,进而引起细胞凋亡。转染HAX-1表达载体后miR-125b联合顺铂对CD133^+ SW480细胞的凋亡诱导效应显著降低。结论:miR-125b通过下调HAX-1的表达提高CD133^+结直肠癌细胞对顺铂的敏感性。 展开更多

关键词 miR-125b HAX-1 细胞色素C 顺铂 CD133+结直肠癌细胞

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microRNA-125b在舌鳞状细胞癌中的表达及意义 被引量：3

19

作者 王健 闫广鹏 +1 位作者 郭超 李军 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期11-16,共6页

目的检测舌鳞状细胞癌(TSCC)中microRNA-125b的表达,分析与TSCC患者临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测35例TSCC组织及对应的癌旁正常组织中microRNA-125b的表达情况,并分析microRNA-125b在TSCC组织中... 目的检测舌鳞状细胞癌(TSCC)中microRNA-125b的表达,分析与TSCC患者临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测35例TSCC组织及对应的癌旁正常组织中microRNA-125b的表达情况,并分析microRNA-125b在TSCC组织中的表达与临床特征的关系。采用原位杂交技术(ISH)检测35例TSCC组织及对应的癌旁正常组织切片中microRNA-125b基因的表达水平。结果RT-qPCR结果显示,TSCC组织和癌旁正常组织中microRNA-125b的相对表达量分别为2.32±0.69和0.87±0.32,TSCC组织中microRNA-125b的表达显著高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.001);35例TSCC组织中microRNA-125b的表达水平与年龄、性别、病理分级和淋巴结转移无明显相关性,而与TNM分期有明显相关性,分期越高microRNA-125b的表达水平越高(P<0.05)。经过microRNA-125b探针杂交染色结果显示,35例患者的TSCC组织和癌旁正常组织的染色平均密度分别为0.010±0.003和0.004±0.001,癌组织高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论microRNA-125b在35例TSCC患者中高表达,并与临床分期相关,提示microRNA-125b表达上调可能参与TSCC的发生发展。 展开更多

关键词 microrna-125b 舌鳞状细胞癌 实时荧光定量聚合酶链反应 原位杂交

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microRNA-181b调控精神分裂症易感基因EGR3的分子机制 被引量：1

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作者 张蕊 张天布 +3 位作者 范怡伦 张钰洋 杨雪文 马捷 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期669-673,共5页

目的用分子生物学的方法来检测microRNA-181b对EGR3基因的靶向调控作用,为后续microRNA-181b在精神分裂症(schizophrenia)中的分子功能研究指明方向。方法运用生物信息学软件预测到精神分裂症易感基因EGR3是microRNA-181b的潜在靶基因,... 目的用分子生物学的方法来检测microRNA-181b对EGR3基因的靶向调控作用,为后续microRNA-181b在精神分裂症(schizophrenia)中的分子功能研究指明方向。方法运用生物信息学软件预测到精神分裂症易感基因EGR3是microRNA-181b的潜在靶基因,随后采用PCR方法扩增EGR3基因3'UTR包含与microRNA-181b种子序列相结合的片段,再将该片段连接入pmirGLO质粒载体,用双酶切和测序的方法进行鉴定,与UCSC网站上EGR3序列相同的阳性重组质粒载体记为pmirGLO-EGR3。最后将该重组体与microRNA-181b阴性对照(NC)和模拟物(mimics)分为五组转染HEK293T细胞系,进行双荧光素酶报告基因活性测定。结果双酶切和测序结果表明EGR3 3'UTR成功构建入pmirGLO载体中。荧光显微镜下观察发现细胞转染实验成功,在大约90%的细胞中可检测到荧光信号。双荧光素酶报告基因活性检测结果表明,microRNA-181bmimics与NC相比,显著性降低了报告基因的活性。结论在细胞水平证明了精神分裂症易感基因EGR3是microRNA-181b的靶基因,对后续microRNA-181b的功能研究,以及其在精神分裂症中的分子作用机制研究提供了新的线索。 展开更多

关键词 精神分裂症 microrna-181b EGR3 3'UTR 调控

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