动物乳腺生物反应器研究进展 被引量：3

1

作者 舒建洪 刘津 +2 位作者 胡先春 杨瑞锋 张涌 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第12期149-153,共5页

　针对利用动物乳腺生物反应器技术生产重组蛋白,具有生产效率高和经济效益明显的特点。综述了制备乳腺生物反应器时表达载体构建和基因转移两个关键环节的研究现状,并就基因打靶和体细胞克隆技术的结合探讨了乳腺生物反应器的发展趋势。

关键词 乳腺生物反应器 表达载体 转基因 基因打靶 体细胞克隆

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药用蛋白质乳腺生物反应器的制作技术及新方法进展 被引量：2

2

作者 吴应积 张学明 +2 位作者 杨东山 罗奋华 旭日干 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期94-100,共7页

用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白已经构成了现代生物技术的一个重要领域。与其他的生物工程方法比起来,用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白具有更多的优点。这一生物技术的实际应用依赖于基因的时空表达调控操作和可靠的... 用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白已经构成了现代生物技术的一个重要领域。与其他的生物工程方法比起来,用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白具有更多的优点。这一生物技术的实际应用依赖于基因的时空表达调控操作和可靠的转基因动物制作方法。综述了这一技术的优点,概括描述了了乳腺生物反应器表达载体的构建方法,及转基因动物的制作方法。讨论了这些方法的优缺点及技术改进的发展方向,特别是介绍了最近出现的、有研究和应用价值的用精原干细胞制作转基因动物的方法。 展开更多

关键词 乳腺 生物反应器 载体构建 转基因技术

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组织型纤溶酶原激活剂cDNA克隆及其乳腺特异性表达载体的构建 被引量：2

3

作者 丁一 刘书漫 +2 位作者 王萍 朱晓燕 张钦宪 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第3期391-393,共3页

目的 :克隆组织型纤溶酶原激活剂 (tissue typeplasminogenactivator,tPA)基因及构建其乳腺特异性表达载体。方法 :以PCR技术克隆 2 .1kbtPAcDNA片段 ;应用体外连接技术 ,连接乳腺特异性表达载体pWA和 2 .1kbtPAcDNA片段 ;转化连接产物 ... 目的 :克隆组织型纤溶酶原激活剂 (tissue typeplasminogenactivator,tPA)基因及构建其乳腺特异性表达载体。方法 :以PCR技术克隆 2 .1kbtPAcDNA片段 ;应用体外连接技术 ,连接乳腺特异性表达载体pWA和 2 .1kbtPAcDNA片段 ;转化连接产物 ,以内切酶酶切、琼脂糖电泳及插入片段序列分析鉴定阳性克隆。结果 :琼脂糖电泳显示 ,2 .1kbtPAcDNA片段克隆成功 ;内切酶酶切片段与预期片段长度一致 ;插入片段序列与文献报道一致。结论 展开更多

关键词 组织型纤溶酶原激活剂 乳腺生物反应器 表达载体

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乳腺生物反应器表达载体的检测方法 被引量：31

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作者 徐曼妮 厉曙光 +1 位作者 赵建阳 成国祥 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第5期23-26,共4页

乳腺生物反应器研究和开发的周期长 ,成本大 ,风险高 ,在生产转基因动物之前有必要对乳腺特异性表达载体构建的合理性和有效性进行检测。综述了国内外载体检测研究的进展 ,以及这些检测方法在转基因小鼠。

关键词 乳腺生物反应器 表达载体 检测 转基因动物 细胞培养

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人尿激酶原乳腺定位转基因小鼠的建立 被引量：3

5

作者 岳军明 张宏权 +6 位作者 李宝林 户荣良 俞炜源 王会信 殷震 李华 王太一 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期140-143,共4页

