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稳定敲低Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)的BV2细胞系建立
被引量：
1
1
作者
杨娟
张吉
+2 位作者
徐婷
王妍柏
王振海
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期818-823,共6页
目的构建Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体,并建立稳定敲低PPM1A表达的BV2小鼠脑小胶质细胞系。方法针对PPM1A基因的编码序列(CDS)区,设计合成2对短发卡RNA(shRNA)序列shRNA1、shRNA2,分...
目的构建Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体,并建立稳定敲低PPM1A表达的BV2小鼠脑小胶质细胞系。方法针对PPM1A基因的编码序列(CDS)区,设计合成2对短发卡RNA(shRNA)序列shRNA1、shRNA2,分别将其克隆到GV493载体中,并转化至感受态大肠杆菌DH5α菌株,培养后挑取阳性克隆子进行测序,最后包装慢病毒并进行滴度测定。将2组慢病毒分别转染BV2小鼠脑小胶质细胞,并给予嘌呤霉素筛选,使用荧光显微镜及流式细胞术观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,评估转染结果,分别采用实时定量PCR和Western blot法检测PPM1A的mRNA和蛋白水平。结果 PPM1A基因shRNA慢病毒表达载体经过测序鉴定构建成功,转染BV2小鼠脑小胶质细胞后GFP表达率大于80%;与对照组相比,shRNA1及shRNA2敲低组PPM1A mRNA及蛋白水平均显著降低。结论利用慢病毒shRNA方法成功构建PPM1A敲低的BV2细胞系。
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关键词
Mg^2+/Mn^2+
依赖性
蛋白
磷酸酶
1A(PPM1A)
小胶质细胞
短发卡RNA(shRNA)
慢病毒表达载体
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职称材料
上调Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1F表达对鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响
被引量：
1
2
作者
赵杰
周宁
+3 位作者
刘冬芹
代娟娟
王丹丹
武艳
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期39-45,共7页
目的:探讨上调Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1F(PPM1F)对鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移的影响,并阐明其作用机制。方法:鼻咽癌HONE-1细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1质粒)和pcDNA3.1-Flag-PPM1F组(转染pcDNA3.1-Flag-PPM1F质粒)。实...
目的:探讨上调Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1F(PPM1F)对鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移的影响,并阐明其作用机制。方法:鼻咽癌HONE-1细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1质粒)和pcDNA3.1-Flag-PPM1F组(转染pcDNA3.1-Flag-PPM1F质粒)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞中PPM1F和E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测2组细胞增殖活性和克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中迁移细胞数。结果:与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Flag-PPM1F组细胞中PPM1F mRNA表达水平明显升高(P<0.01),且PPM1F蛋白表达量明显增加,细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),细胞增殖活性、克隆形成率和划痕愈合率明显降低(P<0.05或P<0.01),迁移细胞数明显减少(P<0.05)。结论:上调PPM1F表达能够抑制鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移,其机制可能与细胞间的黏附作用有关。
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关键词
Mg^(2+)/Mn^(2+)
依赖性
蛋白
磷酸酶
1
f
鼻咽肿瘤
细胞增殖
细胞迁移
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职称材料
题名
稳定敲低Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)的BV2细胞系建立
被引量：
1
1
作者
杨娟
张吉
徐婷
王妍柏
王振海
机构
宁夏医科大学
宁夏医科大学总医院神经病学中心内科
吴忠市人民医院神经内科
宁夏医科大学总医院脑脊液研究室
宁夏颅脑疾病重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期818-823,共6页
基金
宁夏高等学校一流学科建设(临床医学学科)资助项目(NXYLXK2017A05).
文摘
目的构建Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体,并建立稳定敲低PPM1A表达的BV2小鼠脑小胶质细胞系。方法针对PPM1A基因的编码序列(CDS)区,设计合成2对短发卡RNA(shRNA)序列shRNA1、shRNA2,分别将其克隆到GV493载体中,并转化至感受态大肠杆菌DH5α菌株,培养后挑取阳性克隆子进行测序,最后包装慢病毒并进行滴度测定。将2组慢病毒分别转染BV2小鼠脑小胶质细胞,并给予嘌呤霉素筛选,使用荧光显微镜及流式细胞术观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,评估转染结果,分别采用实时定量PCR和Western blot法检测PPM1A的mRNA和蛋白水平。结果 PPM1A基因shRNA慢病毒表达载体经过测序鉴定构建成功,转染BV2小鼠脑小胶质细胞后GFP表达率大于80%;与对照组相比,shRNA1及shRNA2敲低组PPM1A mRNA及蛋白水平均显著降低。结论利用慢病毒shRNA方法成功构建PPM1A敲低的BV2细胞系。
关键词
Mg^2+/Mn^2+
依赖性
蛋白
磷酸酶
1A(PPM1A)
小胶质细胞
短发卡RNA(shRNA)
慢病毒表达载体
Keywords
Mg^
2
+/Mn^
2
+ -dependent protein phosphatase
1
A(PPM
1
A)
microglia
short hairpin RNA
lentiviral vector
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
Q344.13 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
上调Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1F表达对鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响
被引量：
1
2
作者
赵杰
周宁
刘冬芹
代娟娟
王丹丹
武艳
机构
滨州医学院附属医院肿瘤科
滨州医学院附属医院医学研究中心
滨州医学院附属医院耳鼻咽喉头颈外科
山东省滨州市人民医院消化内科
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期39-45,共7页
基金
国家自然科学基金项目(81903102)
山东省科技厅重点研发计划(公益类)项目(2019GSF107099)
+3 种基金
山东省卫计委医药卫生科技发展计划项目(2017WS154)
山东省科技厅自然科学基金项目(ZR2016HB55,ZR2022QH192)
滨州医学院科研计划与科研启动基金项目(BY2019KJ04,BY2015KJ10)
滨州医学院“临床+X”项目(BY2021LCX23)。
文摘
目的:探讨上调Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1F(PPM1F)对鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移的影响,并阐明其作用机制。方法:鼻咽癌HONE-1细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1质粒)和pcDNA3.1-Flag-PPM1F组(转染pcDNA3.1-Flag-PPM1F质粒)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞中PPM1F和E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测2组细胞增殖活性和克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中迁移细胞数。结果:与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Flag-PPM1F组细胞中PPM1F mRNA表达水平明显升高(P<0.01),且PPM1F蛋白表达量明显增加,细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),细胞增殖活性、克隆形成率和划痕愈合率明显降低(P<0.05或P<0.01),迁移细胞数明显减少(P<0.05)。结论:上调PPM1F表达能够抑制鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移,其机制可能与细胞间的黏附作用有关。
关键词
Mg^(2+)/Mn^(2+)
依赖性
蛋白
磷酸酶
1
f
鼻咽肿瘤
细胞增殖
细胞迁移
Keywords
Protein phosphatase Mg^(
2
+)/Mn^(
2
+)-dependent
1
f
Nasopharyngeal neoplasms
Cell proli
f
eration
Cell migration
分类号
R739.63 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稳定敲低Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)的BV2细胞系建立
杨娟
张吉
徐婷
王妍柏
王振海
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
上调Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1F表达对鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响
赵杰
周宁
刘冬芹
代娟娟
王丹丹
武艳
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
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