应用大鼠β乳酪蛋白基因的上游调控序列和人尿激酶原ｃＤＮＡ构建成功了乳腺定位表达载体．用显微注射的手段导入到受精卵的雄前核，从注射的３００枚受精卵中，１４０枚被移植到９只假孕的受体小鼠．结果从获得的子一代小鼠中，经ＰＣ... 应用大鼠β乳酪蛋白基因的上游调控序列和人尿激酶原ｃＤＮＡ构建成功了乳腺定位表达载体．用显微注射的手段导入到受精卵的雄前核，从注射的３００枚受精卵中，１４０枚被移植到９只假孕的受体小鼠．结果从获得的子一代小鼠中，经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实，有３只转基因阳性的小鼠． 展开更多

关键词 乳腺定位表达载体 转基因 人尿激酶原cDNA

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转人乳铁蛋白基因山羊乳腺上皮细胞的体外诱导表达 被引量：2

6

作者 张玉玲 张晶晶 +1 位作者 刘凤军 张涌 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第32期15743-15745,共3页

[目的]为了探索山羊乳腺上皮细胞体外诱导表达的技术体系,评价乳腺特异性载体效率及外源蛋白在细胞水平的表达情况。[方法]用含5mg/L胰岛素、5mg/L催乳素、1mg/L氢化可的松的DMEM/F12培养液对转染人乳铁蛋白基因的山羊乳腺上皮细胞进行... [目的]为了探索山羊乳腺上皮细胞体外诱导表达的技术体系,评价乳腺特异性载体效率及外源蛋白在细胞水平的表达情况。[方法]用含5mg/L胰岛素、5mg/L催乳素、1mg/L氢化可的松的DMEM/F12培养液对转染人乳铁蛋白基因的山羊乳腺上皮细胞进行体外诱导培养,每6h收集1次上清液。上清液浓缩后分别用SDS-PAGE和Westernblot检测外源蛋白的表达情况。[结果]诱导培养液中有目的蛋白表达,分子量约为42kD。[结论]该研究所用的山羊乳腺细胞诱导表达方法能够诱导山羊乳腺上皮细胞表达外源基因,这为人乳铁蛋白基因的异源表达与乳腺生物反应器的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 乳腺细胞 诱导表达 乳腺生物反应器 人乳铁蛋白 山羊

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β乳球蛋白基因(βlg)的表达调控及其应用 被引量：2

7

作者 刘建喜 林爱星 +1 位作者 周云 陈永福 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第3期23-27,共5页

β乳球蛋白 (BLG)是反刍动物乳汁中的主要乳清蛋白 ,BLG表达受到 βlg核心启动子、LCR、MAR等顺式作用元件和激素、转录因子等反式作用因子的调控。利用 βlg启动子已在乳腺成功表达外源基因 ,但乳腺组织特异性表达外源基因时尚存在异... β乳球蛋白 (BLG)是反刍动物乳汁中的主要乳清蛋白 ,BLG表达受到 βlg核心启动子、LCR、MAR等顺式作用元件和激素、转录因子等反式作用因子的调控。利用 βlg启动子已在乳腺成功表达外源基因 ,但乳腺组织特异性表达外源基因时尚存在异位表达、差异表达、表达水平低和表达受位置效应影响等问题。构建表达载体时充分考虑 βlg启动子和远端调控元件 ,有可能使外源基因获得稳定、高效、特异的表达。 展开更多

关键词 β乳球蛋白基因 表达调控 乳腺组织 特异性表达 表达载体

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MCF-7细胞中组织型纤溶酶原激活剂乳腺特异性表达载体的瞬时表达 被引量：1

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作者 丁一 张娓 +2 位作者 王萍 刘书漫 张钦宪 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第3期394-396,共3页

目的 :验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂 (tPA)乳腺特异性表达载体pWTA在乳癌细胞系MCF 7中的瞬时表达。方法 :用脂质转染胺试剂LipofectamineTM2 0 0 0 将pWTADNA转染入乳癌细胞系MCF 7和食管癌细胞系Eca 1 0 9。应用原位杂交技术 ,... 目的 :验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂 (tPA)乳腺特异性表达载体pWTA在乳癌细胞系MCF 7中的瞬时表达。方法 :用脂质转染胺试剂LipofectamineTM2 0 0 0 将pWTADNA转染入乳癌细胞系MCF 7和食管癌细胞系Eca 1 0 9。应用原位杂交技术 ,以地高辛标记的tPAcDNA为探针 ,观察PWTA的瞬时表达。结果 :不同浓度LipofectamineTM2 0 0 0MCF 7细胞原位杂交均为阳性 ;Eca 1 0 9细胞及未加转染液者未见阳性信号。结论 :载体pWTA为tPA乳腺特异性表达载体。 展开更多

关键词 组织型纤溶酶原激活剂 瞬时表达 乳腺生物反应器 表达载体

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人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺生物反应器的研究 被引量：2

9

作者 安靓 李振林 +2 位作者 黄伟民 黄吴键 李进 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第5期546-548,552,共4页

目的构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)乳腺定位表达载体,使其在牛乳汁中高效表达,从而建立牛乳腺生物反应器。方法RT-TD-PCR法克隆目的基因,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含t-PA-cDAN的乳腺定位表达载体;采用显微注射法和乳腺注... 目的构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)乳腺定位表达载体,使其在牛乳汁中高效表达,从而建立牛乳腺生物反应器。方法RT-TD-PCR法克隆目的基因,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含t-PA-cDAN的乳腺定位表达载体;采用显微注射法和乳腺注射法将融合基因转入小鼠的受精卵和小鼠及牛的乳腺组织中。结果显微注射法和乳腺注射法转基因后,t-PA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论所构建的乳腺定位表达载体可有效地使t-PA基因在小鼠和牛乳汁中表达,t-PA基因的表达不受转基因方法的影响,但t-PA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异,可能受着不同的因素或调控系统的影响。 展开更多

关键词 组织型纤溶酶原激活剂 牛 乳腺生物反应器 基因定位表达 转基因动物

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VP_1intron敲除对pSVL WAP tPA暂时性乳腺定位表达的影响 被引量：1

10

作者 李银聚 侯玉泽 +6 位作者 康怀彬 王占彬 赵君 赖良学 扈荣良 殷震 杜利敏 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 1999年第4期378-380,共3页

在以ｃＤＮＡ表达外源蛋白时，表达载体中是否含有ｉｎｔｒｏｎ 会对表达造成一定的影响－ 利用基因工程手段将乳腺定位表达载体ｐＳＶＬＷＡＰｔＰＡ 中ＶＰ１ｉｎｔｒｏｎ 敲除，构建了表达载体ΔｐＳＶＬＷＡＰｔＰＡ－ 采... 在以ｃＤＮＡ表达外源蛋白时，表达载体中是否含有ｉｎｔｒｏｎ 会对表达造成一定的影响－ 利用基因工程手段将乳腺定位表达载体ｐＳＶＬＷＡＰｔＰＡ 中ＶＰ１ｉｎｔｒｏｎ 敲除，构建了表达载体ΔｐＳＶＬＷＡＰｔＰＡ－ 采用基因直接注射方法将两种表达载体分别注入家兔乳腺中，溶圈试验结果显示，ＶＰ１ｉｎｔｒｏｎ 去除后，ｔＰＡ 表达水平有所提高，分娩后第５ ｄ 乳中表达水平分别为４００ μｇ·Ｌ－１和６５０ μｇ·Ｌ－ １－ 展开更多

关键词 定位表达载体 基因敲除 乳腺 基因表达

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大鼠β乳酪蛋白基因调控区的克隆和序列分析及乳腺定位表达载体的构建 被引量：2

11

作者 岳军明 张宏权 +5 位作者 王允玲 任宏波 周廷冲 王会信 崔青山 殷震 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第4期377-380,共4页

将大鼠β乳酪蛋白的调控序列克隆于ｐＧＥＭ－４Ｚ，用ＳＰ６、Ｔ７正反向引物进行序列分析，证实其正确之后将该调控序列克隆于真核表达载体ｐＳＶＬ中，构建成功了乳腺定位表达载体。同时在其下游插入了荧光素酶报道基因，用于在乳腺... 将大鼠β乳酪蛋白的调控序列克隆于ｐＧＥＭ－４Ｚ，用ＳＰ６、Ｔ７正反向引物进行序列分析，证实其正确之后将该调控序列克隆于真核表达载体ｐＳＶＬ中，构建成功了乳腺定位表达载体。同时在其下游插入了荧光素酶报道基因，用于在乳腺细胞表达调控的研究。 展开更多

关键词 β乳酪蛋白 调控序列 基因表达 乳腺定位

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奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒构建与鉴定 被引量：1

12

作者 张志鹏 江静宜 +3 位作者 夏海磊 冀德君 李明勋 杨章平 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第5期24-28,共5页

研究旨在构建具有高效抗菌、活性持久的奶牛乳腺特异性表达质粒,探索研制新型抗菌制剂,为利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供重要材料。根据GenBank中奶牛溶菌酶基因(lysozyme,Lyz)mRNA序列(GenBank号:NM_180999.1)设计引物,从奶牛乳... 研究旨在构建具有高效抗菌、活性持久的奶牛乳腺特异性表达质粒,探索研制新型抗菌制剂,为利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供重要材料。根据GenBank中奶牛溶菌酶基因(lysozyme,Lyz)mRNA序列(GenBank号:NM_180999.1)设计引物,从奶牛乳腺上皮细胞中RT-PCR扩增Lyz基因编码序列,将其克隆到携带增强型绿色荧光蛋白通用型表达载体pEGFP-N1中测序。重组质粒pEGFP-N1-Lyz经AseI+HindIII双酶切除CMV启动子,将奶牛乳腺特异性表达β-乳球蛋白基因(BLG)启动子同源重组替换到AseI和HindIII酶切位点,构建奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒pBLG-EGFP-N1-Lyz,采用脂质体法转染奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)、人肾脏上皮细胞(HEK293T),荧光显微镜检测转染细胞中绿色荧光蛋白的表达情况。结果表明,重组表达质粒pBLG-EGFP-N1-Lyz测序结果与目的片段长度相符,转染至BMEC细胞和HEK293T细胞,在奶牛乳腺上皮细胞观察到绿色荧光,HEK293T细胞未观察到绿色荧光,奶牛Lyz基因乳腺特异性表达质粒构建成功。 展开更多

关键词 奶牛乳房炎 溶菌酶 乳腺特异性表达载体 基因治疗

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猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点片段的真核表达 被引量：1

13

作者 吕宁 彭树英 张涌 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第4期26-28,共3页

为探讨利用转基因动物乳腺生物反应器生产基因疫苗的可行性,构建了以奶牛β-酪蛋白启动子为调控序列,增强型绿色荧光蛋白为报告基因的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因抗原位点区乳腺表达载体pEGBS。通过脂质体介导方法将其转染小鼠乳腺... 为探讨利用转基因动物乳腺生物反应器生产基因疫苗的可行性,构建了以奶牛β-酪蛋白启动子为调控序列,增强型绿色荧光蛋白为报告基因的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因抗原位点区乳腺表达载体pEGBS。通过脂质体介导方法将其转染小鼠乳腺癌细胞EMT6,在倒置荧光显微镜下可观察到明亮的绿色荧光分布于阳性细胞,并且RT-PCR检测结果显示,RT-PCR扩增产物与目的基因片段大小相符,证明其确实源于重组质粒转录后的mRNA。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 S基因 乳腺表达载体 小鼠乳腺癌细胞

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小鼠乳腺组织中组织型纤溶酶原激活剂乳腺特异性表达载体的瞬时表达

14

作者 丁一 王峰 +2 位作者 乐晓萍 马开颜 张钦宪 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第3期396-398,共3页

目的 :验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂 (tPA)乳腺特异性表达载体pWTA能否在小鼠乳腺组织中瞬时表达。方法 :采用直接注射法将pWTADNA、pWTADNA/脂质转染胺试剂LipofectamineTM2 0 0 0 复合物及PBS分别注射入妊娠末期小鼠乳腺组织。... 目的 :验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂 (tPA)乳腺特异性表达载体pWTA能否在小鼠乳腺组织中瞬时表达。方法 :采用直接注射法将pWTADNA、pWTADNA/脂质转染胺试剂LipofectamineTM2 0 0 0 复合物及PBS分别注射入妊娠末期小鼠乳腺组织。应用原位杂交技术 ,以地高辛标记的tPAcDNA为探针 ,观察pWTA在小鼠乳腺组织中的瞬时表达。结果 :tPA表达阳性细胞散在分布于pWTADNA及pWTADNA/LipofectamineTM2 0 0 0 复合物注射小鼠部分乳腺腺泡 ,PBS注射组无阳性细胞。结论 展开更多

关键词 组织型纤溶酶原激活剂 小鼠 乳腺 瞬时表达 表达载体

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乳腺定位表达载体在小鼠乳腺中的活性检测

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作者 黄伟民 赖良学 +6 位作者 乔桂林 岳军明 安靓 王凯 付殿国 殷震 李进 《第一军医大学学报》 CSCD 2000年第5期397-398,共2页

目的 检测乳腺定位表达载体在动物乳腺中的表达活力。方法与结果 将乳腺定位表达载体乳清酸蛋白(人组织型纤溶酶原激活剂（WAP-tPA）通过乳腺导管直接注入妊娠后期小鼠的乳腺中，待小鼠产子、泌乳后，检测出小鼠乳汁中tPA的表达量为80 n... 目的 检测乳腺定位表达载体在动物乳腺中的表达活力。方法与结果 将乳腺定位表达载体乳清酸蛋白(人组织型纤溶酶原激活剂（WAP-tPA）通过乳腺导管直接注入妊娠后期小鼠的乳腺中，待小鼠产子、泌乳后，检测出小鼠乳汁中tPA的表达量为80 ng/ml。结论 此方法可以作为从动物整体水平上检测乳腺定位表达载体表达效力的一种简便而有效的方法。 展开更多

关键词 基因转染 乳腺 乳腺定位表达载体 小鼠 WAP-tPA

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利用泌乳乳腺鉴定真核基因表达的研究

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作者 周雪艳 张守峰 +3 位作者 姚伟 任文陟 范志强 扈荣良 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第4期39-42,共4页

为了找到一种新的可用于基因及其表达调控元件鉴定的方法,本试验以蚓激酶(LK)作为目的标志基因,分别构建了在巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、逆转录病毒长末端重复序列(LTR)和beta-酪蛋白启动子调控下的三种真核表达载体pICLK、pLLKSN... 为了找到一种新的可用于基因及其表达调控元件鉴定的方法,本试验以蚓激酶(LK)作为目的标志基因,分别构建了在巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、逆转录病毒长末端重复序列(LTR)和beta-酪蛋白启动子调控下的三种真核表达载体pICLK、pLLKSN和pIbLK.制备各重组质粒后,以泌乳期羊乳腺作为支持系统,在处于稳定泌乳阶段分别注射400～800μg重组质粒于山羊乳腺组织中.在注射后不同时间采集奶汁,检测纤溶活性.结果显示,蚓激酶的不同重组质粒在注射到乳腺组织之后迅速得到表达,注射后6～9h蚓激酶表达量达到高峰,并可持续至72h以上;不同表达载体间表达量略有变化,但无显著差异.这些结果表明,利用泌乳乳腺组织表达真核蛋白是鉴定真核基因表达快速有效的手段之一. 展开更多

关键词 真核基因 泌乳乳腺组织 基因表达 真核蛋白 鉴定方法 蚓激酶

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奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体的构建与鉴定

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作者 曹随忠 姚学萍 +4 位作者 崔亚飞 杨德英 雍康 余树民 刘宗平 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第6期1-7,18,共8页

【目的】构建奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体。【方法】根据GenBank中牛TAP基因cDNA序列(GenBank号:NM_174776)设计引物,从奶牛乳腺组织中RT-PCR扩增TAP基因编码序列,将其克隆到pMD19-T(simple)载体中测序。重组质粒pMD-TAP... 【目的】构建奶牛气管抗菌肽(TAP)基因乳腺特异性表达载体。【方法】根据GenBank中牛TAP基因cDNA序列(GenBank号:NM_174776)设计引物,从奶牛乳腺组织中RT-PCR扩增TAP基因编码序列,将其克隆到pMD19-T(simple)载体中测序。重组质粒pMD-TAP经EcoRⅠ+KpnⅠ双酶切回收目的基因片段,亚克隆到携带增强型绿色荧光蛋白的通用型乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP中,采用脂质体法转染奶牛乳腺上皮细胞(bMEC)、COS-7细胞,并注射泌乳家兔乳腺组织,荧光显微镜检测转染细胞中绿色荧光蛋白的表达,半定量RT-PCR检测家兔乳腺组织中TAP mRNA的表达。【结果】成功构建了乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP-TAP,该载体可在bMEC中特异性地表达绿色荧光蛋白;半定量RT-PCR检测发现,转染pBLG-EGFP-TAP可显著提高家兔乳腺组织中TAPmRNA的表达水平。【结论】成功构建了乳腺特异性表达载体pBLG-EGFP-TAP,为进一步研究奶牛TAP基因的表达特性及利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供了重要材料。 展开更多

关键词 奶牛 乳房炎 Β-防御素 气管抗菌肽基因 乳腺特异性表达载体

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一种乳腺特异性表达载体的构建

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作者 刘建忠 周丽芳 +1 位作者 朱艳君 马季骅 《化学与生物工程》 CAS 2005年第12期11-13,共3页

以兔乳清酸性蛋白基因启动子(rWAP,6.3 kb)、兔乳清酸性蛋白基因终止子(200 bp)和人瘦蛋白基因(cDNA,1.0 kb)经过一系列的亚克隆操作,构建了一种通用性的乳腺特异性表达载体,从而为通过转基因小鼠动物模型表达外源基因提供了极大的方便。

关键词 兔乳清酸性蛋白基因启动予 免乳清酸性蛋白基因终止子 乳腺特异性表达栽体

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乳腺特异表达载体缺失片段的鉴定与修复

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作者 房希碧 刘晶 +2 位作者 刘一诺 卢春燕 赵志辉 《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2010年第3期228-231,共4页

通过对pBC1中的乳腺特异表达启动子成分进行分析,鉴定了位于β酪蛋白启动子上游两个EcoRⅠ位点(-89^-94和-120^-125)之间的缺失片段,31bp的缺失使得该载体中的一个乳控盒元件(-112^-141)和一个乳腺因子识别序列(-92^-102)遭到破坏,并使... 通过对pBC1中的乳腺特异表达启动子成分进行分析,鉴定了位于β酪蛋白启动子上游两个EcoRⅠ位点(-89^-94和-120^-125)之间的缺失片段,31bp的缺失使得该载体中的一个乳控盒元件(-112^-141)和一个乳腺因子识别序列(-92^-102)遭到破坏,并使得位于TATA框上游的所有启动子成分发生了位置改变。通过与山羊β酪蛋白启动子序列进行比较,设计并合成了缺失片段,经一系列的酶切和连接处理,使得该缺失得到了修复,修复后的载体具有所有乳蛋白表达需要的启动子调控原件。本试验结果为利用修复后的乳腺特异高效表达载体进行乳腺生物反应器的研究奠定了分子生物学基础。 展开更多

关键词 乳腺特异表达载体 β酪蛋白 启动子 修复

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转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选

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作者 王春生 李咏乐 +2 位作者 仇雨歌 朴善花 安铁洙 《安徽农业科学》 CAS 2014年第24期8099-8101,8166,共4页

[目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法。[方法]将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以期获得转基因阳性细胞。[结果]采用脂质体法转染山羊成纤维细胞... [目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法。[方法]将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以期获得转基因阳性细胞。[结果]采用脂质体法转染山羊成纤维细胞后,通过最适G418浓度(400μg/ml)筛选获得转基因阳性细胞;转基因阳性细胞形态呈现梭形且核仁清晰,其生长曲线呈现正常的"S";转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍呈现与冷冻前新鲜转基因细胞相似的形态和生长曲线;PCR鉴定结果表明,STP-pBC1已整合入转基因细胞的基因组中。[结论]成功获得乳腺特异的转甜味蛋白基因Brazzein的山羊成纤维细胞株。 展开更多

关键词 山羊 乳腺特异表达载体 BRAZZEIN基因 转基因细胞

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